A Visual Guide for Studying Behavioral Defenses to Pathogen Attacks in Leaf-Cutting Ants

Stephen Nilsson-M&#248;ller; Michael Poulsen; Tabitha M. Innocent

doi:10.3791/58420

JoVE Journal > Behavior

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Sciences du comportement

Ein visueller Leitfaden für das Studium des Verhaltens Abwehr zu Erreger greift in Blatt-schneiden-Ameisen

Published: October 12, 2018

doi:

10.3791/58420

Stephen Nilsson-Møller¹, Michael Poulsen¹, Tabitha M. Innocent¹

¹Centre for Social Evolution, Section for Ecology and Evolution, Department of Biology,University of Copenhagen

Summary

Präsentieren wir Ihnen eine visuelle Anleitung zur Krankheit Verteidigung Verhaltensweisen in Blatt-schneiden Ameisen, mit einzelnen Clips und begleitenden Definitionen, dargestellt in einem Szenario mit experimentellen Infektion. Unser Hauptziel ist, helfen, andere Forscher wesentliche defensive Verhaltensweisen zu erkennen und ein gemeinsames Verständnis für die zukünftige Forschung in diesem Bereich bereitzustellen.

Abstract

Die komplexen Lebensstil, evolutionäre Geschichte der erweiterten Zusammenarbeit und Krankheit Verteidigung von Blatt-schneiden Ameisen sind gut untersucht. Obwohl zahlreiche Studien die Verhaltensweisen im Zusammenhang mit Krankheit Verteidigung und den damit verbundenen Einsatz von Chemikalien und Antibiotika beschrieben haben, hat keine gemeinsame visuelle Referenz vorgenommen. Das Hauptziel dieser Studie war, kurze Clips von Verhaltensweisen Krankheit Verteidigung, sowohl direkt als auch prophylaktisch ausgerichtet ein Antagonist von der Kolonie nach Infektion beteiligt aufnehmen. So wir ein Experiment Infektion mit Sub-Kolonien der Blatt-schneiden Ameisenarten Acromyrmex Echinatiorund die wichtigsten bekannten Pathogenen Bedrohung für die Ameisen Pilz Ernte benutzten zu tun (Leucoagaricus Gongylophorus), einer spezialisierten pathogene Pilze der Gattung Escovopsis. Wir gefilmt und gegenüber infizierten und nicht infizierte Kolonien im frühen und fortgeschrittenen Stadien der Infektion. Wir quantifiziert wesentliche defensive Verhaltensweisen über Behandlungen und zeigen, dass die Verhaltensreaktion auf Erreger Angriff wahrscheinlich zwischen unterschiedlichen Kasten von ArbeiterInnen und frühe und späte Erkennung einer Bedrohung variiert. Basierend auf diesen Aufnahmen haben, die wir eine Bibliothek von Verhaltens-Clips, begleitet von Definitionen der wichtigsten individuellen defensive Verhaltensweisen gemacht. Wir gehen davon aus, dass solch ein Führer kann einen gemeinsamen Bezugsrahmen für andere Forscher arbeiten in diesem Bereich bieten zu erkennen und diese Verhaltensweisen zu studieren und auch mehr Spielraum für den Vergleich von verschiedener Studies um letztlich zu helfen, besser zu verstehen, die Rolle Diese Verhaltensweisen spielen bei Krankheit Verteidigung.

Introduction

Blatt-schneiden Ameisen sind soziale Insekten, bilden einige der komplexesten Kolonien auf der Erde weit fortgeschritten. Sie sind ein abgeleiteten Zweig der Pilz-wachsende Ameisen (Stamm Attini) bestehend aus den beiden Gattungen Acromyrmex und Atta¹. Sie pflegen die Pilz Kulturarten Leucoagaricus Gongylophorus (Basidiomycota: Agaricales), die sie als ihre Hauptnahrung Quelle²^,³verlassen. Die Ameisen liefern dieses Pilzes mit frischem Blattmaterial für das Wachstum, und im Gegenzug produziert der Pilz nährstoffreichen geschwollene bodenaggregaten Tipps (Gongylidia), die durch die Ameisen und ihre Brut verbraucht werden. Kolonien sind unterirdisch gebaut, die Pilze Ernte bleibt in externen Gärten⁴^,⁵und die Ameise Bauern ihre Ernte Monokultur verhindern potenzielle Krankheitserreger⁶^,⁷^,⁸ ^,⁹^,¹⁰^,¹¹^,¹². Kolonien Teilen Arbeit zwischen Arbeitnehmern unterschiedlicher Größe (Kaste) und Alter¹³^,¹⁴^,¹⁵, die auf die Verteidigung von Ameisen und Ernte von Krankheitserregern erstreckt.

Wir erwarten, dass Blatt-schneiden Ameisenkolonien anfällig für Krankheiten sein sollte. Gruppenlebens soll die Ausbreitung von Krankheiten zwischen verwandte Berufe durch häufige Interaktionen und somit einfacher Getriebe¹⁶zu erleichtern. Die Ameisen sind anfällig für pilzliche Parasiten enthopathogenische, wie Metarhizium Arten und Beauveria Bassiana⁶. Diese Parasiten sind Generalisten und sind oft der Boden in der Nähe der Nester⁷^,⁸. Landwirtschaft der Pilz Ernte als Monokultur⁴^,macht⁵ es wahrscheinlich auch anfällig für Krankheit¹⁷^,¹⁸. Es kann infiziert werden Generalisten pilzlichen Parasiten (inkl. Aspergillus Niger und Trichoderma Arten³); die größte Bedrohung ist jedoch ein Spezialist nekrotrophe Pilz der Gattung Escovopsis (Schlauchpilze: Hypocreales)¹¹. Durch Sekretion von Mycolytic Enzymen und anderen Verbindungen Escovopsis tötet und erhält Nährstoffe aus dem Pilz Ernte¹², mit fatalen Folgen für die Ameise Kolonien¹¹^,¹⁹.

