Summary

Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

Published: December 01, 2023
doi:

Summary

Ce protocole fournit des informations techniques pour la reconstruction vasculaire à l’aide de la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris.

Abstract

La transplantation hépatique orthotopique de souris est une méthodologie efficace pour étudier les mécanismes sous-jacents de l’ischémie hépatique et des lésions de reperfusion. Cependant, les défis techniques constituent un obstacle à l’utilisation de ce précieux modèle expérimental et à la transmission de ces compétences à la prochaine génération. L’aspect le plus difficile de cette procédure est la reconstruction vasculaire, y compris la veine porte (PV), la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC) et la veine cave inférieure suprahépatique. L’utilisation de brassards en plastique, plutôt que de sutures, permet une reconstruction PV et IHIVC plus fluide. Les vaisseaux sont reconstruits en fixant un brassard fabriqué à partir d’un cathéter intraveineux à l’extrémité du vaisseau greffé et en interposant le brassard dans le vaisseau receveur. Les deux aspects les plus cruciaux sont de visualiser correctement la lumière interne du vaisseau et d’éviter l’utilisation d’une force excessive. Notre objectif est de fournir un aperçu technique des reconstructions vasculaires à l’aide de la technique du brassard en chirurgie du receveur. Ces conseils techniques pour la technique du brassard devraient aider les microchirurgiens à faciliter la reconstruction vasculaire et à faire avancer leurs recherches.

Introduction

La transplantation hépatique orthotopique de souris (MOLT) est une méthode expérimentale efficace signalée pour la première fois en 19911. Ce modèle expérimental, qui utilise des souris génétiquement modifiées et divers réactifs de recherche, a joué un rôle central dans l’étude de l’ischémie chaude et froide et des lésions de reperfusion. Cependant, la grande complexité technique du modèle a entravé le développement d’une médecine de base pour la transplantation hépatique2. La MOLT comporte trois étapes principales : (1) le prélèvement du foie de la souris donneuse, (2) la chirurgie de la table arrière et (3) l’implantation du foie chez le receveur. Parmi ces procédures de receveur, l’anastomose vasculaire pose le plus grand défi. Alors que l’anastomose de la veine cave inférieure suprahépatique est généralement complétée par une couture à la main2, la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC) et la veine porte (PV) peuvent être reconstruites plus efficacement à l’aide de brassards en plastique au lieu de sutures cousues à la main.

La période anhépatique signifie l’intervalle entre l’ablation du foie natif du receveur et l’implantation du greffon. Pour garantir des résultats cohérents, il est impératif de limiter le temps anhépatique à moins de 20 min. Par conséquent, les études utilisant ce modèle ont été limitées à des institutions spécifiques 3,4,5,6,7,8,9. Parmi les différentes étapes de la MOLT, la réalisation d’une reconstruction PV et IHIVC en douceur est cruciale pour minimiser le temps anhépatique et assurer la réussite de la transplantation.

La reconstruction PV et IVC est généralement réalisée à l’aide de brassards vasculaires puisque la technique du brassard simplifie l’anastomose vasculaire par rapport aux sutures cousues à la main 2,5,8. La technique impliquée dans la préparation du brassard vasculaire et la fixation sécurisée du brassard a un impact significatif sur la complexité de la reconstruction vasculaire du receveur. Notre objectif est de fournir un guidage visuel détaillé pour de nombreux conseils techniques liés à la méthode du brassard, réduisant ainsi la courbe d’apprentissage. Ces clips vidéo permettront de bien comprendre comment fixer le brassard aux vaisseaux et reconstruire le PV et l’IHIVC pendant la chirurgie du receveur.

Protocol

Le protocole expérimental a été approuvé par le Comité d’expérimentation animale de l’Université de Kyoto. L’étude a utilisé des souris C57BL/6, âgées de plus de 10 semaines et pesant entre 25 g et 30 g, obtenues d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux). Tous les animaux ont été anesthésiés avec de l’isoflurane à 2,5 % (selon les protocoles approuvés par l’établissement), maintenus dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes, et toutes l…

Representative Results

La reconstruction PV est réussie lorsque, lors du déclampage de la veine porte, il n’y a pas de tortuosité et que le foie est uniformément perfusé. Le temps anhépatique doit être inférieur à 20 min, car le temps anhépatique supérieur à 25 min augmente le risque de mortalité chez la souris. La reconstruction de l’IHIVC est considérée comme réussie s’il n’y a pas de régurgitation sanguine du greffon. Le stockage du greffon à des températures froides pendant 1 h à l’…

Discussion

L’apprentissage de la reconstruction vasculaire est l’aspect le plus difficile de la réussite de la MOLT. La qualité du brassard influence considérablement la difficulté de la reconstruction, compte tenu de la petite taille de la souris5. Cet article fournit un protocole détaillé pour la préparation, la fixation et la reconstruction du brassard.

Bien qu’il n’y ait pas de différences majeures par rapport aux rapports précédents c…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu par la recherche fondamentale 2022 JST (The Japanese Society for Transplantation).

Materials

16 G intravenous catheter TERUMO SR-FF2032 IHIVC cuff
20 G intravenous catheter TERUMO SR-FF1651 PV cuff
8-0 braid silk Natsume Seisakusho CR9-80B2 8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution  Astellas Organ preservation fluid
Bulldog clamp B BRAUN FB329R Bulldog clamp
C57BL/6 mice   Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution Viatris Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm  F.S.T 11253-20 Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock F.S.T 18056-14 Vessel clip applicator
Micro Serrefines  F.S.T 18055-4 Vessel clip
No.11 Spare Blades FEATHER Safety Razor 11 Blades
Ophthalmic scissor, round handle B BRAUN FD103R Microscissor
Plastic rectangular-shaped container   Daiso 10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips F.S.T 00649-11  Curved microforceps
SZX7 Olympus SZX7 Microscope

References

  1. Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
  2. Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).
  3. Shen, X. D., et al. Inflammatory responses in a new mouse model of prolonged hepatic cold ischemia followed by arterialized orthotopic liver transplantation. Liver Transpl. 11 (10), 1273-1281 (2005).
  4. Kageyama, S., et al. Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury. Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).
  5. Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model. World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).
  6. Tian, Y., Rüdiger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model. Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).
  7. Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).
  8. Chen, J., et al. A review of various techniques of mouse liver transplantation. Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).
  9. Kojima, H., et al. T cell carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1-T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 3 cross talk alleviates liver transplant injury in mice and humans. Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248 (2023).
  10. Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance. Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).

Play Video

Citer Cet Article
Tanaka, K., Uchida, Y., Kageyama, S., Nakamura, K., Hirao, H., Kadono, K., Kawamoto, H., Saga, K., Kidoguchi, Y., Watanabe, T., Hatano, E. Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation. J. Vis. Exp. (202), e66215, doi:10.3791/66215 (2023).

View Video