L’article présente des méthodes de culture larvaire du gastéropode Crepidula fornicata dans un système à l’échelle du laboratoire de petit volume et dans un système de mésocosme d’eau de mer ambiante qui peut être déployé sur le terrain.
Le mollusque gastéropode calyptréide, Crepidula fornicata, a été largement utilisé pour l’étude de la biologie du développement larvaire, de la physiologie et de l’écologie. Les larves véligères couvées de cette espèce ont été récoltées par siphonnage sur un tamis après leur libération naturelle par les adultes, distribuées dans la culture à une densité de 200/L et nourries avec Isochrysis galbana (souche T-ISO) à raison de 1 x 105 cellules/mL. La croissance de la coquille et l’acquisition de la compétence pour la métamorphose ont été documentées chez des larves sœurs élevées dans des cultures ventilées de 800 mL conçues pour s’équilibrer à l’air ambiant ou à des mélanges de gaz atmosphériques définis. Contrastant avec ces conditions de culture en laboratoire ; Des données sur la croissance et la compétence ont également été recueillies pour des larves élevées dans un mésocosme d’eau de mer ambiante de 15 L situé dans une population de champs d’adultes reproducteurs. Les taux de croissance et le moment de la compétence métamorphique dans les cultures de laboratoire étaient similaires à ceux rapportés dans des études publiées précédemment. Les larves élevées dans le mésocosme sur le terrain ont grandi beaucoup plus rapidement et se sont métamorphosées plus tôt que ce qui a été rapporté pour les études de laboratoire. Ensemble, ces méthodes sont adaptées à l’exploration du développement larvaire dans des conditions contrôlées prédéterminées en laboratoire ainsi que dans des conditions naturelles sur le terrain.
La patelle pastel, Crepidula fornicata (Gastropoda : Calyptraeidae), est bien représentée dans la littérature de recherche actuelle et historique en raison de son utilité en tant que modèle de développement et de ses impacts généralisés en tant qu’espèce envahissante. Il a servi d’exemple fondamental de développement spiralique à l’ère classique de l’embryologie expérimentale1 et a connu un regain d’intérêt avec l’application de l’imagerie moderne et des outils génomiques pour disséquer les mécanismes du développement précoce des lophotrochozoaires 2,3. À l’autre extrémité de son cycle biologique, d’autres recherches ont porté sur les impacts des populations adultes de cet ingénieur de l’écosystème dans des environnements marins côtiers tempérés très éloignés de son aire de répartition d’origine dans l’est de l’Amérique du Nord 4,5. Entre l’embryon et l’adulte, les larves véligères de cette espèce ont fait l’objet de nombreuses études sur le développement et l’écologie des larves, en particulier sur les facteurs influençant la croissance et l’acquisition de la compétence pour la métamorphose, les indices internes et externes médiateurs de l’établissement larvaire, et les effets de l’expérience larvaire sur les performances juvéniles 6,7,8,9,10,11 . Des études récentes ont révélé la résilience des larves et des juvéniles de C. fornicata à l’acidification des océans, une autre voie pour une utilisation productive de cet animal à des fins de recherche 12,13,14,15,16.
Un avantage de C. fornicata pour les études de biologie larvaire marine est qu’il est relativement facile de le cultiver en laboratoire dans de l’eau de mer naturelle ou artificielle avec un régime unialgal du flagellé Isochrysis galbana. Les méthodes de culture ont été détaillées par l’auteur dans une publication imprimée antérieure axée sur les méthodes17. Les raisons de cette contribution sont doubles. Tout d’abord, les manœuvres physiques de routine impliquées dans l’établissement et l’entretien des cultures sont conceptuellement très simples, mais difficiles à réaliser correctement sans démonstration pratique ou vidéo. Deuxièmement, deux variantes des méthodes de culture décrites précédemment sont décrites qui sont particulièrement adaptées aux études en laboratoire et sur le terrain des réponses aux facteurs de stress environnementaux tels que l’acidification des océans, l’eutrophisation et l’épuisement de l’oxygène. Le premier est un système de culture à faible volume (800 ml) adapté à la manipulation du pH et de l’oxygène dissous dans l’eau de mer via de petits volumes de gaz à bulles, et le second est un système de mésocosme de plus grand volume (15 L) qui peut être placé sur le terrain et qui permet le libre échange de l’eau de mer ambiante.
Bien que les larves de C. fornicata soient relativement faciles à élever par rapport à d’autres larves marines planctotrophes, l’attention portée aux principes fondamentaux d’une bonne pratique d’élevage reste essentielle17,19. Les larves saines devraient commencer à se nourrir immédiatement après l’éclosion. Ceci est facilement vérifié le lendemain de l’éclosion en observant leurs intestins pleins, remplis de cellules d’algues,…
The authors have nothing to disclose.
Le développement initial du système de culture ventilée à faible volume a été soutenu en partie par la National Science Foundation (CRI-OA-1416690 au Dickinson College). Lauren Mullineaux, Ph. D., a aimablement fourni des installations de laboratoire à l’Institut océanographique de Woods Hole, où les données présentées pour ce système (figure 4) ont été recueillies.
Bucket, Polyethylene, 7 gallon | US Plastic | 16916 | for mesocosm |
Crepidula fornicata | Marine Biological Laboratory, Marine Resources Center | 760 | adult broodstock |
Hotmelt glue, Infinity Supertac 500 | Hotmelt.com | INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB | good for bonding polyethylene |
Jar, glass, 32 oz, with polypropylene lid | Uline | S-19316P-W | for 800 mL ventilated cultures |
Nitex mesh, 236 µm | Dynamic Aqua Supply Ltd. | NTX236-136 | for mesocosm |
Nut, hex, nylon, 10-32 thread | Home Depot | 1004554441 | for fastening tubing barbs |
Rivets, nylon, blind, 15/64" diameter, 5/32"-5/16" grip range, pack of 8 | NAPA auto parts | BK 6652844 | 4 packs needed per mesocosm |
Tubing barb 1/8" x 10-32 thread | US Plastic | 65593 | 2 needed per culture jar |
Tubing, polyethylene, 2.08 mm OD | Fisher Scientific | 14-170-11G | for ventilating gas stream inside culture jar |
Tubing, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32" | US Plastic | 57810 | fits barbs for ventilating cultures |