A interferência de RNA (RNAi) é uma técnica amplamente utilizada na qual o RNA de duplar encalha é exogenoumente introduzido em um organismo, causando o knockdown de um gene alvo. No nematode, C. elegans, RNAi é particularmente fácil e eficaz porque pode ser entregue simplesmente alimentando as bactérias vermes que expressam RNA duplo encalhado (dsRNA) que é complementar a um gene de interesse. Primeiro, este vídeo introduzirá o conceito de interferência de RNA e explicará como ele causa knockdown genético direcionado. Em seguida, demonstraremos um protocolo para o uso de RNAi em C. elegans,que inclui a preparação das bactérias e placas de verme RNAi, cultivo dos vermes, e como avaliar os efeitos do RNAi sobre os vermes. O RNAi é frequentemente usado para realizar telas genéticas reversas, a fim de revelar quais genes são importantes para realizar processos biológicos específicos. Além disso, telas genéticas reversas automatizadas permitem a derrubada eficiente e a análise de uma grande coleção de genes. Por fim, a RNAi é frequentemente usada para estudar o desenvolvimento de C. elegans. Desde sua descoberta, os cientistas têm usado a RNAi para fazer um tremendo progresso na compreensão de muitos fenômenos biológicos.
Procédure
A interferência de RNA, ou RNAi, é uma técnica amplamente utilizada na qual o RNA duplo encalhado é introduzido a um organismo, resultando em silenciamento genético direcionado. A descoberta vencedora do Nobel da interferência do RNA permitiu que os pesquisadores silenciem qualquer gene C. elegans, a fim de determinar sua função. Podemos induzir RNAi em C. elegans preparando primeiro placas com E. coli que expressam gene dsRNA, que os vermes vão comer. Em seguida, vermes de estágio 4 são tra…