通过肾脏动脉直接向肾脏输送药物

实验程序得到了瑞典哥德堡区域实验室动物伦理委员会的批准。 1. 术前护理 使用无菌技术避免感染。 麻醉下（如异氟烷），以最无菌的方式工作，剃光手术部位，用脱毛霜去除毛皮。将奶油留出约1分钟（最多2分钟，以避免皮肤灼伤）。用水小心洗净。第一步最好在手术前1-2天完成，以避免手术前动物的额外冷却。 在眼睛上涂抹眼科润滑剂以防止干燥。 为避免感染，在手术前用防腐剂皮肤清洁剂清洗手术区，并立即用消毒剂（氯西丁）擦拭手术区域。 镇痛 如果动物不是绝症程序，则用镇痛药预给动物服用：丁丙诺啡（如镇痛剂）0.05-0.1毫克/千克.c） 抗凝 剂 使用抗凝血剂避免血块：手术前10个肝素通过尾静脉（最大5mL/kg）。 2. 外科手术 自动切割仪器并使用无菌导管。用肥皂和头巾清洗浪涌，戴面罩、发网、无菌手术服和手套。让第二个人处理动物和所有”肮脏”的任务。 对于麻醉，使用异氟素。通过将鼠标放入麻醉盒中以 5% 异氟兰来诱导麻醉。感应后，通过检查反射和呼吸来检查麻醉的深度。 在手术过程中，在小鼠身上贴上面罩，以给予2%异氟兰的维持剂量。 在摆手术台之前，先用希比斯克鲁布和氯西丁清洗动物。 麻醉后，将鼠标放在一个加热的手术垫上，放在一个超细位置，用低粘胶带固定上肢和下肢到垫子上。确保上肢保持在正常位置，以防止肺压缩。如果可能，使用非电热源。注意：我们在手术过程中使用吸入麻醉（例如异氟素）进行更简单的调整。 用塑料包装（例如，按’n密封）将鼠标拖下，然后用手术显微镜进行手术显微镜的工作。 通过在手术区域中不断添加盐水来保护组织不干燥。这也有助于保持组织弹性，并最大限度地降低手术过程中的损伤风险。盐水应在37°C左右，以避免动物冷却。 用钳子和剪刀打开腹腔后，使用湿润、折叠、压缩将所有其他器官推到一边，以便查看手术区域。 使用缩回器可以很好地概述手术区域（5 毫米钝钩）。 本地化主动脉和左肾。 使用两个显微外科钳子，轻轻地清洁主动脉，无论是颅骨（见2.10.1）和caudally（见2.10.2）从肾脏，从周围的组织，并在它下面放置一个连结（6-0丝绸）。小心不要捏任何结构。通过轻轻伸展和拉动组织，尽可能靠近肾动脉，以自己的方式工作。在血管周围有几个神经不容易被发现。请记住这一点，因为受损的神经可能会导致瘫痪或其他问题后，手术。 颅骨（上图）肾脏，使用此连结抬起主动脉，在进行注射时暂时阻塞血液流动。在这个位置，就在肾动脉上方，主动脉向相反的方向分支（到肠子，见 图1）。为了避免用这种方式推动注射，将连体放在此分支下方。在开始注射程序之前，让连体没有任何张力。 Caudally（下图）肾脏，将切口靠近主动脉分支到肾脏/肾动脉的位置，以避免其他潜在的分支。从肾脏的主动脉是非常接近腹静脉。要非常小心，不要损坏静脉。 注射 当所有连字都到位时;首先伸展下部，其次伸展上连体，以遮挡血液，将注射的液体引向肾脏。 使用针灸针 （+0.25 毫米），穿刺并引导导管 （32GA） 尖端进入主动脉，并在连结上打一个结固定主动脉，以免在注射过程中移动或泄漏。（图1） 。使用针灸针代替剪刀，使容器中能产生一个最小的入口孔。 注入 50 μL 的液体。肾脏应该变苍白，表明注射已经香水的肾脏，并最终在注定的地方。 此时，有两种不同的方案可能。 在关闭入口孔之前，通过小心地放松上连体的张力，将一些循环回肾脏。这种方式缺血得到改善，但要知道，注射的液体可以通过肾脏静脉快速清除，因此不允许足够的停留时间。 或者继续手术而不回流血液。 再次收紧上连线后，取出导管，缝合主动脉，并回馈全循环。 取出拿着导管的连字。 取下导管。 用一针（埃蒂隆11-0，圆针）缝合入口孔。 先松开下连体，然后非常缓慢地松开上部。如果有泄漏再次收紧连体，等待几秒钟，再试一次。将总缺血时间保持在最多 5-10 分钟，以避免缺血性损伤。 通过推动区域并寻找脉动来测试固度，并确保肾脏恢复”正常着色”，以确保重新循环建立。 切断螺纹并去除主动脉下方的连字。 取出压缩，将肠子推回原位。回馈一些液体，在腹腔中加入盐水，缝合腹腔（Vicryl 6-0），然后用金属夹子关闭皮肤。 在醒来之前，动物被给予0.7-1 mL的肾上腺水皮下。注：整个过程大约需要30-45分钟，一个训练有素的浪涌。 3. 术后护理 允许动物在温暖的环境中醒来，在手术后将加热垫（约38°C）放在笼子的一部分下方2-3天。 继续提供镇痛（丁丙诺啡，例如，胸腺炎0.05-0.1毫克/千克.c）2-3次/天3天后操作。 如果动物出现脱水迹象，偶尔给10mL/kg的rehydrex.c。