靶向大鼠的小肠：长期输注到肠系膜上动脉

本手稿中描述的研究得到了当地动物伦理委员会（罗马天主教圣体大学）的批准，并根据意大利卫生部的规定进行。 1.准备插管以插入SMA的近端分支 将外径为0.93毫米，内径为0.5毫米的较大插管切成所需长度（约30厘米）。 将较小的插管（外径0.4毫米，内径0.25毫米）切成约5厘米长，然后将其插入较大的插管1厘米。 用氰基丙烯酸酯胶将两个插管固定在一起，避免腔内堵塞。 将较大套管的游离末端连接到安装在装有生理盐水溶液的 1 mL 注射器上的鲁尔短截杆适配器 （23 G）。 用剪刀削尖较小套管的自由尖端，以利于将导管插入SMA分支。 通过用生理盐水冲洗来检查套管的通畅性。注意：套管的尖锐端不会在动物运动期间损坏动脉，因为它将被固定并且不会沿着血管滑动。 2.为外科手术准备大鼠 使用氯胺酮/木拉嗪（100/10 mg/kg）进行肌内麻醉。注意：足够的麻醉深度是通过爪捏反射的缺失或接近缺失来判断的。 剃掉手术区域的皮毛：腹部为SMA插管分支，颈部后部为套管出口。 使用手术爪捏反射无菌清洁手术区域。注意：所有准备工作均应使用无菌技术进行。 以圆周运动施用磨砂膏或溶液，然后无菌盐水或70%乙醇，3次。 将动物置于仰卧位，使四肢固定。 3. SMA近端分支的插管 通过在切口前测试爪子捏反射来确保适当的麻醉深度。 使用无菌手术，防水悬垂。 用手术刀刀片，在腹膜区域中线处用3厘米的直切口打开腹壁，穿过所有腹部平面进入腹膜。 将用盐水溶液浸泡的纱布放在手术悬垂物顶部的剖腹切口周围。使用缝合线保持手术切口打开。注意：所有拭子和手术器械必须是无菌的。 使用棉签识别并暴露小肠。遵循其自然倾向来识别肠系膜。从剖腹切口中取出肠系膜，并将其向下铺在纱布上（图1A）。 通过感受脉动来识别SMA。 使用棉签在肠系膜脂肪之间”让路”，并揭开SMA及其近端分支的2-3个。 选择足够大的SMA近端分支，以允许插管的手术操作。将这个分支（用4-0的丝绸缝合线）绑在距离其原点下游3-4厘米处，以使其膨胀，使缝合线末端足够长，以便以后操纵。 在 SMA 的分支下放置一个刚性支撑。手术镊子的手柄在这里就足够了。 用惯用手用镊子握住较小套管的末端（与另一端较大的套管相连），并用另一只手拉动缝合线末端以拉紧血管并促进导管进入（图1B）。 保持套管尖端与血管平面成20°角，方向与血流相反。 轻轻按压尖端以穿透动脉壁并插入套管。注意：在不切割动脉的情况下进行插管;导管的尖端将打破血管壁并便于进入。血液流回插管确认插入正确。 继续将套管插入靠近SMA原点的动脉分支中再插入1cm。 用手术结（4-0丝）将套管固定在动脉上，并通过冲洗1mL无菌盐水溶液或血液采样来验证其正确功能。 4. 套管隧道掘进并放置在输液支持系统中 在改变动物的位置之前，在切口上放置无菌手术悬垂物。注意：从背部到腹部的隧道是通过用尖头手术器械在皮下空间施加压力而产生的。应使用无菌手术覆盖腹部和背部切口。 在颈部后部区域做一个1厘米的切口，并容纳一个球形瓣膜。 通过皮下组织将插管从剖腹手术通道传递到放置在颈部的瓣膜（图2A）。用导管塞关闭套管远端肢体，以避免空气流入。 置换腹腔中的小肠。闭合腹壁，用连续3-0的丝线缝合皮肤切口。 用缝线将瓣膜固定在颈部皮肤上。用连续的3-0丝线缝合皮肤切口。 5. 术后管理 给老鼠穿上夹克，以保护按钮阀。在输液过程中用钢棒保护套管的暴露部分，并将其固定在瓣膜上（图2B）。注意：由于手术是在无菌技术下进行的，因此不需要使用抗生素。非甾体抗炎药应在术前给药以控制疼痛（5 mg/mL 美洛昔康注射，1 mg/kg，每日一次，最多 3 天）。手术后，将大鼠稳定在代谢笼中输注时间（24小时）。然后用异氟醚吸入重新麻醉大鼠，以达到拆卸输液系统所需的时间。随后，可以将老鼠饲养在正常的笼子中，具有12小时的光/暗循环，并且可以自由获取食物和水。 在输注期间将大鼠稳定在代谢笼中。老鼠现在是醒着的，可以自由地在笼子里移动和进食。 将套管的远端连接到充满50 mL无菌盐水溶液的弹性泵（最大体积为100 mL，流速为5.0 mL / h）。继续输注24小时（图2C）。 在第一天，肌内注射抗生素（恩诺沙星10mg / kg，前24小时），然后通过口服给药（恩诺沙星100mg，在饮用水中500毫升）。在觉醒期间肌肉注射镇痛治疗（酮洛芬5.0mg / kg）和随后几天口服（对乙酰氨基酚200mg在饮用水中）。注意：在饮用水中稀释口服治疗以获得可忍受的味道。监测体重测量和水合作用。 在输液时间（24小时）结束时，通过从老鼠身上取下泵，夹套，钢棒和阀门来拆卸动物的外部输液系统。当套管从颈部出来时，将其关闭并切开，在伤口缝合后将该四肢留在颈部皮肤下。注意：在此阶段，可能需要通过吸入异氟烷麻醉大鼠几分钟。 将老鼠单独饲养在一个正常的笼子里，有12个小时的光/暗循环，可以自由获取食物和水。注意：基线术后食物摄入量约为30克/天 基线水摄入量约为50毫升/天。平均体重应约为400毫克。