La trasfezione – il processo di trasferimento di materiale genetico nelle cellule – è un potente strumento per la manipolazione rapida ed efficiente dell’espressione genica nelle cellule. Poiché questo metodo può essere utilizzato per silenziare l’espressione di proteine specifiche o per guidare l’espressione di proteine estranee o modificate, la trasfezione è uno strumento estremamente utile nello studio dei processi cellulari e molecolari che governano la funzione neuronale. Tuttavia, i neuroni maturi hanno una serie di proprietà che li rendono difficili da trasfezionare, quindi sono necessarie tecniche specializzate per la manipolazione genetica di questo tipo di cellula.
Questo video esamina i principi e la logica alla base dei neuroni trasfetturanti. Vengono discusse tre strategie comuni per la trasfezione neuronale, tra cui nucleofezione, gene-gun e trasduzione virale. Oltre a descrivere come ciascuna di queste tecniche supera le sfide associate alla trasfezione dei neuroni, la presentazione include una descrizione di come vengono eseguiti tutti e tre i metodi. Infine, vengono introdotte diverse applicazioni della trasfezione neuronale, come l’espressione di proteine fluorescenti di tubulina per visualizzare la morfologia dei neuroni e il silenziamento genico selettivo per generare un modello di coltura cellulare del morbo di Parkinson.
Procédure
La trasfezione – il trasferimento di materiale genetico nelle cellule di mammifero – è uno strumento prezioso che consente agli scienziati di manipolare geneticamente i neuroni e il tessuto neuronale. Le proprietà uniche delle cellule delicate rendono la trasfezione impegnativa e richiedono tecniche specializzate. Questo video esaminerà i principi alla base della trasfezione dei neuroni e introdurrà strategie comunemente utilizzate su queste cellule, tra cui nucleofezione, trasfezione biolistica e trasduzione v…