Purificação plasmida é uma técnica usada para isolar e purificar DNA plasmídeo do DNA genômico, proteínas, ribossomos e a parede celular bacteriana. Um plasmídeo é um DNA pequeno, circular e de dois fios que é usado como portador de moléculas específicas de DNA. Quando introduzido em um organismo hospedeiro via transformação, um plasmídeo será replicado, criando numerosas cópias do fragmento de DNA em estudo.
Neste vídeo, um procedimento generalizado passo a passo é descrito como realizar a purificação plasmida. A purificação plasmida inclui três passos básicos: crescimento da cultura bacteriana, colheita e lise das bactérias, e purificação do DNA plasmídeo. O vídeo contém uma explicação onde o plasmídeo pode ser encontrado em cada etapa do protocolo e analisar quantitativa e qualitativamente DNA plasmídeo com um espectotómetro e/ou eletroforese gel. Existem diferentes tipos de métodos de purificação plasmídeos disponíveis, que são voltados para o rendimento desejado, número de cópia plasmida e volume de cultura bacteriana.
Procédure
Plasmídeos são circulares, cromossômicos extras, moléculas de DNA e na biologia molecular atuam como portadores, ou vetores, para um fragmento específico de DNA. Bactérias são usadas para replicar plasmídeos, de modo que seu DNA de interesse é produzido em massa. O processo pelo qual os pesquisadores obtêm plasmídeos de bactérias é chamado de purificação plasmida, que será explicado neste vídeo. Obviamente, purificação plasmida envolve purificar plasmídeos, mas o que i…