Olika djurmodeller av medfödda diaphragmatic bråck och fetala trakeal ocklusion presenterar fördelar och nackdelar när det gäller etiska frågor, kostnad, kirurgisk svårighet, storlek, överlevnad och tillgång till genetiska verktyg. Denna modell ger ett nytt verktyg för att studera effekten av både trakeal ocklusion och ökat luminalt tryck på lungutvecklingen.
Fetala trakeal ocklusion (TO), en etablerad behandling modalitet, främjar fetala lung tillväxt och överlevnad i allvarliga medfödda diaphragmatic bråck (CDH). Efter TO ökar retentionen av den utsöndrade epitelvätskan luminaltrycket och inducerar lungtillväxt. Olika djurmodeller har definierats för att förstå patofysiologin hos CDH och TO. Alla har sina egna fördelar och nackdelar som teknikens svårighetsgrad, djurets storlek, kostnad, hög dödlighet och tillgången på genetiska verktyg. Häri beskrivs en ny transuterin modell av murin fetala TO. Gravida möss bedövades, och livmodern exponeras via en midline laparotomy. Luftstrupen hos utvalda foster var ligated med en enda transuterin sutur placeras bakom luftstrupen, en halsartären och en halsven. Dammen stängdes och fick återhämta sig. Foster samlades in strax före förlossningen. Lung-till-kroppsvikt förhållandet i TO foster var högre än det i kontroll foster. Denna modell ger forskare ett nytt verktyg för att studera effekten av både TO och ökat luminalt tryck på lungutvecklingen.
Medfödda diaphragmatic bråck (CDH) förekommer i 1:2500 graviditeter och resulterar i pulmonell hypoplasi och neonatal pulmonell hypertoni1,2,3,4,5,6. Fetala trakeal ocklusion (TO) är en etablerad prenatala terapi i allvarliga CDH patienter omfattar fetoskopi i 26-30th graviditetslängd veckan där en ballong placeras strax ovanför carina och sedan tas bort i den 32: a graviditetslängd veckan. Denna tillfälliga TO inducerar fetala lungtillväxt och förbättrar överlevnaden. Medfödda High Airway Obstruction Syndrome är ett dödligt tillstånd i samband med lunghyperplasi, som inspirerade kirurger att utföra konstgjord ocklusion av luftstrupen för att främja retention av den utsöndrade epitelvätskan. Denna ocklusion ökade luminal tryck och inducerad lungtillväxt7. Ocklusion bör dock vändas för att möjliggöra epitelcellsmognad.
Olika djurmodeller av CDH och TO – får, kanin, råtta och mus – har utvecklats för att förstå patofysiologin hos CDH och TO. Alla har sina egna fördelar och nackdelar som teknikens svårighetsgrad, djurets storlek, kostnad, hög dödlighet och tillgången på genetiska verktyg. Även om den kirurgiska tekniken som används för fårmodellen är mycket lik den som används hos människor och kan vändas, är de stora nackdelarna med denna modell kostnaden för djuret, den långa graviditetsperioden och det begränsade antalet operationer som är möjliga. Kaninmodellen har en kortare graviditetsperiod och är billigare än fårmodellen. Kaninmodellen är dock oåterkallelig8,9. Murinmodellen har den lägsta kostnaden, det högsta antalet foster som genomser graviditet, det bäst karakteriserade genomet och allmänt tillgängliga verktyg för cellulära och molekylära analyser. En viktig nackdel är dock bristen på reversibilitet hos TO, vilket förhindrar full förståelse för effekterna av TO. Häri presenteras en metod som kombinerar alla fördelar med de tidigare nämnda modellerna och skapar en enkel, potentiellt reversibel och minimalt invasiv gnagare TO-modell.
Denna metod beskriver ett kirurgiskt ingrepp av fetala trakeal ocklusion hos möss och dess inverkan på lung utveckling. Det finns några kritiska steg i protokollet som bör utföras noggrant för framgångsrik TO. Värmen i plattformen där operationen äger rum och saltlösningen som införs i bukhhålan är avgörande för graviditetens utveckling. Dessutom måste ett litet tryck appliceras på valparna för att säkerställa exponering av nacken.
En 6,0 polypropylen sutur är den enda su…
The authors have nothing to disclose.
Denna forskning fick inget särskilt bidrag från finansiärer inom den offentliga, kommersiella eller ideella sektorn. Alla författare har lämnat betydande bidrag till utformningen och utformningen av studien, förvärv, analys och tolkning av data, utarbetande av artikeln och översyn av den för viktigt intellektuellt innehåll och slutligt godkännande av den version som ska lämnas in. Författarna tackar Can Sabuncuoğlu för hans vänliga ansträngningar för produktion av konstverket av den kirurgiska tekniken.
Buprenorphine | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | For regional anesthesia |
Isoflurane | Halocarbon Life Sciences | NDC 66794-017-25 | For general anesthesia |
Magnification glasses | USA Medical-Surgical | SLR-250LBLK | At least 2.5x |
Nikon 90i microscope | Nikon | 3417 | Motorized Fluorescence |
Nucleospin Tissue Kit | Macherey-Nagel, Düren, Germany | 740952.5 | DNA isolation |
Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher, IL, USA | 23225 | Protein quantification |
Polyglactin suture | Ethicon | VCP451H | 4-0, 24 mm, cutting |
Polylysine slides | VWR | 48382-117 | Microscope adhesion slides |
Polypropylene suture | Ethicon | Y432H | 6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint |
RIPA buffer | Sigma-Aldrich, Missouri, USA | R0278-50ml | Protein isolation |
Silk suture | Ethicon | VCP682G | 4-0, 24 mm, cutting |
Trizol | Invitrogen | 15596026 | RNA isolation |