新規オブジェクト認識と行動の予算上のマウスでテスト オブジェクトの場所

このプロトコルは、オブジェクトの場所と新しいオブジェクト認識行動マウスのテストを実施するコスト効果の高い方法を提供します。これらのテストは、海馬の機能だけでなく、オブジェクト認識¹⁰に関与する前頭前野など他の皮質の機能の評価を有効にします。OLT と水資源モリス水迷路、文脈恐怖条件付け、バーンズ迷路または放射状迷路に必要な強い情動刺激を避ける利点があります。彼らはまた放射状迷路に必要な絶食の必要性を避けます。さらに、このプロトコルは、実行または分析の広範なまたは複雑な機器を必要としない単純な 2 日間のテスト手順について説明します。これらのタスクの 1 つの欠点は、彼らが学習や買収の対策のため許可しないことです。新規性調査の違い可能性がありますオブジェクトについて貧しい学習訓練、貧しい学んだのメモリまたは両方。探査車の本質的な違いを排除の重要な測定オブジェクトを調査に要した合計時間ですが学習の測定ではありません。学習の対策が実験的質問、水迷路、バーンズ迷路の重要な放射状迷路は望ましいだろうか。

行動のアリーナのカスタム建物数百ドルを保存し、さまざまな研究所の手の届かない以内にテスト オブジェクトをもたらす可能性があります。このプロトコルは、多くの障害を排除し、アクリルで社内アリーナ建設をより専門的なトレーニングなしで科学者にアクセスできるように作製プロセスを合理化します。それは、マウス、マウスの黒白いアクリルなど白いマウスの黒のアクリルとは対照的に色のアクリル シートを購入容易になりますデータ集録および解析、特に市販使用するときに注意することが重要解析ソフトウェア。(表 1) を見て注文「エッジ ルーティング」とカット-サイズのシートでは、テーブルが不要となっています。、アクリル セメント ドリルし、皿パイロット穴する必要があります。休憩、チップとその脆い性質のため亀裂がしばしばファスナー、穴あけ加工、アクリル板のカッティングでねじ込みます。セメントは、溶媒は、それが結合する領域に流れます、溶解・軟化、アクリルが発生しました。したがって、それに加わらない各部分別に伝統的な接着剤であるかのよう。接着剤とは異なり、セメントはない負のスペースを埋めるか、表面に付着。これは、これは多くのより良い結合を作成する、滑らかでフラット エッジを確保する「ルーティング エッジ」を注文する主な理由です。セメントが乾くと、「溶剤溶接」と呼ばれるプロセスで 1 つの作品に 2 つのアクリル シート融合いるそれは。金属の溶接と同様完成品は一枚が、溶接部が常に弱い場所。そのため、アリーナが使用されたら、注意は直接的な影響またはこれらの局面で極度のストレスを避けるためにすべき。

このプロトコルはまた 4 アリーナ (図 1および図 2) 最大 4 マウスの同時テストをセットアップする方法を示しています。アリーナの不透明な壁は、テスト中に、別の 1 つを見てからマウスを防ぐが、部屋で他のマウスを持っている臭気を引き起こす可能性またはテストを損なうことができるノイズの気晴らしはまだ。慣れ試験詳細ここですることができますは、マウスが行動テスト前に動物多室条件に公開されてこの懸念を軽減できます。しかし、もし気晴らし他マウスまたは実験者から他のマウスの処理に関連付けられているノイズは強い懸念、1 つのマウスと 1 つのアリーナも使用できる、同様に、複数のマウスで、OLT と水資源を完了するために必要な時間が増えます。以上 4 アリーナは、同様に、理論的には使用できるが、ほとんどのカメラは、良好な解像度、多くのアリーナを表示する十分な幅フィールドのビューを持っていません。