Um Bedrohungen durch Krankheiten zu bekämpfen, haben die Ameisen bemerkenswerte Verteidigung auf Individuum und Kolonie Ebene, kombiniert biologische Kontrolle, Verhaltens- und Chemische Abwehr zu prophylaktisch und, wenn nötig, in Reaktion auf eine Infektion handeln. Gemeinsam, diese Schutzmaßnahmen verhindern oder verringern die Auswirkungen von Infektionen von Generalist Krankheitserreger und Spezialisten wie Escovopsis. Im großen und ganzen beinhalten sie vermeiden die Kontraktion der Parasiten in der Umgebung²⁰, Parasiten in das Nest, und Begrenzung der Ausbreitung der Infektion innerhalb der Nester zu verhindern. Die ersten Zeilen der Verteidigung enthalten Chemikalien von glandulären Absonderungen³^,²¹^,²²^,²³^,²⁴^,²⁵^,²⁶^, ²⁷ , pflanzlichen Substraten durch Arbeitnehmer leckte sie vor dem Einbau in den Pilz Garten und Ameisen, die Durchführung der selbst- und Allogrooming zu desinfizieren. Selbst pflegen vor allem beim Betreten des Nests, können Arbeitnehmer auch saure fäkale Ausscheidungen auf ihren Körper²⁷anwenden. Diese prophylaktische Schutzmaßnahmen sind nachweislich wichtige Infektion durch pathogene Bedrohungen⁶^,⁷^,⁸^,⁹^,¹⁰^,¹¹^{zu vermeiden,} ¹².

Wenn nicht erste Abwehr und ein Erreger wie Escovopsis gelingt es beim Eintritt in das Nest und den Pilz Garten und Infektion in einem frühen Stadium erkannt wird, verwenden Sie die Ameisen Pilz Sporen²⁵^,²⁸_. entfernen Pflege Die Ameisen können gelten Sekrete aus den Metapleural Drüsen oder übertragen die Sporen auf die Infrabuccal Tasche (Mundhöhle), wo sie mit einem chemischen Cocktail mit Metapleural und Lippen Drüse Absonderungen²⁶gemischt sind. Es gibt mehr als 20 bekannte Verbindungen in diese Drüsen, einschließlich γ – Keto – carboxylic- und Indoleactic Säuren³. Diese sind aktiv angewandten²⁵, Antibiotika, fungistatisch und pilztötenden Eigenschaften²⁹und Escovopsis Spore Keimung³⁰hemmen können. Sporen in die Infrabuccal Tasche gespeichert sind später außerhalb der Kolonie³¹^,³²vertrieben. Die meisten dieses Pilzes Pflege folgende frühe Erkennung erfolgt durch minorarbeiterinnen²⁸^,³³. Jedoch wenn ein Erreger schafft eine Erkennung zu vermeiden und breitet sich im Pilz Garten, sowohl kleinere und größere Arbeiter Unkraut infizierten Teile der Pilz²⁸und das abgetragene Material lagert sich außerhalb der Nest-³¹. Darüber hinaus verwaltet Arten der Blatt-schneiden-Gattung Acromyrmex verwenden biologische Kontrolle in Form von Antibiotika produziert von symbiotischen Actinobacteria³⁴^,³⁵^,³⁶— auf die Ameise Kutikula³⁷von vorwiegend jungen großen Arbeiter³⁴^,³⁸^,³⁹^,⁴⁰— , Verbindungen zu produzieren, die Myzel Wachstum des Escovopsis zu verhindern ³⁴ ^, ³⁸ ^, ⁴¹. dieser antibiotischen Produktion kann wiederum durch Escovopsisbeeinträchtigt werden-Verbindungen während einer Infektion¹⁹produziert.

Abbildung 1: morphologische Merkmale Ant. Eine schematische Zeichnung einer Ameise zeigt die morphologischen Strukturen im Protokoll erwähnt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Blatt-schneiden Ant Verteidigung bilden damit eine integrierte Montage von Verhaltens- und chemischen Mechanismen, die gemeinsam diese Ameisen sehr effizienten Schutz vor Krankheit⁴²zur Verfügung zu stellen. Das Verständnis dieser Schutzmaßnahmen ist von breites Interesse, und sie wurden ausgiebig recherchiert¹⁶^,²⁰^,⁴²^,⁴³^,⁴⁴. Allerdings ist eine visuelle Zusammenstellung der defensive Verhaltensweisen, die eindeutige Definition helfen würde und Beschreibung von ihnen für den systematischen Einsatz von Forschern, unseres Wissens nicht verfügbar. Obwohl die Terminologie Ameise Verhalten beschreiben relativ standardisiert ist, gibt es daher keine Gewissheit, dass die gleichen Verhaltensstörungen Handlungen konsequent in verschiedenen Studien benannt sind. Hier ist unser oberstes Ziel, dies zu beheben, indem Sie Klarheit und Standardisierung durch eine Zusammenstellung von video-Aufnahmen von einzelnen prophylaktischen und defensive Verhaltensweisen begleitet von zugehörigen Definitionen. Wir drehten diese Clips während eines Verhaltens Experimentes, in denen wir beobachtet und quantifiziert Verhaltensweisen im Rahmen der experimentellen Escovopsis Infektionen Acromyrmex Echinatior Sub-Kolonien, deren Ergebnisse wir auch hier präsentieren als ein anschauliches Beispiel für die Verwendung dieser Zusammenstellung für Verhaltensstudien.

