시투 혼성화에서 발색성 HPV 관련 두경부 암 진단을 위한 도구
Summary
인간 유두종 바이러스(HPV) RNA 염색체는 종양 내의 활성 인간 유두종 바이러스 감염 검출에 대한 금 기준 중 하나로 간주된다. 그것은 그것의 신호의 현지화 그리고 반정적인 평가를 가진 HPV E6-E7 mRNA 발현의 가시화를 허용합니다.
Abstract
인간 유두종 바이러스 (HPV) 감염은 구인두 편평 상피 세포 암종 (OPSCC)의 특수형에 대한 주요 위험 인자이며, 이는 알코올 및 담배 관련 OPSCC보다 더 나은 결과와 연관되는 경향이 있습니다. HPV 바이러스 RNA의 체질 성 하이브리드화(CISH)에서 발색성 은 좋은 공간 분해를 가진 종양 발생 단백질 E6 및 E7의 바이러스 성 전사체의 반정적 평가를 허용할 수 있었다. 이 기술은 종양 HPV 감염 세포에 있는 HPV 전사의 가시화를 가진 액티브한 감염의 진단을 허용합니다. 이 기술의 장점은 종양에 인접한 비신생 HPV 감염 세포로부터의 오염을 피하는 것입니다. 전반적으로, 그것의 좋은 진단 성과는 액티브한 HPV 감염 확인을 위한 금 본위제로 여겨진. E6 및 E7 바이러스 성 단백질 세포 단백질 pRb 및 p53세포 변환에 필수적이기 때문에, HPV RNA CISH는 기능적으로 관련성이 있고 활성 종양 발생 성 HPV 감염을 심각하게 반영합니다. 이 기술은 HPV 관련 p16 양성 두경부 암 환자 중 2개의 예후 그룹의 식별을 도왔기 때문에 “낮음” 또는 “높은” HPV 전사 수준이 임상적으로 관련이 있다. 여기서 우리는 제조사로부터 얻은 키트와 함께 포르말린 고정 파라핀 임베디드(FFPE) 슬라이드에서 수행된 수동 HPV RNA CISH에 대한 프로토콜을 제시한다. 염색체 계시 대신에, 체형 혼성화에 있는 RNA는 또한 형광 계시 (RNA FISH)로 수행될 수 있습니다. 또한 통상적인 면역염색과 결합될 수 있다.
Introduction
HPV RNA CISH는 구로두또는 자궁 경부와 같은 다양한 위치에서 양성 또는 악성 병변에서 결정적인 역할을 할 수 있는 활성 HPV 감염의 검출을 위한 강력한 도구입니다. 활성 HPV 감염의 검출은 HPV 유도병변의 진단을 지원하고, 그로 인하여, 그것의 처리 및 예후에 영향을 미칠 수 있습니다.
HPV는 가장 빈번한 성병 감염이고, 100개 이상의 바이러스성 유전자형은 1. 개략적으로, 유전자형 6 및 11과 같은 저위험 유전자형은 생식기 사마귀, 재발성 호흡 유두종증 및 그밖 양성 병변을 유도하기 위하여 알려집니다, 반면 유전자형 16와 18와 같은 고위험 유전자형은 대부분의 자궁 경관암을 책임 집니다 및 항문암은 지역역학자료에 의해 고려되는 바와 같이 가변적인 비율로 HNSCC 종양발생에서 역할을 한다2.
HPV 감염의 검출을 위해 몇몇 공구는 유효합니다. 고위험성 HPV 감염이 바이러스 성 발현단백질 E6 및 E73의 발현을 유도함에 따라, E6 및 E7 전사체의 검출은 활성 HPV 감염 식별을 위한 금본위제로 널리 인식되고있다4. HPV RNA CISH는 다양한 HPV 관련 질환을 앓고 있는 환자로부터 아주 쉽게 수득되는 FFPE 샘플에서 수행될 수 있다. 그 성능은 자궁 경부, 항문 및 질에서 편평상피내 신생물에서 평가되었으며, 자궁 경부, 항문 및 상부 소화관의 침윤성 편평 상피 세포 암종에서5: 98 % 이상의 감도를 달성합니다. HPV DNA 중합효소 연쇄 반응 (PCR) – 양성 케이스 중. 이것은 p16 면역 염색 (93%)보다 약간 낫습니다. 및 HPV DNA는 보다 일반적으로 사용되는 체형화(DNA ISH: 97%)이다. 두경부 암종(SCC)을 가진 57명의 또 다른 코호트에서, HPV DNA ISH에 비해, 생식기 부위, 피부 및 요로에서 발생하는, HPV RNA CISH는 더 나은 감도를 달성 (100% 대 88%). 및 특이성 (87% 대74%) 6.
