In Vivo Infecção com Leishmania amazonensis avaliará virulence parasita em camundongos

Os leishmanioses são doenças infecciosas parasitárias predominantes mundialmente representando desafios importantes nos países em desenvolvimento e são reconhecidas como uma das doenças tropicais negligenciadas mais importantes pela Organização Mundial da Saúde^1,2. Os leishmanioses são caracterizados por manifestações cutâneas, mucosas e/ou viscerais. Leishmaniose cutânea geralmente é causada por L. amazonensis, L. mexicana, L. braziliensis, L. guyanensis, L. major, L. tropica e L. aethiopica³. Esta forma da doença é muitas vezes auto-curativa em humanos devido à indução da resposta imune celular protetora. No entanto, a resposta imune celular pode falhar, e a doença pode progredir para a leishmaniose cutânea disseminada^4,5. Não há vacina disponível devido à diversidade entre espécies de Leishmania e hospedam origens genéticas^6,7. As opções de tratamento também são limitadas, pois a maioria dos medicamentos disponíveis atualmente são caros, tóxicos e/ou podem exigir tratamento de longo prazo^8,9. Além disso, houve relatos de resistência medicamentosa contra os tratamentos disponíveis^10,11.

O agente causal da leishmaniose é o parasita protozoário Leishmania. O parasita apresenta duas formas morfológicas distintas em seu ciclo de vida: promastigotes, a forma flagelada encontrada em moscas de areia; e amastigotes, a forma intracelular encontrada nos vacuoles parasitophorosos dos macrófagos hospedeiros de mamíferos^12,13. A capacidade dos amastigotes de invadir, sobreviver e replicar apesar dos mecanismos de defesa dos macrófagos do hospedeiro vertebrado estão sujeitas a muitos estudos^14,15,16,17. Consequentemente, vários grupos de pesquisa têm descrito ensaios de infecção por macrófagos in vitro para avaliar o impacto de fatores ambientais específicos, bem como genes parasitas e hospedeiros na infectividade do parasita. Este ensaio apresenta várias vantagens, como a capacidade de adaptar estudos a um formato de alto desempenho, período de tempo relativamente menor para obter resultados, e número reduzido de animais de laboratório sacrificados¹⁸. No entanto, os achados dos ensaios in vitro são limitados porque nem sempre se replicam nos estudos vivo^14,19,20,21. Em ensaios vivos fornecem uma visão geral fisiológica sistêmica da interação host-parasita, que não pode ser totalmente imitada por ensaios in vitro. Por exemplo, estudos imunológicos podem ser realizados através de ensaios imunohistoquímicos de seções de tecido de pisque coletados ou até mesmo de linfonodos popliteis para análise das células imunes recuperadas²².

Os animais são frequentemente usados como modelo para doenças humanas em pesquisas biológicas e biomédicas para entender melhor os mecanismos fisiológicos subjacentes das doenças²³. No caso da leishmaniose, a rota, local ou dose de inoculação influenciam o desfecho da doença^24,25,26,27. Além disso, a suscetibilidade e a resistência à infecção em humanos e camundongos são altamente reguladas pelos antecedentes genéticos do hospedeiro e parasita^{4,5,22,28,29,30,31}. Os camundongos BALB/c são altamente suscetíveis à infecção cutânea de L. amazonensis, mostrando uma rápida progressão da doença com a disseminação dos parasitas para os linfonodos, baço e fígado³². Como a doença pode progredir para metástases cutâneas, a infecção pode ser fatal. Em contraste, os camundongos C57BL/6 geralmente desenvolvem lesões crônicas com cargas de parasitas persistentes em ensaios de infecção por L. amazonensis ³³. Assim, a infecção por L. amazonensis com essa espécie de camundongos em particular tem sido considerada um excelente modelo para estudar formas crônicas de leishmaniose cutânea em humanos, pois imita melhor a progressão da doença do que o modelo de infecção por camundongos BALB/C^5,34.

Por isso, propomos que a murina na infecção vivo seja um método útil para estudos fisiológicos de virilidade leishmania aplicáveis à doença humana, permitindo uma visão sistêmica da interação hospedeiro-parasita. Revisitando ensaios bem estabelecidos^22,apresentamos aqui um protocolo compilado passo a passo da infecção in vivo de camundongos C57BL/6 com L. amazonensis que compreende a diferenciação parasita em amastigotes axenic, ambulatora cutânea cutânea cutânea, desenvolvimento de lesões e determinação de carga parasite. Este protocolo pode ser adaptado a outras cepas de camundongos e espécies de Leishmania que causam leishmanioses cutâneas. Em conclusão, o método aqui apresentado é crucial para identificar novas metas e vacinasanti-Leishmania, bem como em estudos fisiológicos das respostas imunes e metabólicas do hospedeiro à infecção por Leishmania.