Protocol

1. Escovopsis Isolierung Escovopsis Stämme aus Acromyrmex Echinatior Labor Kolonien, indem man Pilz Garten Fragmente, mit Ameisen entfernt, auf einer Petrischale mit feuchter Watte für mehrere Tage bis Escovopsis keimt und sporulates zu isolieren. Übertragen Sie Sporen auf Kartoffel-Dextrose-Agarplatten (PDA, 39 g/L) und ca. zwei Wochen bei ca. 23° C inkubieren.Hinweis: In der aktuellen Studie wurde ein Stamm verwendet. Verwenden Sie eine sterile Nadel Reife Sporen von diesen ersten Platten herausgreifen. Wählen Sie genug Sporen an die Spitze der Nadel zu decken. Sporen auf neue Platten unter sterilen Bedingungen zu impfen und inkubieren Sie bei ~ 23 ° C für etwa zwei Wochen. Wenn Hyphen bedeckt die gesamte Platte und gewachsen in Reife braune Sporen, wiederholen Sie Schritt 1.3, aber diesmal mit Sporen von der neue PDA-Platte. Wiederholen Sie den Vorgang, bis ein sauberer Bestand an Escovopsis für jede Belastung ist (keine sichtbaren Verunreinigungen wächst auf oder unter der Plattenoberfläche) erworben. 2. Versuchsaufbau Verwenden Sie drei A. Echinatior Kolonien.Hinweis: Hier wurden die Kolonien Ae160b, Ae322 und Ae263 verwendet. Machen Sie aus jeder Kolonie 12 Sub Kolonien. Machen Sie sechs Sub-Kolonien zur Beobachtung nach 0 h und sechs Sub-Kolonien zur Beobachtung nach 72 h. Es gibt insgesamt 36 Sub Kolonien; Markieren Sie die Hälfte der Sub Kolonien von jeder “Elternteil” Kolonie als Kontrolle und die andere Hälfte als”Escovopsis Behandlung”.Hinweis: Während in übergeordneten Kolonien das Vorhandensein einer Königin betrifft Arbeitnehmer Verhalten, wir erwarten (obwohl dies nicht garantiert werden kann), dass Königin weniger Sub-Kolonien sind wahrscheinlich Verhalten als weiselrichtigen Kolonien für die kurze Zeit, die das Experiment ausgeführt wird. Verwenden Sie für jede Sub-Kolonie ein Rechteck der Länge: ~ 3,15 Zoll (8 cm), Breite: ~ 2,17 Zoll (5,5 cm) und Tiefe ~ 1,77 Zoll (4,5 cm).Hinweis: Der wichtige Punkt ist, bieten genügend Platz für Ameisen außerhalb der Pilz-Fragment, Futter und Abfall dump, aber zur gleichen Zeit die Box klein genug zu machen, dass die Dreharbeiten und Verhalten Anerkennung möglich ist. Für jede Sub-Kolonie, fügen Sie einen Teelöffel Größe (ca. 2,2 cm3 und 1,2 g) Stück des zentralen Teils des Gartens Pilz (L. Gongylophorus) aus der ursprünglichen Kolonie, ein paar Blätter Bramble, und ein Stück Watte in Wasser eingeweicht.Anmerkung: Die Watte liefert Feuchtigkeit. Es sollte nicht mit Wasser tropft, und sollte den Pilz Garten nicht berühren. Verwenden Sie für Sub-Kolonien mit Escovopsisbehandelt eine Impfschlinge zu und füllen Sie die Öffnung zu, so dass es nur durch Escovopsis Sporen bedeckt ist. Impfen Sie die Sporen durch leichtes Klopfen eine kleine, lokalisierte Teil des Gartens Pilz zehn bis zwanzig Mal, so dass die Sporen auch nicht gruppiert sind. Für Sub-Kolonien als Steuerelemente verwendet die Anwendung des Escovopsis auf den Pilz-Garten mit einem sterilen Impfschlinge zu imitieren.Hinweis: Obwohl dies nicht in dem vorliegenden Experiment gemacht wurde, kann die Impfung von einem sterilen Pulver (wie Graphit oder Talkum-Puder) in diesem Stadium zur Unterscheidung eine Infektion mit einem Krankheitserreger und inerte Vermittler erfolgen. Für 72 h Beobachtungen, lassen Sie die Hälfte der Sub-Kolonien (steuert und infiziert) für 72 h nach Einführung des Escovopsis vor dem Hinzufügen von Ameisen oder Videoaufzeichnung zu initiieren.Hinweis: Warten 72 h in der Abwesenheit von Ameisen macht es wahrscheinlich, dass Escovopsis Sporen (unveröffentlichte in-vitro- Daten); Keimen wird Obwohl dies erhöht auch die Chance, andere Infektionen (z. B. aus einem Pilz in Pilz Garten bereits vorhanden), empfiehlt sich dieser Zeitraum für diese Behandlung in der frühen Phase einer etablierten Infektion darstellen. 0 h Beobachtungendirekt nach Schritt 2,6 und ca. 30 min vor der Aufnahme fügen Sie zwei Brut, vier minorarbeiterinnen und vier großen Arbeiter gleichzeitig aus der übergeordneten Kolonie jede Box hinzu. Verwenden Sie zwei große Arbeiter aus innerhalb des Gartens, die jungen mit leichten Pigment mit Actinobacteria die meisten der Nagelhaut. Nehmen Sie die beiden anderen von außerhalb des Gartens, mit dunklen Pigment und Actinobacteria nur für die Laterocervical-Platten. Wiederholen Sie für 72 h Beobachtungen2.8 und 2.8.1 bei 30 min vor der Aufnahme, d. h.71,5 h nach der Inokulation mit Escovopsis.Hinweis: Experimentelle Sub-Kolonien sind deutlich kleiner als etablierte natürliche Acromyrmex Kolonien. Dies ist notwendig, um Verhalten genau aufzuzeichnen. Während dies die Häufigkeit der einige Verhaltensweisen qualitativ beeinflussen kann, wurde die Zusammensetzung der Sub Kolonien gewählt, um die Vermengung von Arbeitnehmern in natürlichen Kolonien eher qualitativ die Verhaltensstörungen Interaktionen reflektieren widerspiegeln. (3) video-Aufzeichnung und Bewertung von Verhaltensweisen Verwenden Sie ein USB-Endoskop mit einem Laptop (oder Äquivalent) befestigt und sorgen für ausreichend Licht. Führen Sie für jede Sub-Kolonie video-Aufzeichnung für 4 h (ab 0 h oder 72 h nach der Infektion). Nach der Aufnahme der 36 Sub Kolonien, Überprüfen der insgesamt 144 h von Filmmaterial und Gäste alle Verhaltensweisen von Interesse für alle Individuen in jeder Sub-Kolonie.Hinweis: Im aktuellen experimentellen Beispiel hatten wir zwei Sub-Kolonien (ein Steuerelement aus Kolonie Ae160b) und Sub-Kolonie aus Kolonie Ae322 Behandlung aufgrund einer Infektion mit Pilzen als Escovopsis, Reduzierung der Gesamtzahl der Stunden Beobachtungen ausschließen 136. Jedes Mal, wenn eine Verhalten ist zu beobachten, zeichnen Sie es als 1 auftreten.Hinweis: Eine Verhalten kann für kurze oder lange Dauer, sondern nur Ergebnis sei es als > 1, wenn es durch ein anderes Verhalten unterbrochen wird, oder wenn die Ameise für einen bestimmten Zeitraum hinweg passiv ist. 4. Verhalten Hinweis: Behavioral Definitionen wurden mit einer Kombination aus Beschreibungen von früheren Studien23,27,28,31,45 und persönlichen Beobachtungen. Für eine detaillierte Darstellung präsentiert wichtige morphologische Strukturen im Protokoll für die Anerkennung von Verhaltensweisen verwendet siehe Abbildung 1. Selbst die Pflege und Reinigung-Antenne (Video 1) Feststellen Sie, wenn die Ameise hält Beinbewegung selbst Pflege einzuleiten. Überprüfen Sie, dass die