O protocolo demonstra um método conveniente para produzir fluxo oscilatório harmônico de 10-1000 Hz em microcanais. Isso é realizado interligando um diafragma de alto-falante controlado por computador ao microcanal de forma modular.
A tecnologia microfluidica tornou-se uma ferramenta padrão em laboratórios químicos e biológicos para análise e síntese. A injeção de amostras líquidas, como reagentes químicos e culturas celulares, é predominantemente realizada através de fluxos constantes que são tipicamente impulsionados por bombas de seringa, gravidade ou forças capilares. O uso de fluxos oscilatórios complementares raramente é considerado em aplicações, apesar de suas inúmeras vantagens como demonstrado recentemente na literatura. A significativa barreira técnica para a implantação de fluxos oscilatórios em microcanais é provavelmente responsável pela falta de sua adoção generalizada. Bombas de seringa comercial avançadas que podem produzir fluxo oscilatório, muitas vezes são mais caras e só funcionam para frequências inferiores a 1 Hz. Aqui, demonstra-se a montagem e a operação de um aparelho baseado em alto-falantes de baixo custo, baseado em alto-falantes do tipo plug-and-play que gera fluxo oscilatório em microcanais. Fluxos oscilatórios harmônicos de alta fidelidade com frequências que variam de 10 a 1000 Hz podem ser alcançados juntamente com controle de amplitude independente. Amplitudes que variam de 10 a 600 μm podem ser alcançadas em toda a gama de operação, incluindo amplitudes > 1 mm na frequência ressonante, em um microcanal típico. Embora a frequência de oscilação seja determinada pelo alto-falante, ilustramos que a amplitude de oscilação é sensível às propriedades fluidas e à geometria do canal. Especificamente, a amplitude de oscilação diminui com o aumento do comprimento do circuito do canal e a viscosidade líquida, e em contraste, a amplitude aumenta com o aumento da espessura e comprimento do tubo de alto-falante. Além disso, o aparelho não requer recursos prévios para serem projetados no microcanal e é facilmente destacável. Pode ser usado simultaneamente com um fluxo constante criado por uma bomba de seringa para gerar fluxos pulsantes.
O controle preciso da taxa de fluxo líquido em microcanais é crucial para aplicações de laboratório em um chip, como produção de gotículas e encapsulamento1, mistura 2,3, e a classificação e manipulação de partículas suspensas 4,5,6,7. O método predominantemente utilizado para o controle de fluxo é uma bomba de seringa que produz fluxos estáveis altamente controlados dispensando um volume fixo de líquido ou uma taxa de fluxo volumétrico fixo, muitas vezes limitado ao fluxo totalmente unidirecional. Estratégias alternativas para a produção de fluxo unidirecional incluem o uso da cabeça gravitacional8, forças capilares9 ou fluxo eletro-osmótico10. As bombas de seringa programáveis permitem um controle bidirecional dependente do tempo das taxas de fluxo e volumes dispensados, mas limitam-se a tempos de resposta superiores a 1 s devido à inércia mecânica da bomba de seringa.
O controle de fluxo em escalas de tempo mais curtas desbloqueia uma infinidadede 6,11,12,13,14,15 de outras possibilidades inacessíveis devido a mudanças qualitativas na física do fluxo. O meio mais prático de aproveitar essa física de fluxo variado é através de ondas acústicas ou fluxos oscilatórios com períodos de tempo que variam de 10-1– 10-9 s ou 101 -109 Hz. A extremidade superior desta faixa de frequência é acessada usando dispositivos de onda acústica a granel (BAW; 100 kHz-10 MHz) e ondas acústicas superficiais (SAW; 10 MHz-1 GHz). Em um dispositivo BAW típico, todo o substrato e a coluna de fluido são vibrados aplicando um sinal de tensão através de uma piezoelétrica ligada. Isso permite rendimentos relativamente altos, mas também resulta em aquecimento em amplitudes mais altas. Nos dispositivos SAW, no entanto, a interface líquido-sólido é oscilada aplicando tensão a um par de eletrodos interdigitados padronizados em um substrato piezoelétrico. Devido aos comprimentos de onda muito curtos (1 μm-100 μm) partículas tão pequenas quanto 300 nm podem ser precisamente manipuladas pela onda de pressão gerada em dispositivos SAW. Apesar da capacidade de manipular pequenas partículas, os métodos SAW estão limitados à manipulação de partículas locais, uma vez que a onda atenua rapidamente com distância da fonte.
Na faixa de frequência de 1-100 kHz, os fluxos oscilatórios são geralmente gerados usando elementos piezo que são ligados a um microcanal polidimetilsiloxano (PDMS) acima de uma cavidadeprojetada 16,17. A membrana PDMS acima da cavidade padronizada se comporta como uma membrana vibrante ou tambor que pressuriza o fluido dentro do canal. Nesta faixa de frequência, o comprimento de onda é maior do que o tamanho do canal, mas as amplitudes de velocidade de oscilação são pequenas. O fenômeno mais útil nesse regime de frequência é a geração de fluxos de fluxo acústico/viscoso, que são fluxos estáveis corrigidos causados pela não linearidade inerente ao fluxo de líquidos com inércia18. Os fluxos de fluxo constantes normalmente se manifestam como vórtices de alta velocidade nas proximidades de obstáculos, cantos afiados ou micro-bolhas. Estes vórtices são úteis para misturar19,20 e separar partículas de tamanho de 10 μm da corrente de fluxo21.
