Använda flera steg kultur system, rapportera vi en in vitro-B-cellen till plasma cell differentiering modell.
Plasma celler (st) utsöndrar stora mängder antikroppar och utveckla från B-celler som har aktiverats. Datorer är sällsynta celler i benmärgen eller slemhinna och säkerställa humorala immuniteten. På grund av deras lågfrekventa och läge, studiet av datorer är svårt i mänskliga. Vi rapporterade ett B till PC in vitro-differentiering modell med valda kombinationer av cytokiner och aktivering molekyler som möjligt för att reproducera den sekventiella celldifferentiering inträffar invivo. I denna in vitro-modell, minne B-celler (MBCs) kommer att differentieras till före plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs), tidigt datorer och slutligen in i långlivade nära datorer, med en fenotyp sina motsvarigheter hos friska individer. Vi har också byggt en öppen tillgång bioinformatik verktyg för att analysera de mest framträdande informationen från GEP data relaterade till PC differentiering. Dessa resurser kan användas för att studera mänskliga B till PC differentiering och i den aktuella studien, undersökte vi gen uttryck regleringen av epigenetiska faktorer under mänskliga B till PC differentiering.
Differentieringen av B-celler till plasmaceller (st) är viktigt för humoral immunitet och skydda värden mot infektioner1. B till PC differentiering är förknippat med stora förändringar i transkription kapacitet och metabolism för att rymma till antikropp sekretion. De transkriptionsfaktorer som styr B till PC differentiering har studerats och avslöjade exklusiva nätverk inklusive B – och PC-specifika transkription faktorer (TFs)2. I B-celler är PAX5, BCL6 och BACH2 TFs väktare av B-cell identitet2,3. Induktion av IRF4, PRDM1 BLIMP1 och XBP1 PC TF-kodning kommer att släcka B cell gener och framkalla en samordnad antikropp-utsöndrar cell transkriptionell program3,4,5. Dessa samordnade transkriptionell förändringar är associerade med Ig gener transkription aktivering tillsammans med en switch från formuläret membran-bundna till formuläret utsöndras av immunglobulin tung kedja2,3, 4. B till PC differentiering är länkad med induktion av gener involverade i endoplasmatiska retiklet och Golgi apparaten fungerar samtidig med ovikta protein svar (UPR) aktiveringen känd för att spela en nyckelroll i PC av tillmötesgående syntesen av utsöndras immunglobuliner6,7. Den TF XBP1 spelar en viktig roll i denna cellulära anpassning8,9,10.
B-celler och datorer är nyckelaktörer av humorala immuniteten. Förstå biologiska processer som styr produktionen och överlevnaden av normala plasma celler är kritisk i terapeutiska interventioner som behöver säkerställa effektivt immunsvar och förhindra autoimmunitet eller immunbrist. PC är sällsynta celler med differentiering tidigt äger rum på anatomiska platser som hindrar fullständig biologisk karakterisering, särskilt i mänskliga. Använda flera steg kultur system, har vi rapporterat en in vitro-B till PC differentiering modell. Denna modell återger den sekventiella celldifferentiering och mognad som förekommer i de olika organ i vivo11,12,13. I ett första steg, minne B celler aktiveras först fyra dagar av CD40 ligand, oligodeoxynucleotides och cytokin kombination och differentieras till preplasmablasts (PrePBs). I ett andra steg förmås preplasmablasts att differentieras till plasmablasts (PBs) genom att ta bort CD40L och oligodeoxynucleotides stimulering och ändra kombinationen cytokin. I ett tredje steg induceras plasmablasts differentieras till tidiga datorer genom att ändra de cytokin kombination11,12. Ett fjärde steg infördes för att få fullt mogen datorer genom att odla dessa tidiga datorer med benmärgens stromaceller luftkonditionerade medium eller valda tillväxtfaktorer13. Dessa mogna datorer kunde överleva flera månader in vitro- och utsöndrar stora mängder immunglobulin (figur 1). Intressant, recapitulates vår in vitro-modell samordnade transkriptionell ändringarna och fenotypen av olika B till PC-stadier som kan vara upptäckta invivo11,12,13,14 ,15. Datorer är sällsynta celler och vår in vitro-differentiering modell gör det möjligt för att studera mänskliga B till PC differentiering.
I mänskliga, PC är sällsynta celler med differentiering arrangerar äger rum i anatomiska platser som hindrar fullständig biologisk karakterisering. Vi har utvecklat en in vitro-B i PC differentiering modell med flera steg kultur system där olika kombinationer av aktiveringen molekyler och cytokiner tillämpas därefter för att reproducera den sekventiella celldifferentiering som förekommer i den olika organ/vävnader i vivo11,12,<sup class="xre…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöds av bidrag från franska INCA (Institut National du Cancer) Institutet (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) och ITMO Cancer (MM & TT).
anti-CD2 magnetic beads | Invitrogen | 11159D | |
Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
Anti-histidine | R&D Systems | MAB050 | |
CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T |
|
human Transferin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
IFN-α | Merck | Intron A | |
IMDM | Gibco | 31980-022 | |
Recombinan Human CD40L-hi | R&D Systems | 2706-CL | |
Recombinant Human APRIL | R&D Systems | 5860-AP-010 | |
Recombinant Human IL-10 | R&D Systems | 217-IL- | |
Recombinant Human IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
Recombinant Human IL-2 Protein | R&D Systems | 202-IL- | |
Recombinant Human IL-6 | Peprotech | 200-06 |