寸法と距離を提供、寸法 (図 1 bと1 C) 16 m³ x 16 x 16 は、典型的な実験室のマウス行動実験のための一般的なガイドラインを示します。適切な環境手がかりのセットアップ、アリーナ、そしてビデオ録画装置を環境ごとに最適化されなければなりません。手がかりは、大規模な図形や空間、OLT の間に彼ら自身を方向づけるためにネズミを有効にする (通常は黒と白のパターンで構成できます。手がかりは、代わりにお互いの向かいに別の場所で合図を配置する、テスト領域の壁にマウントできます。このプロトコルでは、行動テスト中に研究者とコンピューターを非表示にするカーテン テストの部屋の分割をお勧めします。すべての慣れ、間の間隔、およびアクティブな試験、中に研究者は、テスト領域から自分自身を分離するカーテンを閉じる必要があります。これは実用的ではありません、コンピューターがマウスの観点から残ることができるが、研究者はビューからタスクの間に移動する必要があります。研究者が存在する場合、マウスが空間手がかりとして、彼女または彼に依存しようとします。

すべて行動テストは、約 310 ルクスと実験者に香水などの不要なサウンドまたは強い環境臭いキューで薄暗く、でも照明と温度と湿度制御環境で完了する必要があります。各試験と試験日までの間すべてのアリーナ、オブジェクトは、嗅覚の手がかりを最小限に抑える動物実験施設殺菌ワイプの 70% のエタノールまたは香りの漂白剤で拭くなどの方法をお勧めしますで洗浄する必要があります。化学消毒剤を使用する場合 70% エタノールで最終すすぎは多くの化学消毒剤は動物の足を刺激することができますのでお勧めします。 OLT と水資源を実行、^20,22のテスト中にストレスを減らす、人とそれらを理解する必要があるテスト前に数日間マウスを処理、行動のタスクと同様に。マウス試験会場近くのなじみのない個人による急性ストレスを経験することができます、同じ人物によってすべて行動テストを完了する必要があることをもお勧めします。テストのパラメーターと条件このプロトコルで 9 週齢アダルト c57bl/6 マウスに 6 に最適化されています、明らかにこの年齢層の損傷による記憶障害で最も役に立つだろうまたはによる記憶障害は、古いマウスの自体を年齢します。目的が若齢マウスのメモリの改善をテストする場合は、1 時間から 1 日まで長い ITI は天井簡単に 20 分 ITI バージョンのパフォーマンスに影響を回避するより適切でしょう。確かに、ITIs の範囲 (即時のリコール) の 5 分から数時間または数日間 (リモート記憶)、実験と菌株の特定のニーズやマウスの年齢に応じてです。重要なは、長さにかかわらずすべて ITIs は、実験ではセッション間で一貫してはずです。行動と学習、テスト領域の配置、間隔、各審判のタイミングの違いを展示異なる系統とマウスの週齢とマウス、彼らの年齢、および特定の損傷の特定の歪みによると使用されているオブジェクトを変更できる/病気/介入モデル対象^9,21,23,25。

空間記憶機能の海馬依存性のテスト、OLT は定評、北風は、海馬に依存しないこと。北風からデータの解釈は、アカウントにでこの警告を取る必要があります。物体認識のメモリの海馬が関係するかの決定変数はまだ、時に合意されていませんが、ITI 長さまたは空間的な手がかり¹⁸の顕著性を含めることができます。特に、提案するプロトコルは、北風で海馬のプロセスを使用してに向かってマウスをバイアスが、北風の前に空間の OLT を使用します。したがって、順序を逆にすることができます、または実験者の質問やニーズに応じて各タスクを独立して実行できることに注意する重要です。

オブジェクトの選択は、OLT と水資源の^22,24の重要な側面です。理想的なオブジェクトは、簡単にマウスで避難され、ガラスや金属、咀嚼や傷によるダメージをマウスのような素材には十分に重い。木製、泡、または柔らかいプラスチック製のオブジェクトは適していませんと変形が簡単に無臭を維持が難しいです。さらに、試験で使用されるオブジェクトすべてのようになります比較的サイズ、テクスチャー、香り、素材で。図 1は、使用できる適切なオブジェクトの例を示します。ひよこのこのオレンジのプラスチック置物はそれに十分な重量を与えるために砂でいっぱい、洗浄試薬または他の臭気の原因となるエージェントの漏れを防ぐために密封します。上部の形状、ためは、マウスがの上に登るまたはこのオブジェクトの上に座ることができます。OLT の水資源、このオブジェクトは似たようなサイズ、重量、素材、色、ウサギのようなプラスチック置物などの複雑さの別のオブジェクトとコーディネートしています。オブジェクト調査は本当に目新しさのための好みを反映して、同じ系統で 8 マウスの最小値と同等の本質的な価値のすべてのオブジェクトを検証する必要がありますように、セックスと実験的グループとしての年齢は、プロトコルのセクション 2.9 で説明します。さらに、さらにオブジェクトの固有の特性もない好みに影響を与えているように同じ研究ではマウスの間小説または移動したオブジェクトは、オブジェクトの面でランダムにオブジェクトをする必要があります。オブジェクトの配置はできます OLT と水資源の成否にも大きく影響します。オブジェクトは、アリーナで相殺して、壁に近すぎるではない必要があります。オブジェクトによって混雑コーナーに非表示にマウスのための魅力的な場所である、これは調査の対策が混同されます。

