低血清条件下心脏祖细胞内皮分化的诱导作用

最近的研究支持在成年哺乳动物心脏^1,2,3 和 cpc 中存在的常驻心脏祖细胞 (cpc) 可以成为心脏损伤⁴后细胞治疗的有用来源^.5. 此外, 扩大的 cpc 可为药物筛查和调查疾病机制提供一个富有成效的模式, 如果与罕见的心肌病患者或各自的疾病模型^6,7分离。

从成人心脏中分离出的 cpc 具有干细胞细胞^{1、2、3、8, 因为}它们是多能、克隆性的, 具有自我更新的能力。然而, 有许多不同的 (子) cpc 群表现出不同的表面标记特征, 例如, 包括 c-kit、sca-1 等, 或通过不同的隔离技术检索 (表 1)。已经制定了若干文化和差异化^{协议 1,2,8, 9,}10^,11,^{12, 13,14,15,16,17,18}。这些协议在生长因子和血清含量方面的差异主要不同, 这些因素根据培养的目的进行调整, 并可能导致结果和结果的差异, 包括分化效率。

基于标记的隔离技术:

cpc 可以根据特定的表面标记表达式^{1、2、8、9}、^10、11^{、12 、13进行隔离,14,15,16,17,18}。先前的研究表明, c-kit 和 sca-1 可能是分离居民^{cpc 1,11,14,19,20}的最佳标记。因为这些标记都不是 cpc 的特定标记, 所以通常会应用不同标记的组合。例如, cpc^表达的 c-kit 21 含量较低, 而 c-kit 也被其他细胞类型表达, 包括肥大细胞²²、内皮细胞²³和造血干细胞/祖细胞²⁴。另一个问题是, 并非所有标记都在所有物种中表达。sca-1 的情况就是如此, 它在老鼠身上表达, 但在人类²⁵中不表达。因此, 在临床试验和使用人体样本的研究中, 使用独立于隔离标记的协议可能是有利的。

与标记无关的隔离技术:

cpc 隔离有几种主要技术, 它们主要独立于曲面标记表达式, 但可以根据需要通过连续选择特定标记正亚分来细化 (另见表 1)。(1) 侧群 (sp) 技术最初的特征是原始的造血干细胞群体, 其基础是通过 atp 结合盒 (abc) 载体27排出 dna 染料 hoechst 33342^{26 的}能力.心脏 sp 细胞已被不同的组分离, 并报告表达了各种标记与一些小差异的报告^2,8,^{13, 14}。(2) 成集细胞成纤维细胞 (cfu-f) 最初是根据间充质间质细胞 (msc) 样表型定义的。分离的骨髓间充质干细胞在菜肴上培养, 以诱导菌落的形成。这种形成细胞分裂的 msc 样 cfu-f 可以从成人心脏中分离, 并能够分化为心脏谱系¹⁵。(3) 心细胞衍生细胞 (cdc) 是由组织活检或外植体 28^{、29、30、31}产生的细胞簇衍生的单个细胞。最近发现, cd105⁺/cd90/ct-kit^–细胞部分表现出心肌和再生电位³².

在这里, 我们使用从小鼠身上分离出的 sp-cpc, 根据之前对大鼠 cpc 和小鼠 sp-cpc³³的研究, 提供了一种有效诱导内皮谱系的协议。该协议在细胞密度、培养基血清含量和底物方面对培养和扩张技术进行了具体调整。它不仅适用于小鼠 sp-cpc, 也适用于不同类型的 cpc, 目的是诱导命运从放大到内皮承诺的 cpc, 无论是为了移植这些细胞还是用于机械体外研究。