Medición de patrones de aparición de insectos requiere precisión. Los sistemas existentes son sólo semiautomático y muestra el tamaño es limitado. Abordamos estas cuestiones mediante el diseño de un sistema con microcontroladores para medir con precisión el momento de la aparición de un gran número de insectos emergentes.
Sistemas existentes para medir patrones de aparición de insectos tienen limitaciones; sólo parcialmente están automatizadas y se limita el número máximo de insectos emergentes puede detectar. Para obtener la medición precisa de la aparición de insectos, es necesario para los sistemas semiautomatizados y capaz de medir grandes cantidades de insectos emergentes. Hemos tratado estos temas de diseño y construcción de un sistema que es automatizado y puede medir la aparición de hasta 1200 insectos. Modificamos el sistema existente de “caer-ball” con microcontroladores Arduino para automatizar la recogida de datos y ampliar el tamaño de la muestra a través de múltiples canales de datos. Múltiples canales de datos que el usuario no sólo aumentar su tamaño de la muestra, pero también permite múltiples tratamientos para ejecutarse simultáneamente en un solo experimento. Además, hemos creado un script de R para visualizar automáticamente los datos como un diagrama de burbuja, mientras también calcular el medio día y hora de aparición. El sistema actual fue diseñado utilizando impresión 3D para que el usuario puede modificar el sistema para ajustarse a diferentes especies de insectos. El objetivo de este protocolo es investigar asuntos importantes en la fisiología de la cronobiología y estrés, utilizando este sistema preciso y automatizado para medir patrones de aparición de insectos.
Mide precisamente el momento de aparición de insectos terrestre en entornos experimentales es muy difícil y requiere cierto grado de automatización. Varios mecanismos han sido diseñados en el pasado, incorporando ya sea un principio de “caer-ball”, con bolas que caen y sensores o una “explosión caja” utilizando un sistema de embudo tipo1,2,3. Existen dos limitaciones con los diseños existentes: 1) recopilación está sólo parcialmente automatizado y 2) tamaño de la muestra o el número de insectos emergentes que puede detectarse es limitado. Estos problemas disminuyen la precisión de la recogida de datos, que es importante para estudiar el tiempo de eclosión y la aparición de patrones. Abordamos estos problemas mediante el diseño de un sistema que es automatizado y no limitado por el tamaño de la muestra, permitiendo al usuario visualizar mejor los ritmos de aparición en respuesta a señales ambientales.
Nuestro sistema es una mejora para el principio de caída de bola, la versión más reciente de los cuales utiliza sensores infrarrojos para detectar la aparición de insectos en incrementos de seis minutos2. Nuestro sistema todavía utiliza sensores infrarrojos, sino que también incorpora un microcontrolador Arduino para registrar la fecha y hora de cada evento de aparición al segundo más cercano. Datos se almacenan automáticamente a una tarjeta secure digital de (SD), que se puede exportar como un archivo delimitado por comas para su análisis. El análisis está automatizado mediante el uso de un script personalizado de R, que ver los datos como un diagrama de burbuja e identificar la mediana y el día de aparición.
Múltiples canales permiten al usuario más flexibilidad en la adquisición de datos. Por ejemplo, nuestro diseño de canal múltiple no sólo minimiza el impacto de un sensor de “tapado”, sino que también puede ser utilizado para aumentar el tamaño de la muestra. Además, varios canales permiten al usuario designar tratamientos para canales específicos para que pueden ejecutar simultáneamente en un experimento. El uso de los seis canales permite para que aproximadamente 1200 abejas emergentes ser grabado en un solo experimento. A nuestro conocimiento, éste es el tamaño de muestra más grande de cualquier sistema actual de medición de aparición de insectos y nos ha permitido observar patrones de aparición de la escala mas fina en respuesta a señales ambientales. Por último, nuestro sistema beneficia el hecho de que la mayoría de las piezas 3D impreso. Esto crea precisamente tamaño componentes, que reduce la probabilidad de errores que se producen (como obstrucción de detector) durante las operaciones. También permite la personalización para otros sistemas de investigación.