マウスがオブジェクトで先のとがった鼻とオブジェクトを従事するときは、「アクティブな調査」を定義しているデータ コレクションに重要な前提条件以上 2 cm 離れて。マウスをオブジェクトの上に移動したり、後のオブジェクトを超えて探している活発な調査として対象となりません。さらに、OLT と水資源に依存マウスの空間的位置やオブジェクトの実際の機能のいずれかを思い出し、訓練試験中に、これらの十分な検討が必要があります。したがって、研究者最低調査時間を定義し、調査、伝統的に 20 秒²¹でのベースライン レベルを満たしていない科目を除外します。

オブジェクト調査時間の定量化は、さまざまな方法でまたは高価な分析ソフトウェアを使用せずに実現できます。マニュアル スコア リングが使用されている前述のように、最も包括的なデータ収集が、マウスがオブジェクトを調査するときにビデオのタイムスタンプを記録することによって実現できます。公平なタイムスタンプの永続的なログを作成してオブジェクト調査 3 つの個々 の試験時の起動・停止時間を記録とのストップウォッチを使用するなどの方法ではなくデータの正確な手動計算が容易になります相加的マウス各オブジェクトを調査する時間の合計を記録します。

オブジェクト調査をスコアリングのための商用ソフトウェア パッケージも承ります。市販のソフトウェアは、手採点の総距離を含むここに記載されているデータ以外のデータの富を旅して、アリーナの特定の領域と運動^16,23のスピードで費やされた時間数を提供できます。ソフトウェアは、適切に校正し、マニュアル スコア リングよりもはるかに高速データももたらすことができるオブジェクト調査を確実に検出することが確認します。この高速データ収量では、手動スコアリングに必要な人間の時間と比較してコスト削減をもたらす可能性があります、長い目で見れば。しかし、行動の分析のためのほとんどのソフトウェア パッケージがあることができる多くのラボの法外な高の先行コスト、マニュアル スコア リング頻繁、学生研究員、行動得点の時間コストを最小限に作ることで実現できます。商用ソフトウェアは頻繁にまたデータ スループットと時間の節約を制限する同時にソフトウェアにアクセスできるユーザー数の制限と来る。これらのソフトウェア パッケージに多くの利点がある、彼らは OLT と水資源からオブジェクトを調べるのに時間の重要な情報を収集する必要はありません。手動でこのデータを取得する機能は、幅広い研究者より経済的にアクセス新規オブジェクトのタスクになります。

このプロトコルの追加機能は慣れの最初のセッション活動と不安のレベルに関するデータを得ることができる開いた分野で本質的に裁判であります。活動レベルは旅の総距離を用いて定量化することができます。 または平均速度、トラッキング ソフトウェアが利用可能な場合。同様に、ソフトウェアの追跡、不安対策はアリーナや中心距離の中心で費やされた時間から派生できます。これらのデータは、グリッドをアリーナのビデオに重ねること、踏切を定量化して手動で取得できます。このオープン フィールド データが総運動障害や過度の不安オブジェクト調査後で干渉する可能性を排除できます。