Antennen sind durch die Antenne Reiniger an den Vorderbeinen (Abbildung 1) gezogen, eine Klammer-Struktur befindet sich auf der Tibia-Tarsus Gelenk bestehend aus eine Kerbe, die mit Blick auf einem Felsvorsprung mit verschiedenen großen Borsten und Kämme45, 46. Nach der Reinigung der Antenne zu beobachten, dass die Ameise die Beine und die Antenne-Reiniger reinigen wird durch Ziehen an die Beinen durch die Mundwerkzeuge, die Entfernung von Partikeln und potenzielle Krankheitserreger mit der Glossa (Abbildung 1).Hinweis: Selbst pflegen kann bestehen aus Reinigung der Antenne und anschließend die Antenne-Reiniger (Abbildung 1), aber auch mit Mundwerkzeuge, reinigen Sie die Beine. Wenn eine Ameise seine Beine Reinigung ist, reinigt es in den meisten Fällen alle sechs Beine nacheinander. Pilze putzen (Video 2) Hinweis Wenn die Ameise Beinbewegungen an einem festen Punkt auf dem Pilz Garten hält. Beachten Sie, dass die Antennen sind unbeweglich und parallele deutete auf den Pilz, so dass der Winkel zwischen Schaft und Funiculus (Abbildung 1) ca. 45 beträgt °, und die Spitze der Antennen sind fast berühren einander, in der Nähe von den Spitzen der Mandibeln ( ( Abbildung 1). Beachten Sie, dass die obere (Osseointegration) und unteren (Labium) Mundwerkzeuge offen sind, mit den aufstrebenden Glossa (Abbildung 1), den Pilz zu lecken. Allogrooming (Video 3) Beobachten Sie dieses Verhalten, wenn eine oder mehrere Ameisen einen anderen (Empfänger) Ameise oder umgekehrtgenähert haben. Während das Verhalten der Ameisen stoppen Sie Bewegung und eng zusammenstehen mit Körperkontakt. Die Pflege Ant(s) kann leicht bewegt, um einen größeren Bereich des Körpers die Empfänger Ameise zu decken. Beachten Sie, dass die Antennen der Herkunftsstaat bewegungslos und wies auf einen bestimmten Punkt des empfangenden Ameise oder bewegen und leichtes Klopfen des Empfängers sein können. Der Winkel zwischen dem Schaft und der Funiculus (Abbildung 1) beträgt ca. 45° je nachdem, ob sie an einem bestimmten Punkt oder klopfen befestigt sind. Die Spitzen des Schauspielers Antennen sind in der Regel in der Nähe von einander und die Spitzen der Mandibeln (Abbildung 1). Beachten Sie, dass die obere (Osseointegration) und unteren (Labium) Mundwerkzeuge offen sind, mit den aufstrebenden Glossa (Abbildung 1), die Empfänger-Ameise zu lecken. Metapleural Drüse Pflege (Video 4) Wenn die Ameise Bewegung initiieren Metapleural Drüse (Abbildung 1) Pflege aufhört zu beobachten. Beachten Sie, dass die Ameise neigt sich zur Seite, der seine Vorderbeine zurück zu reiben Sie die Öffnung (Meatus) der Metapleural Drüse (z. B. den rechten vorderen Bein) zu erreichen.Hinweis: Das vordere Bein ist gleichzeitig (in diesem Beispiel dem linken Vorderbein) leckte von Glossa (Abbildung 1). Überprüfen Sie, dass die Ameise lehnt sich an die Gegenseite und Beine schaltet und die gleiche Bewegung mit dem gegenüberliegenden Beinen wiederholt. Die Ameise weiterhin die Vorderbeine an den Metapleural Drüsen und danach an die Glossa ständig Wechsel zwischen Beinen (Abbildung 1) bewegen.Hinweis: In diesem Beispiel wird die Ameise nun das linken Vorderbein, die Metapleural Drüse und rechtes Vorderbein, Glossa (Abbildung 1) weitergeleitet. Nach Metapleural Drüse (Abbildung 1) Pflege löst die Ameise oft selbst Pflege (Schritt 4.1). Spore Jäten (Video-5) Beobachten Sie dieses Verhalten, stoppt die Ameise Beinbewegungen an einem festen Punkt auf dem Pilz-Garten. Beachten Sie, dass die Antennen sind unbeweglich und parallel, deutete auf den Pilz, so dass der Winkel zwischen Schaft und Funiculus ca. 45° beträgt und die Spitzen der Antennen fast einander und die Spitzen der Mandibeln (Abbildung 1 berühren sind). Überprüfen Sie, dass die Ameise seine Mandibeln (Abbildung 1) zu greifen sichtbare Escovopsis Sporen und trennen sie die Pilze Ernte öffnet durch sie abziehen. Die Ameise trägt die Cluster von Sporen aus dem Nest, während die Fühler sanft bewegen zur Orientierung. Die Antennen können durch die Antenne-Reiniger (Abbildung 1; siehe Video 1) gereinigt werden, halten Sie den Cluster von Sporen. Die Ameise fällt die Sporen in eine Halde.Hinweis: Aufzeichnung von Aktivitäten rund um die Halde wurde nicht in das aktuelle Experiment getan aber wäre eine geeignete Erweiterung des derzeitigen Protokolls. Pilz Jäten (Video 6) Dieses Verhalten zu beobachten, wenn die Ameise Beinbewegungen an einem festen Punkt des Pilzes aufhört. Die Antennen sind lose auf den Teil des Pilzes, die die Ameise versucht zu entfernen, während das Pilz-Stück leicht antippen, wies darauf hin. Beachten Sie, dass die Ameise ihre Mandibeln, entweder Schnitt durch den Pilz Ernte verwendet, um einen bestimmten Bereich zu lösen oder zu einen Teil der Pilz mit ihren Mandibeln (Abbildung 1) greifen. Die Ameise rocken auf seinen Beinen gleichzeitig von Seite zu Seite, während es dem Pilz Stück zieht.Hinweis: Jäten kann durch mehrere Arbeitskräfte und Minderjährige und Majors durchgeführt werden. Wenn ja, einige Ameisen das Pilz-schneiden, führen andere das Schaukeln und Bewegung ziehen. Der freistehende Teil des Pilzes ist außerhalb des Nestes durchgeführt und in der Halde abgesetzt. Aufnahme der Abfälle Anzahlung erfolgte nicht in das aktuelle Experiment aber wäre eine geeignete Erweiterung des derzeitigen Protokolls. Fäkale Flüssigkeit Pflege (Video 7) Beobachten Sie dieses Verhalten, stoppt die Ameise Beinbewegungen an einem festen Punkt auf dem Pilz-Garten. Die Ameise beugt seine Gaster (Abbildung 1) und Kopf gegeneinander um ein Tröpfchen von fäkalen Flüssigkeit auf die Mundwerkzeuge anzuwenden. Beachten Sie, dass die Ameise die Vorderbeine durch die Mandibeln (Abbildung 1), einzeln nacheinander zieht. Anschließend verschiebt die Ameise die Fühler durch die Antenne-Reiniger (Abbildung 1) befindet sich auf der Tibia-Tarsus Gelenk der Vorderläufe. Droplet Regurgitation (Video 8) Dieses Verhalten zu beobachten, wenn die Ameise Beinbewegungen an einem festen Punkt des Pilzes aufhört. Die Antennen sind unbeweglich und parallel, deutete auf den Pilz, so dass der Winkel zwischen Schaft und Funiculus ca. 45° beträgt und die Spitzen der Antennen fast berühren einander und die Spitzen der Mandibeln (Abbildung 1). Beachten Sie, dass die Ameise einen Tropfen der Flüssigkeit auf den Pilz, variierend von transparent gelb oder sogar braun, aus ihrer Mundwerkzeuge Licht erbricht.

