Cellelegemene til vagal afferents finnes i jugular, petrosal og nodose ganglia^1,2,3. Deres axoner reiser sammen via flere grener av vagusnerven til kraniocervical, thoracic og abdominal territorier^4,5,6,7. Fra deres viscerale avslutninger kan vagal afferents reagere på et bredt spekter av fysiologiske og skadelige stimuli^8,9,10. Fordelingen av signalmolekyler og reseptorer involvert i vagal sensing er imidlertid fortsatt dårlig karakterisert. Dette skyldes delvis at vagal ganglia, til tross for sin lille størrelse, uttrykker et bredt spekter av reseptorer, inkludert et stort antall GPCRs^8,11,12,13. Videre er vagal afferent nevroner iboende heterogene og viser distinkte molekylære profiler¹⁴. For å komplisere saken er jugularet, petrosal og nodose ganglia festet i musen, og danner dermed en enkelt gangionisk masse. Til slutt, i en undergruppe av dyr, er nodose ganglion festet til den sympatiske overlegne Cervical ganglion¹⁵.

Tidligere har etterforskere vendt seg til immunhiistokjemi for å studere den nevrokjemiske sminken av vagal afferent nevroner^16,17,18. Mens immunhiistokjemi ved hjelp av validerte antistoffer er nyttig, må resultatene av immunhiistokjemiske studier tolkes med forsiktighet. For eksempel har mange anstrengelser for å identifisere spesifikke antistoffer mot GPCRs mislyktes^{19,20,21,22,23,24,25}, noe som fører til at etterforskere konkluderer med at flertallet av antistoffer mot GPCRs er upålitelige. For å omgå disse problemene har kvantitativ PCR (qPCR) blitt mye brukt til å vurdere genuttrykk i gnager vagal ganglionic mass^26,27,28,29. Imidlertid skjer undersøkelse av genuttrykk ved hjelp av qPCR på bekostning av tap av romlig informasjon. Spesielt kan det ikke forutsies hvor mange celler eller hvilke celletyper som uttrykker et bestemt gen av interesse (f.eks. nodose vs. jugularceller). Tilbakevendende problemer inkluderer også forurensning med tilstøtende vev og inkludering av variable lengder av vagusnerven, overlegen cervical og jugular ganglia under disseksjon¹⁵. Som et resultat av de ovennevnte vanskelighetene omgir kontroverser uttrykket og distribusjonen av flere GPCRs i vagal afferent nevroner. Et spesielt forvirrende eksempel er ghrelinreseptoren (Ghsr). Mens noen studier har funnet utbredt uttrykk for denne reseptoren i vagal afferent nevroner^30,31,32, andre har funnet Ghsr mRNA å være nesten uoppdagelig i nodose ganglion^11,14. Detaljert kartlegging av Ghsr mRNA i vagal ganglionic mass er derfor berettiget.

In situ hybridisering (ISH) har også blitt brukt til å vurdere genuttrykksmønstre i vagal ganglionic mass^{7,11,12,33,34,35}. Fordi RNA-baserte teknikker forblir mer pålitelige og spesifikke enn antistoffbaserte teknikker under de fleste omstendigheter^36,37, har ISH-studier vist seg verdifulle for bedre forståelse av nevrokjemisk koding av vagal afferent nevroner. Likevel er tradisjonelle ISH-teknikker i seg selv ikke uten forbehold. Radioaktiv ISH er følsom, men genererer bakgrunn og forblir tungvint³⁸. Ikke-radioaktiv ISH er mindre komplisert, men også mindre følsom³⁸. Derimot er den nylig utviklede RNAscope ISH-metoden svært følsom og genererer minimal bakgrunn³⁹. Den nåværende studien anvendte multipleks fluorescerende RNAscope til påvisning av GPCRs i vagal afferent neuroner av musen. Vi fokuserte på å kartlegge fordelingen av Ghsr og sammenlignet distribusjonen med kolecystokininreseptoren (Cck1r), en annen GPCR kjent for å bli uttrykt i nodose ganglion³⁴. Til slutt ble de to transkripsjonsfaktorene, parret-lignende homeobox 2b (Phox2b) og PR-domene sinkfingerprotein 12 (Prdm12), brukt som selektive markører for henholdsvis nodose og jugular afferent neuroner, henholdsvis¹⁴. Uten å visualisere Phox2b eller Prdm12, ville det være utfordrende å identifisere jugular vs. nodose afferents med sikkerhet. Potensielle tekniske fallgruver diskuteres også gjennom hele artikkelen.