このプロトコルで使われる統計テストは、分析の従来の代表です。マウスの 2 つのグループを比較すると、グループ間移動または新規のオブジェクトの調査の時間の割合の違いの重要性をテストする 2 サンプル、両側 t 検定お勧め。サンプル サイズが均一でない場合は、ばらつきが非常に大きい、または非パラメトリック テスト代わりにお勧め、t 検定の前提の多くにこれらの条件に違反するが、グループ間で不均一な変動を示します。マウスの 3 つ以上のグループを比較すると、性をグループに移動した、または新規のオブジェクトの調査の時間の割合に影響するかどうかをテストするのには推奨します。エラー修正の事後テスト、テューキー テストまたはペアワイズ比較、ボンフェローニ修正は、グループの各ペア間のパーセントの調査時間の差をテストするのには、適用できるようします。OLT のデータを分析する付加的な方法が、OLT 試験トレーニングから移動したオブジェクトを調査の時間の割合に大きな変化をテストします。マウスの 1 つのグループ、このテスト対、両側 t 検定、各マウスに OLT にトレーニングから移動したオブジェクトとの時間の割合で重要な変更のテストの形式がかかるだろう (ペア分析にこれらは、心に留めておくと独立していません。各マウスは、2 つのデータ ポイントを得られますので測定)。繰り返しの測定でマウス使用する双方向の分散分析反復測定の 2 つのグループ裁判 (トレーニング OLT 対) と 2 番目の要素のグループ割り当てされています。治療群間の差は事後テストは、試験内で互いにグループを比べるべきです。

また、OLT または水資源で記憶の証拠は、テストされているすべては、50% の固定値とオブジェクトの調査の時間の割合の 1 サンプルの t 検定が使用できます。時間の割合 50% より有意に高いでは、オブジェクトのメモリを示唆しています。50% 以下大幅時間の割合 (理由) は、嫌悪感を示しているし、オブジェクトの選択を再評価する必要があります。ただし、1 標本の t 検定 2 つ以上のグループが互いに異なるかどうかを明らかにすることはできません。たとえば、マウス、グループ A は p の新規オブジェクトに時間の 60% を使った場合の 2 つのグループの実験で 50%、B 群 0.049 で 1 サンプルの t テスト比較を = p の 59% の新規オブジェクトに時間を過ごしただけ = 0.051、グループ A は 50% と大幅に異なる (およびグループ B ではない)。ただし、それはこれらの 2 つのグループは互いと大幅に異なる結論に誤りです。2 サンプルの t テスト比較する A と B がこれらの 2 つのグループは統計的に区別されないについて明らかにする簡単にすることができます。最終的な目標は、2 つ以上のグループのメモリのパフォーマンスを比較することは、それらのグループは、外部標準と比較してだけではなく、お互いに統計的に比較する必要があります。トレーニングと OLT の間移動したオブジェクトと一緒に過ごした時間の比較のために同様のガイドラインが適用されます。この場合、トレーニングと OLT の移動したオブジェクトとの時間の割合で重要な違いを見つけることとは別の 1 つのグループで表示されませんこれらのグループが統計学的に異なっています。グループは、事後だけでなく複数のグループ内試験各試験内でお互いと比較をする必要があります。

任意の個々 のマウスの調査時間は、メモリについてのエビデンスとして使用できません注意してくださいすることが重要です。むしろ、メモリ オブジェクトの場所またはこれらのタスクの id のみ判断できますは別のグループの集計データまたは固定チャンス レベル (50 時間、弁別比 0%) と比較して統計的に集計データに基づいて。サンプル サイズは、特定の操作と動作は、どちらの順番によって異なります使用されているマウスの可変性の効果サイズ大きく依存が必要があります。年齢、性別、および操作の変動に影響を与えるすべての。図 3 a 3 b、n で提示された例のデータで 14 = 0.65 α と対 t 検定の 0.68 の効果サイズそして力を降伏、被験者が使用された = 0.05。この比較のため 0.8 の力が求められ、18 のサンプル サイズが必要になります。

この議論は、p 値の周りフレームと意義ヒューズこれらは最も一般にメジャーと解析ので OLT と水資源データに関する報告したがって、実験者と校閲者の両方に精通することは。この p 値依存は、統計的に無効な²⁶として強く批判されています。ただし、代替分析法は存在し、いくつかのジャーナル²⁷で推奨している、けれどもどれも広くとして採用されています行動および生物医学の分野で標準的な²⁶。

要約すると、このプロトコルは効果的に最小限のコストでマウスのメモリをテストします。プロトコルに適切な修正のための推薦はあらゆる小さい齧歯動物モデルと実装の成功を確保するために含まれます。このプロトコルの特定のけがや治療的介入モデルへの応用が研究されている細胞および分子メカニズムを補完する貴重な機能的関連性を明らかにできます。