Representative Results

Das Hauptziel dieser Studie war die Erstellung von kurzen Clips, die illustrieren Verhaltensweisen im Zusammenhang mit Krankheit Verteidigung in Blatt-schneiden Ameisen, erzeugen einen Katalog als Referenz für zukünftige Studien verwendet werden. Darüber hinaus nutzt die Studie ein Beispiel des Versuchsaufbaus, innerhalb derer diese Verhaltensweisen quantifiziert wurden, um zu zeigen, wie dieser Katalog in Verhaltensstudien, verwendet werden dürfen, deren repräsentative Ergebnisse fassen wir hier zusammen. Sub-Colonies wurden für die Beobachtung im frühen Stadium (0 h) und späten Stadium (72 h) Infektion eingerichtet. Aufgrund von schweren Infektionen mit Pilzen als Escovopsis nach 72 h wurden zwei Sub-Kolonien (ein Steuerelement für die Kolonie Ae160b) und eine Behandlung für die Kolonie Ae322 ausgeschlossen, so dass wir die Präsentation der Ergebnisse konzentrieren sich auf den Zeitpunkt 0 h und legen weniger Wert auf, Verhalten nach 72 Stunden beobachtet. Nach Dreharbeiten alle Sub-Kolonien und scoring der defensive Verhaltensweisen, fanden wir Unterschiede in Verhaltensweisen im Zusammenhang mit der Zeit nach der Infektion und Kontext, einschließlich die verschiedenen Möglichkeiten, in denen sie durch kleinere und größere Arbeitskräfte eingesetzt wurden. Im Gegensatz dazu wurde selbst Pflege an aller Zeiten in Kontrolle und infizierten Sub Kolonien durchgeführt. Es war auch üblich, wenn Ameisen waren suchen und versuchen, zu entfernen, Escovopsis hyphen oder Sporen. Da dieses Verhalten so allgemein beobachteten und häufig in allen Situationen war, wir nicht quantifizieren. Wir erzielten alle anderen Verhaltensweisen, die in das Protokoll und den vorliegenden berechnete gesamte und durchschnittliche Frequenzen für kleinere und größere Arbeiter pro Sub-Kolonie (Tabelle 1) beschrieben. Wir fanden, dass Kontrollen, minorarbeiterinnen, der Garten Ernte mehr als wichtige Mitarbeiter (Abb. 2a gepflegt) und anekdotisch beobachtet, dass sie mehr in den Pilz-Garten Zeit. In Kolonien mit Escovopsis infiziert gab es eine Tendenz für die erhöhte Pilz Pflege insgesamt relativ zum Steuerelement Kolonien, aber dies war nicht signifikant (F1,23 = 2,80, p = 0.1077; Tabelle 2; Abbildung 2 ein). gab es eine nicht signifikante Erhöhung fäkale Grooming mit Infektion (F1,23 = 0,60, p = 0.4455; Tabelle 1) aber keinen Unterschied zwischen kleinen und großen Arbeiter (Abbildung 2b). Wir beobachteten fäkale grooming als Arbeitnehmer den Pilz kam anstatt auf oder völlig abseits der Pilz für längere Zeit. Abbildung 2: Häufigkeit der Pflege Veranstaltungen. Mittlere Anzahl (± Standardfehler (SE); n = 9) (a) Pilz Pflege und (b) fäkale Flüssigkeit Pflege Veranstaltungen innerhalb von vier Stunden nach der Inokulation, vergleicht man kleinere und größere Arbeitnehmer bei Kontrollen und Escovopsis Behandlungen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur. Verschiedene Verhaltensweisen waren extrem selten. Wir beobachten nur Metapleural Drüse Pflege viermal, und alle Instanzen ereignete sich nach 72 h; einmal in der Kontrollgruppe, und dreimal in Kolonien mit Escovopsis Infektion (Tabelle 1). Fast so selten fanden wir, dass Ameisen einen Tropfen auf den Pilz-Garten und ein paar Mal außerhalb der Pilz (Tabelle 1) Erbrechen würde. In den Gruppen 0 h geschah dies einmal in einer Kontrolle Sub-Kolonie und zweimal in infizierten Kolonien – in allen drei Fällen das Verhalten von einem großen Arbeiter durchgeführt wurde. Bei einer Gelegenheit regurgitated eine geringfügige Arbeitskraft ein Tröpfchen in der Ecke der Box und sobald eine wichtige Arbeitskraft das gleiche auf einem Blatt Bramble, sowohl in der Escovopsis -Behandlung Tat. In den Kolonien 72 h wurde Tropfen Aufstoßen auf den Pilz nie beobachtet in den Kolonien steuern aber siebenmal in infizierten Kolonien geschehen. Sechs davon wurden von großen Arbeiter und drei davon von einer einzigen Person, die Tröpfchen außerhalb der Pilz Garten hinzugefügt. Spore Jäten (Abbildung 3ein) und Pilz Jäten (Abbildung 3b) waren beide niedriger Frequenz. Zwar gab es keinen signifikanten Unterschied in der Häufigkeit der Pilz Jäten zwischen infizierten Kolonien und Kontrollen, es gab eine Tendenz für das Jäten mit der Zeit seit Infektion erhöhen (F1,23= 2,91, p = 0.1014; Tabelle 2). Unsere Beobachtungen auf Escovopsis Spore Jäten, die mit der Zeit nicht wesentlich geändert haben, aber es gab eine Tendenz für eine höhere Frequenz in Kolonien infiziert mit Escovopsis als bei nicht infizierten Kontrollen (F1,23 = 3,27, P = 0.0838; Tabelle 2). weniger Sub-Kolonien mit Escovopsis infiziert hatten sichtbare Sporen bleiben nach dem Beobachtungszeitraum mit eine frühe Infektion (wenn Ameisen nach 0 h der Spore-Impfung eingeführt wurden), mit Ameisen entfernen alle Sporen in fast die Hälfte der Sub-Kolonien (4/9; Abbildung 3 ( c). im späteren Stadium Infektionen (wo Ameisen nach 72 h der Spore-Impfung eingeführt wurden), die Ameisen waren nicht in der Lage entfernen Sporen vollständig in jedem der Sub-Kolonien. Zusammengenommen deuten diese Beobachtungen eine Tendenz für Ameisen, von Spore Pilz im Laufe einer Infektion Jäten Jäten zu verlagern. Abbildung 3: Häufigkeit der Ereignisse Jäten. Meine Frequenz (± Standardfehler (SE); n = 9) (a) Spore Jäten (des Escovopsis Sporen) und (b) Pilz (Escovopsis oder andere Pilze) während eines Beobachtungszeitraums von 4 h Vergleich von Minderjährigen und Majors von Behandlungsgruppen, Jäten und (c) die Anzahl der Sub-Kolonien mit sichtbaren Escovopsis Sporen in Behandlungsgruppen am Ende des Beobachtungszeitraums. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur. Minorarbeiterinnen – Steuerung Minorarbeiterinnen – Behandlung Großen Arbeiter – Kontrolle Wichtige Mitarbeiter – Behandlung 0h Pilz Pflege 84 (9.333) 131 (14,56) 37 (4.111) 66 (7.333) Allogrooming 6 (0.6667) 14 (1,556) 5 (0.5556) 6 (0.6667) Spore Jäten 0 3 0 5 (0.5556) Pilz Jäten 0 0 0 0 Fäkale Fluid Pflege 46 (5.111) 69 (7.667) 27 (3.000) 48 (5.333) Tropfen Anwendung 0 0 1 (0.1111) 2 (0.2220) Metapleural Drüse Pflege 0 0 0 0 12. Pilz Pflege 10 (1.429) 45 (5.000) 24 (3.429) 38 (4.222) Allogrooming 2 (0.2857) 10 (1.111) 1 (0.1110) 4 (0.4440) Spore Jäten 0 0 0 1 (0.1110) Pilz Jäten 0 1 (0.1110) 0 2 (0.2220) Fäkale Fluid Pflege 19 (2.714) 38 (4.222) 30 (4.286) 30 (3.333) Tropfen Anwendung 0 1 (0.1110) 0 6 (0.6667) Metapleural Drüse Pflege 0 2 (0.2220) 1 (0.1429) 1 (0.1110) Tabelle 1 : Die Anzahl der Verhaltensweisen in vier Stunden der Beobachtung bei 0 und 72 h nach Escovopsis Impfung. Die durchschnittliche Gesamtzahl der Beobachtungen (mit mittleren Frequenzen pro Person in Klammern), kleinere und größere Arbeiter von Kontroll- und Escovopsis Infektion Sub Kolonien, bzw. vergleichen (n = 9). Typ 3-Prüfungen der fixierte Effekte Pilz Pflege Allogrooming Fäkale Pflege Spore Jäten Pilz Jäten Auswirkungen NUM DF Den DF F-Wert PR > F NUM DF Den DF F-Wert PR > F NUM DF Den DF F-Wert PR > F NUM DF Den DF F-Wert PR > F NUM DF Den DF F-Wert PR > F Kolonie 2 23 0,77 0.4733 2 23 0,52 0.5989 2 23 0,54 0.5903 2 23 0.51 0.6052 2 23 1.17 0.3272 Sub-Kolonie (Kolonie) 6 23 0.93 0.4892 6 23 0.51 0.7978 6 23 0,63 0.7067 6 23 1.67 0.1742 6 23 1,53 0.2127 Behandlung 1 23 2.8 0.1077 1 23 1,85 0,1875 1 23 0,6 0.4455 1 23 3.27 0.0838 1 23 1 0.3275 Zeit 1 23 6.53 0.0177 1 23 0,88 0.3574 1 23 0,97 0.3361 1 23 0,53 0.4742 1 23 2.91 0.1014 Tabelle 2 : Statistische Ergebnisse der gemischten ANOVA tests auf eigene Verhaltensweisen, die für die statistische Analysen durchgeführt werden könnte. Fixierte Effekte wurden Kolonie, Sub-Kolonie (verschachtelt Kolonie), Behandlung und die Zeit. Klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen. Video 1: selbst die Pflege und Reinigung Antenne. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 2: Pilz Fellpflege. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 3: Allogrooming. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 4: Metapleural Drüse Fellpflege. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 5: Spore Jäten. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 6: Pilz Jäten. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 7: fäkale Fluid Pflege. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen. Video 8: Tröpfchen Regurgitation. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. Mit der rechten Maustaste herunterladen.

Discussion

Das primäre Ziel dieser Studie war es, zu beobachten und aufzeichnen charakteristischen Blatt-schneiden Ameise defensiv Verhalten in Anwesenheit von Pilz-Garten-Infektion mit Escovopsis, Erstellen von Referenz-Clips für verwenden durch die breitere Wissenschaftsgemeinschaft. Es sei darauf hingewiesen, dass diese Verhaltensweisen nicht ausschließen, Verteidigung der Kolonien von Escovopsis, sondern kann auch eine Rolle in der Verteidigung gegen andere Verunreinigungen und Infektionen⁶^,⁷^,⁸^,⁹ ^,¹⁰^,¹¹^,¹², und bei der Verteidigung der Ameisen sich⁴². Unser Protokoll bietet eine Kulisse für breitere Forschung auf Verteidigung in Pilz-wachsende Ameisen. Dies ist besonders nützlich sein: (i) für junge Forscher, die nicht vertraut mit diesen Verhaltensweisen; (Ii) zur Sicherung einheitlicher Definitionen für und Beobachtungen der Verhaltensweisen; (Iii) die Vergleiche über Studien und Ameisenarten zu erleichtern; (iv) weil eine Reihe von diesen Verhaltensweisen so selten, die selbst erfahrene auftreten kann können Forscher nie sie beobachtet haben; (iv) weil verstehen und erkennen Verhaltensweisen unter kontrollierten Bedingungen im Labor Hilfe studiert in Situ wo Bedingungen schwerer sind zu kontrollieren.

