反向转录循环介导的等温放大（RT-LAMP）测定，用于对罗非鱼湖病毒进行特定和快速检测

罗非鱼湖病毒病（TiLVD）是罗非鱼病毒性疾病，据说在世界许多地区，包括亚洲^1、2、2非洲和美国，导致罗非鱼死亡。¹该病于2009年在以色列罗非鱼大规模死亡期间首次得到确认，金内雷特湖的野生罗非鱼数量^从每年257吨急剧下降到8吨。这种疾病是由罗非鱼湖病毒（TiLV）引起的，该病毒已被分配给安农韦里达家族作为一种新的属罗拉平病毒和新物种罗非鱼罗拉平病毒^3。TiLV的基因特征表明，该病毒是一种新型的包络、负感、单链RNA病毒，具有10个片段编码10个蛋白质^{1,1、2、4。,4}各种品种的罗非鱼属萨罗罗罗登，奥利奥米米，和提拉平和其他温水鱼（如，巨型葫三（奥斯罗莫斯戈拉米）已被证明易受TiLV^22，5。5目前，这种病毒继续在全球传播，可能通过受感染的活鱼^66，77的运动，而通过冷冻罗非鱼或其产品传播病毒的风险是有限的^8。由于TiLV感染造成的大量死亡率有可能对罗非鱼行业产生重大有害的经济影响。例如，埃及夏季死亡率综合征与TiLV感染有关的经济影响计算为1亿^美元。因此，必须开发一种快速和适当的诊断方法，以促进在养鱼场控制这种疾病。

到目前为止，TiLVD的诊断一直基于分子检测、病毒隔离和组织病理学。不同的PCR协议和引素已经开发为TiLV诊断^{10，11。10,}例如，一种基于SYBR的绿色反向转录定量PCR（RT-qPCR）方法，其检测灵敏度为仅两个拷贝/μL，用于TiLV检测^10。其他用于TiLV检测的PCR方法包括TaqMan定量PCR11、RT-PCR^2、嵌套RT-PCR12和半嵌套¹¹RT-PCR13。¹²¹³然而，这些方法需要先进的实验室设备和相对较长的时间来产生结果，由于反应的复杂性，这使得它们不适合现场应用。

循环介导的等温放大（LAMP）测定是一种快速、简单、实用的场内应用^{14、15。14,}该技术采用绞线位移反应原理，而扩增反应在等温条件下运行，没有复杂和昂贵的热循环器^{14，15。14,}因此，放大的LAMP产品或RT-LAMP产品在阶梯状带中进行分析，使用加糖凝胶电泳，带有荧光染色，以安全可视化DNA或RNA^14，或用肉眼观察是否存在浊度或白色沉淀^{物16、17、18。,17,18}由于这些原因，该技术已用于现场检测不同的鱼类病原体17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27。^{17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27}本研究的目的是建立一个快速，敏感和准确的RT-LAMP检测的TiLV检测。RT-LAMP测定在30分钟内提供鱼样中TiLV的筛选。该技术可应用于TiLVD的诊断和监测。