P16 면역염색은 HPV 감염4,7에의해 야기될 수 있는 세포 주기 중단을 반영하는 간접 마커이다(그러나 독점적으로는 아님). 이 비용 효과적인 시험은 좋은 감도와 부정적인 예측 값을 가지고 있으며 미국 병리학자 대학 (CAP)과 국제 연합에 의해 oropharynx 암 (OPC)의 고위험 HPV 감염의 대리 마커로 권장됩니다. 암 통제 (UICC)8.
이 논문은 전적으로 HNSCC에 있는 HPV의 검출에 집중하더라도, HPV RNA CISH는 HPV 감염을 관련시키는 각종 그밖 조건에서 임상으로 관련이 있습니다. 예를 들어, 이 기술은 형태학적으로 모호한 경우 9에 대해 자궁경부 내 상피내 신생물,등급 1[CIN1]으로 알려진 자궁경부의 저급 편평상피성 병변의 진단의정확도를 향상시킬 수 있다. 구인두 SCC에 관하여, HPV RNA CISH는 두경부암의 TNM 분류의 최근 제8판에서 HPV 관련 구인두 SCC와 구별되는 HPV 관련 SCC의 확인을 허용합니다 (국제암을 위한 연합의 제어 [UICC])10. HPV 관련 SCC는 HPV 관련 SCC11,12,13보다더 긴 생존과 향상된 방사선 요법 및 화학 요법 감도를 가진 더 나은 예후를 나타내기 때문에, HPV 감염의 검출은 영향을 미칠 수 있습니다 환자 관리14,15. 또한, HPV RNA CISH는 HPV DNA CISH16보다더 높은 신호를 가진 HPV 관련 다수성 부종 암종의 진단에 사용될 수 있다. 몇몇 다변량 분석은 E6와 E7 전사체의 검출이 구인두 SCC 전반에 있는 더 나은 예후와 상관된다는 것을 건의합니다7,15,17,18 및 p16 양성 구인두 SCC19,20의하위 그룹.
여기서 우리는 제조자로부터 얻은 키트와 함께 FFPE 슬라이드에서 수행된 수동 HPV RNA CISH에 대한 프로토콜을 제시한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
구입한 키트로 수행된 HPV RNA CISH는 바이러스 성 전사체의 검출을 위한 강력한 도구이며 활성 HPV 감염을 나타냅니다. 수동으로 수행하면 프로토콜의 단계가 전반적으로 따라하기 쉽고 구입한 키트가 편리합니다. 이 기술은 19개의 조직학 견본 플러스 1개의 통제 미끄럼을 한 번에 염색하는 것을 허용하고, 분석결과는 약 8 시간 지속됩니다. 달리 언급되지 않는 한 샘플이 단계 간에 건조되지 않도록 …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 호피탈 유로페엔 조르주 퐁피두와 네커 (로리안 샹볼레, 엘로디 미셸, 그리고 기젤 레갈)의 병리학 과에 감사드립니다; PARCC의 조직학 플랫폼, 호피탈 유로페엔 조르주 퐁피두 (코린 레사프레); 언어 편집을위한 버지니아 클라크; 알렉산드라 엘바키안의 공헌.
Materials
| Hematoxylin solution, Gill No. 1 | Merck | GHS132 | |
| HybEZ Oven (110v) | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 321710 | |
| HybEZ slide rack | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 300104 | |
| ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 310018 | |
| RNAscope 2.5 HD Detection Reagents-BROWN | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322310 | This kit includes amplification reagents AMP1, AMP2, AMP3, AMP4, AMP5 and AMP6, and detection reagents DAB-A and DAB-B |
| RNAscope 3-Plex Negative Control Probe | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 320871 | DAPB |
| RNAscope 3-Plex Positive Control Probe | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 320861 | PPIB |
| RNAscope H202 & Protease Plus Reagent | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322330 | Hydrogen Peroxyde x2 and Protease Plus x 1 |
| RNAscope Probe- HPV16/18 | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 311121 | |
| RNAscope Target Retrieval Reagents | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 322000 | |
| RNAscope Wash Buffer Reagents | Advanced Cell Diagnostics Inc. | 310091 | Wash Buffer 50X x4 |
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