Die Ergebnisse unseres Verhaltens Studie stehen im Einklang mit früheren Arbeiten, die zeigten, dass geringfügige Arbeitnehmer Pilz Bräutigam – entscheidend, wenn eine Infektion frühzeitig erkannt – mehr als große Arbeiter²⁵^,²⁸^,³². Hier stieg wichtige Arbeitskräfte die Zahl der Pilz Pflege nach Escovopsis Infektion (Abbildung 2eine). Dies deutet darauf hin, dass geringfügige Arbeitskräfte sind der vorherrschende Pilz-Piste, sondern, dass wichtige Mitarbeiter behilflich sein können bei der Verhinderung der Ausbreitung von mehr Infektionen. Die größeren großen Arbeiter können Sporen schneller, entfernen, während minorarbeiterinnen eher für weniger zugänglichen Sporen entfernen könnte. Wir fanden auch, dass Arbeitnehmer erfolgreich Sporen in rund der Hälfte der infizierten Sub Kolonien (vier von neun), entfernt Wenn sie, zum Zeitpunkt der Infektion eingeführt wurden, und somit konnte der Erreger frühen (Abb. 3c) erkennen. Insgesamt, diese Punkte zu einer Reihe von Verhaltensreaktionen, wo die Ameisen zunächst versuchen, Escovopsis Infektion vorbei Sporen zu entfernen (und so vor eine Infektion breitet sich), anstatt Teile des Gartens Pilz zu entfernen (Abbildung 3a, b. ). Dies ändert sich im Laufe der Zeit, wenn die Infektion fortschreitet wenn Ameisen sind eher Teile der Pilz Garten²⁸entfernen. Obwohl unsere Stichprobengrößen zu klein waren, um schlüssig sein, und wir können nicht ausschließen, dass gleichzeitige Infektionen Jäten Verhalten induziert, unterstützt unsere Daten diesen Trend mit Pilz Jäten überwiegend anwesend in einem späteren Stadium der Infektion (Abbildung 3 ein). In der Regel geringen Pilz Jäten könnte darauf hindeuten, dass die Ameisen sonstige Abwehr (z.B.Chemikalien) verwendet, um weitere Wachstum von Escovopsishemmen oder, dass keiner unserer experimentellen Sub Kolonien zu stark infiziert wurden (machen die zerstörerischer Verteidigung unnötige).

Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass selbst pflegen mit fäkalen Flüssigkeit ist charakteristisch für Ameisen, die den Pilz Garten betreten, und als eine prophylaktische Maßnahme, anstatt mit einer Infektion verbunden. Ähnliche Beobachtungen in Gründerin Weibchen, die sich pflegen und übertragen fäkale Tröpfchen mit ihren Mund auf ihre Beine, betritt das Nest gesehen worden oder bei der Handhabung der Ernte-²⁷. Eine Infektion sollte in der Theorie die Tätigkeit der Arbeitnehmer am Rande der Pilz Garten erhöhen, wenn das entfernte infizierte Material wird durchgeführt und fiel in den Abfall Stapel. Fäkale Fluid Pflege kann daher während der Infektion, Krankheit zu minimieren auch indirekt erhöhen. Wir erwarten das entgegengesetzte Muster für schwere Infektionen mit reduzierte Bewegung am Rande des Gartens Pilz, wie Arbeitnehmer entweder den Pilz aufgeben oder mehr extreme wie z. B. chemische Verteidigung Maßnahmen.

Während fäkale Flüssigkeiten als eine wichtige prophylaktische chemische für eine Einzelperson dienen könnte, ist Allogrooming von nestmitglieder auf andere Arbeitnehmer verwendet, wenn sie fremde Partikel oder Mikroben zu erkennen. Der wesentliche Unterschied beobachtet wir zwischen der Häufigkeit (Tabelle 1) der fäkalen Fluid Pflege (n = 304) und der Allogrooming (n = 48) kann einen Unterschied in der Erregernachweis hinweisen. Ameisen sind nicht leicht Krankheitserreger auf sich selbst mit ihren Antennen erkennen; Allogrooming erfolgt auf der anderen Seite durch nestmitglieder, wer kann den gesamten Körper einer Ameise zu inspizieren und nur wählen, wenn nötig zu pflegen. Da Escovopsis ein Parasit der Pilz Garten anstatt der Ameisen ist, könnte dies auch die geringe Menge an Allogrooming erklären.

Wir beobachteten selten Metapleural Drüse, Pflege, und erst in einem späteren Stadium der Infektion. Arten von Pilz-wachsende Ameisen mit reichlich Pseudonocardia bakterielle Abdeckung pflegen die Metapleural Drüsen weniger als²⁵^,⁴⁷Arten mit weniger oder keine zu decken. A. Echinatior eine Fülle von der Symbiont⁴⁷hat, kann dies die niedrigen Drüse Pflege Frequenz erläutern. Die Metapleural Drüse Sekretion ist auch teuer,³⁰zu produzieren und kann innerhalb der Infrabuccal Tasche für längere Zeit, was bedeutet, dass die Notwendigkeit für die Pflege der Metapleural Drüse selten sein kann gespeichert werden. Während Metapleural Drüse, die Pflege die Ameisen gleichzeitig wechseln Sie die Beine und lecken das Bein, das nur die Drüse präpariert hatte; die Sporen sind dabei übertragen die Infrabuccal Tasche, wo Drüse Absonderungen sind entscheidend für die Hemmung der Escovopsis“Potenzial für anschließende Keimung²⁵. Minorarbeiterinnen sind häufiger im Nest und haben größere Metapleural Drüsen pro Einheit Körper Masse³⁰, was darauf hindeutet, dass sie für die Mehrheit der Metapleural Drüse Absonderungen verantwortlich sind. Dies könnte auch erklären, warum in unserer Studie die höchste Frequenz von Pilz grooming minorarbeiterinnen gehörte.

Wir erwarten, dass Behavior(s) zeigt aktive Verwendung von Antibiotika aus der bakteriellen Symbionten Pseudonocardia, häufig auf die Nagelhaut Acromyrmex Arbeiter beobachtet und bekannt, um eine Rolle in der Verteidigung gegen Escovopsis beobachten ³⁶ ^, ³⁹ ^, ⁴⁰. die wahrscheinlichste Erklärung für ein solches Verhalten nicht zu beobachten ist, dass andere Verhaltensweisen, die Anwendung dieser Antibiotika berücksichtigt werden kann, wie z. B. selbst pflegen durch Pilz Pflege und/oder Jäten, macht es schwer, als beobachten kann eine unterschiedliche Verhalten.