El objetivo de este protocolo es personalizado construir un sistema preciso y automatizado para medir la aparición de insectos, para investigar preguntas en fisiología Cronobiología y estrés. Este sistema ha sido y seguirá siendo, esencial en la investigación de incógnitas relacionadas con patrones de aparición de insectos en respuesta a señales ambientales. Aquí describimos su montaje y uso para la detección de la aparición de la abeja cortadoras de alfalfa, Megachile rotundata en configuración experimental basado en el laboratorio. El sistema es automatizado usando un microcontrolador programable y personalizable utilizando 3D piezas impresas. Estantes de impresos mantienen en lugar de tubos que contienen células de nido de abeja después de un BB de metal. Sobre la aparición, el BB de metal es liberado de la rejilla, pasando a través de un sensor de infrarrojos la fecha y hora de aparición en una tarjeta SD de grabación. El diseño actual está optimizado para M. rotundata, pero con ajustes menores podría ser adaptado para otras especies de insectos.
Presentamos un protocolo para el montaje y el uso de un sistema que permite la medición precisa de la fecha de aparición de insectos. Este sistema soluciona dos problemas, que los diseños anteriores: tamaño de muestra limitado y automatización parcial. Solucionamos estos problemas mediante la automatización de la recolección de datos utilizando microcontroladores, que también nos permitieron aumentar el tamaño de la muestra mediante el uso de múltiples canales. El diseño actual tiene seis canales que pueden almacenar un total de 1200 abejas. Canales adicionales se pueden agregar o restar si es necesario, lo que permite no sólo para tamaño de muestra mayor, pero también para investigar simultáneamente los efectos de múltiples tratamientos. Pasos críticos, modificaciones, limitaciones y futuras aplicaciones se discuten a continuación.
La única parte del sistema que es automatizado no es carga de las rejillas con celdas de cría, metal BBs y pelotillas de airsoft en el inicio del experimento. Aunque los estantes están diseñados para que lean atrás ligeramente para evitar que BBs metal caigan cuando las parrillas son la atención vertical, de pie se debe al colocar las rejillas para evitar la liberación accidental de municiones metálicas. También, asegúrese de que las estanterías están al ras con el borde de la plataforma, la trayectoria descendente de la BB de metal alineado con la pista. Finalmente, restos de hojas deben limpiarse de la pista y el tren de aterrizaje con las bolas de metal de experimentos anteriores debe eliminarse para evitar el bloqueo del sensor. Automáticamente los datos se graban en una tarjeta SD como un archivo CSV, y el guión está escrito para que el Arduino no funcionará a menos que una tarjeta SD está presente. El archivo de datos se importa manualmente en RStudio y visualizado utilizando el mencionado script de R. Esta secuencia de comandos automáticamente gráfico los datos como un diagrama de burbuja e identificar la mediana y el día de aparición. El guión de Arduino está escrito para anexar datos del evento al final del archivo, que evita la pérdida de datos en caso de apagón. Sin embargo, esto también significa que una vez que se extrajeron los datos de la tarjeta SD, todos los archivos deben eliminarse antes del siguiente experimento.
Hay modificaciones a los archivos de SketchUp para ajustar el tamaño de las rejillas para los insectos de diversos tamaños, con diferentes tubos tamaño se utilizan en las parrillas modificadas. Además, el tamaño de la pelotilla de airsoft es importante porque impide que el insecto dejando el tubo, y pellets de diferentes tamaños pueden ser necesario también. Una amplia variedad de alteraciones es posible con la escritura de R para cambiar el aspecto de los diagramas de burbuja y otros parámetros gráficos.
Redujo el riesgo de falsos positivos por escrito un código debounce que deshabilita cualquier canal dado durante un segundo después de que un metal que es del BB detecta evitando un solo BB de metal de ser contado como múltiples puntos de datos. Aunque, esto crea la posibilidad de un punto de datos se perdió si muchas abejas surgen a la vez, pero el hecho de que los canales son independientes reduce este riesgo. Otra limitación del sistema actual es que los puntos de datos individuales no son discernibles, es decir, un metal cayendo BB no puede rastrearse a un individuo específico. Además, el actual sistema de medidas de emergencia pero no eclosión ritmos en M. rotundata, pero medir ritmos de eclosión en especies donde la aparición y eclosión son sinónimos. Por último, el diseño actual no es resistente al agua, limitando su uso a entornos controlados.
Aplicaciones futuras incluyen examinar los efectos de otras señales ambientales abióticos y bióticos para la aparición de la sincronización de M. rotundata. Además, porque los insectos ocupan ambientes diversos, señales ambientales relevantes varían entre especies. