P3HR1細胞株からのエプスタインバーウイルスの単離と定量

エプスタインバーウイルス(EBV)は、単離された最初のヒト腫瘍ウイルスです¹。正式には ヒトヘルペスウイルス4 (HHV-4)²と呼ばれるEBVは、ヘルペスウイルスファミリーのガンマヘルペスウイルスサブファミリーの一部であり、 リンフォクリプトウイルス 属のプロトタイプです。世界の成人人口のほぼ90〜95%がウイルスに感染しています³。ほとんどの場合、最初の感染は生後3年以内に発生し、無症候性ですが、青年期に感染が後期に発生すると、感染性単核球症と呼ばれる病気を引き起こす可能性があります⁴。EBVは、休止中のB細胞に感染して増殖性Bリンパ芽球になり、ウイルスが潜伏感染状態を確立し維持することができます⁵。EBVはいつでも再活性化する可能性があるため、再発性感染症につながる可能性があります⁶。

過去50年間で、一部のウイルスとヒト悪性腫瘍の発症との関連がますます明らかになり、今日では、すべてのヒト癌の15%から20%がウイルス感染に関連していると推定されています⁷。EBVを含むヘルペスウイルスは、これらのタイプの腫瘍ウイルスの最も研究された例のいくつかです⁸。実際、EBVは、バーキットリンパ腫(BL)、ホジキンリンパ腫(HL)、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、および免疫不全宿主におけるリンパ増殖性疾患など、多くの種類のヒト悪性腫瘍を引き起こす可能性があります^9,10。EBVはまた、全身性自己免疫疾患の発症と関連していることが示されている。これらの自己免疫疾患の例としては、関節リウマチ(RA)、多発性筋炎皮膚筋炎(PM-DM)、全身性エリテマトーデス(SLE)、混合結合組織疾患(MCTD)、シェーグレン症候群(SS)^{などがあります11}。EBVは炎症性腸疾患(IBD)¹²の発症にも関連しています。

これらの疾患の多くは、細胞培養、マウス、またはEBVに感染した他の生物を使用して研究またはモデル化することができます。そのため、in vitroまたはin vivoモデル^13,14,15,16にかかわらず、細胞または生物に感染するためにEBV粒子が必要であり、したがって、低コストでウイルス粒子を単離できる技術を開発する必要があります。ここで説明するプロトコルは、比較的アクセスしやすい細胞株からEBV粒子を確実に分離し、費用対効果が高く、ほとんどのラボですぐに利用できるリアルタイムPCRを使用して粒子を定量する簡単な方法のガイドラインを提供します。これは、異なる細胞株からEBVを単離するために記載されているいくつかの他の方法と比較した^{ものである17}、^18、19、20。

P3HR-1は、浮遊状態で増殖し、EBV2型株に潜伏感染するBL細胞株です。この細胞株はEBV産生剤であり、ウイルス粒子を産生するように誘導することができる。この原稿の目的は、P3HR-1細胞株からEBV粒子を単離し、その後、 in vitro および in vivo の両方のEBV実験モデルに使用できるウイルスストックを定量する方法を紹介することです。