Wir beobachteten das ungewöhnliche Verhalten der erbrechend Flüssigkeitströpfchen auf den Pilz-Garten. Regurgitation von Nahrung für Nestmates wurde zuvor in Blatt-schneiden Ameisen²²beschrieben. In unserem Experiment Unterschied sich Tröpfchen in der Farbe von transparent bis dunkelbraun, schlägt sie eine Nahrungsquelle für andere Ameisen werden und/oder Wasser versorgen können. Wir beobachten nur zwei Gelegenheiten, wo andere Ameisen aus den Tröpfchen, trank, so dass wir feststellen kann, ob die Tropfen andere Ameisen profitieren oder dazu dienen, den Pilz zu rehydrieren, wenn die Luftfeuchtigkeit niedrig ist. Die meisten Beobachtungen dieses Verhaltens waren bei Escovopsis Infektionen, die eine defensive Rolle, z. B. immun Grundierung von Regurgitation von antimikrobiellen Peptiden¹⁶^,⁴⁸mit sich bringen könnte. Wir können nicht auf diese Schlussfolgerungen da dieses Verhalten selten war, aber es eine interessante Linie weiter, zum Beispiel wäre durch die Bestimmung zu untersuchen, ob Tröpfchen antimikrobielle Eigenschaften haben.

Angesichts dieser Beobachtungsstudien der komplexen defensive Verhaltensweisen von Blatt Scherblock Ameise, einschließlich jeder Vergleich mit und ohne Garten Pilzinfektion, wäre äußerst schwierig, im Feld, experimentelle Daten können wertvolle Einblicke in Diese Verhaltensweisen unter mehr kontrollierten Bedingungen. Während die Verhaltensweisen finden Sie unter natürlichen Bedingungen die Bemerkungen unter Laborbedingungen abweichen könnte, Tools wie unser Katalog der wichtigsten defensive Verhaltensweisen müssen entwickelt werden, um beide zu verbessern experimentelle und Bereich Studien in der Zukunft. Der versuchsansatz kann jedoch teilweise erklären, warum einige Verhaltensweisen waren extrem selten (z. B. Allogrooming, Metapleural Drüse Pflege) in unserer Demonstration dieser Verhaltensstörungen Definitionen zu verwenden. Zukünftige Studien sollten daher die Grenzen dieser Versuchsaufbau Wege natürlicher Beobachtungen finden. Zusätzliche Faktoren könnten auch in das aktuelle Protokoll, beispielsweise die Unterscheidung zwischen Actinobacteria tragen (jüngere) Arbeitnehmer und ältere Arbeitnehmer mit weniger reichlich vorhanden, die auf die Bedrohung durch eine Escovopsis anders reagieren können integriert werden Infektion. Gibt es Trade-Offs zwischen Beobachtungen genauer (z. B. durch scoring fokale Individuen), oder mit größeren Sub Volksstärke (größere Anzahl der Arbeitnehmer) und der Höhe der Zeit oder Anzahl von Sub-Kolonien oder Einzelpersonen, die gefilmt werden kann einen bestimmten Punkt in der Zeit. Dennoch, während das Set-up für größere Verhaltensstudien mit einem Fokus auf die Bewältigung eines Verhaltens Ziel ausgeweitet werden könnte, in diesem Fall konzentrierten wir uns auf erfolgreich präsentiert eine Methode zur Erfassung und spezifische defensive Verhaltensweisen definieren.

Wir dokumentiert Verhaltensweisen, die zur Verteidigung in Blatt-schneiden Ameisen beitragen und mehr deutlich, haben systematisch identifiziert, beschrieben und defensive Verhaltensweisen auf Film gefangengenommen. Unsere repräsentative Ergebnisse verstärken weitere Forschung in diesem Bereich, was darauf hindeutet, warum ist es schwer für einen Krankheitserreger, Pilz-Landwirtschaft Ameisenkolonien, erfolgreich zu infizieren, wenn mit Blick auf eine umfangreiche von defensive Verhaltensweisen Reihe und die damit Anwendung der antimikrobiellen verbundenen Verbindungen. Unser Hauptziel war es, ein neues Tool für die künftige Arbeit in diesem Bereich zur Verfügung zu stellen, und wir hoffen, dass die Verhaltensstörungen Katalog wertvolle für die Sicherung von Konsens und schlanken Definitionen, Beobachtungen und Interpretationen von Verhaltensweisen, die als eine wichtige Ressource dienen wird für die zukünftige Forschung.

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir möchten Linie Vej Ugelvig und Kirsten Sheehy für nützliche Gespräche über Mechanismen der Antenne Reiniger Pflege und Dreharbeiten Aufbau bedanken. Michael Poulsen stützt sich auf eine Villum Kann Rasmussen Young Investigator Fellowship (VKR10101) und Tabitha Innocent durch ein Marie-Curie-einzelne europäische Fellowship (IEF gewähren 627949). Wir möchten auch Danke das Smithsonian Tropical Research Institute für die Nutzung der Einrichtungen und logistische Unterstützung in Panama und der Autoridad Nacional del Ambiente um Erlaubnis zu sammeln und exportieren Sie Ameisen in Dänemark.

Materials

Plastic boxes	N/A	N/A	Transparent. Length: 3.15 in (8 cm), width: 2.17 in (5.5 cm), depth: 1.77 in (4.5 cm)
Petri dishes	Sarstedt	82.1472	3.62×0.63 in (9.2×1.6 cm)
Inoculation loops	Labsolute	7696431	Disposable 1uL. Length: 7.67 in (19.5 cm)
Cameras	DBPower	NTC50HD_8.5mm	USB Endoscope Camera
Holders for the cameras	N/A	N/A	Old beaker clamp stand.
Laptop	HP	N/A	Generic laptop for saving recordings.
Program used on the laptop	Windows Movie maker	N/A
Forceps	Vermandel	50.054	Soft
Potato dextrose broth	Sigma-Aldrich	P6685-1KG	24 g/L

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Citer Cet Article

Nilsson-Møller, S., Poulsen, M., Innocent, T. M. A Visual Guide for Studying Behavioral Defenses to Pathogen Attacks in Leaf-Cutting Ants. J. Vis. Exp. (140), e58420, doi:10.3791/58420 (2018).