Para frequências na faixa de 10-1000 Hz, tanto a velocidade do componente oscilatório quanto seu fluxo viscoso estável associado são consideráveis em magnitude e útil. Fortes fluxos oscilatórios nesta faixa de frequência podem ser usados para focalizar inercial22, facilitar a geração de gotículas23, e pode gerar condições de fluxo (números de Womersley) que imitam o fluxo sanguíneo para estudos in vitro . Por outro lado, os fluxos de streaming são úteis para mistura, captura de partículas e manipulação. O fluxo oscilatório nesta faixa de frequências também pode ser realizado usando um elemento piezo ligado ao dispositivo como descrito acimade 23. Um obstáculo significativo para implementar fluxos oscilatórios através de um elemento piezo ligado é que ele requer recursos para serem projetados com antecedência. Além disso, os elementos do alto-falante ligados não são destacáveis, e um novo elemento deve ser ligado a cada dispositivo24. No entanto, tais dispositivos apresentam a vantagem de serem compactos. Um método alternativo é o uso de uma válvula de relé eletromecânica20. Essas válvulas requerem fontes de pressão pneumática e software de controle personalizado para operação e, portanto, aumentam a barreira técnica para testes e implementação. No entanto, tais dispositivos permitem a aplicação de amplitude e frequência de pressão definida.
Neste artigo, descreve-se a construção, operação e caracterização de um método fácil de usar para gerar fluxos oscilatórios na faixa de frequência de 10-1000 Hz em microcanais. O método oferece inúmeras vantagens, como montagem econômica, facilidade de operação e pronto para interagir com canais microfluidos padrão e acessórios, como bombas de seringa e tubos. Além disso, em comparação com abordagens similares anteriores25, o método oferece ao usuário controle seletivo e independente de frequências e amplitudes de oscilação, incluindo a modulação entre formas de onda sinusoidal e não sinusoidal. Esses recursos permitem que os usuários implantem facilmente fluxos oscilatórios e, portanto, facilitem a adoção generalizada em uma ampla gama de tecnologias e aplicações microfluidas existentes atualmente nas áreas de biologia e química.
Demonstramos o conjunto (ver protocolo passos críticos 3 e 4) e operação (ver protocolo passos críticos 5 e 6) de um aparelho externo baseado em alto-falantes para a geração de fluxo oscilatório com frequências na faixa de 10 a 1000 Hz em dispositivos microfluidos. O rastreamento de partículas de partículas suspensas é necessário para determinar a fidelidade do movimento harmônico, bem como para calibrar a amplitude de oscilação alcançável ao longo da faixa de frequências operacionais. A curva de amplit…
The authors have nothing to disclose.
Gostaríamos de reconhecer o apoio dado e as instalações fornecidas pelo Departamento de Ciência Mecânica e Engenharia Rapid Prototyping Lab da Universidade de Illinois para viabilizar este trabalho.
Oscillatory Driver Assembly | |||
Alligator-to-pin wire | Adafruit | 3255 | Small alligator clip to male jumper wire (12) |
Aux cable | Adafruit | 2698 | 3.5 mm Male/Male stereo cable 1 m |
Controller chip | Damgoo | TPA3116 | 50w+50w 2 channel audio amplifier (bluetooth and AUX) |
DC adapter | Adafruit | 798 | 12 V DC 1A regulated switching power adapter |
Micro-pipette tip | VWR Signature | 37001-532 | 200 ul micropipette tip |
Silicone sealant | Loctite | 908570 | Clear silicone waterproof sealant (80 ml) |
Speaker | Drok | 6843996 | 4.5 inch 4 Ohm 40 W speaker |
Speaker mount | 3D printed from 'speakermount.stl' in supplementary files | ||
Speaker-to-tube adapter | 3D printed from 'speaketubeadapter.stl' in supplementary files | ||
Microchannel Manufacture | |||
Biopsy punch | Miltex | 15110 | Biopsy punch with plunger (1 – 4 mm) |
Degasser | |||
Disposable cup | |||
Disposable spoon | |||
Glass Slides | VWR Signature | 16004-430 | 3" x 1" pre clean 1 mm thick |
Mold | Si – SU-8 or 3D printed | ||
Oven | Fischer Scientific | Isotemp | |
PDMS resin and cross-linker | Dow Chemical | 4019862 | Sylgard 184 PDMS resin and crosslinker (500 g) |
Polyethylene tubing | Becton Dickinson Intramedic | 427440 | Polyethylene tubing (PE 60 – PE 200) |
Razor blades | VWR | 55411-050 | Single edge industrial razor blades |
RF plasma generator | Electro-Technic Products | BD – 20 | High frequency generator |
Silicone Mold Release | CRC | 03301 | Food Grade Silicon Mold release (16 oz) |
Observation and Characterization | |||
Camera | Edgertronic | SC2+ | |
Lens | Nikon | Plan Fluor 10x | |
Microscope | Nikon | Ti Eclipse manual stage | |
Needles | Becton Dickinson | 305175 | PrecisionGlide 20G |
Syringe | Becton Dickinson | 1180100555 | Monoject 1 ml |
Syringe pump | Harvard Apparatus | Dual syringe programmable syringe pump | |
Tracer Particles | Spherotech | PP-10-10 | Polystyrene tracer particles 1 um |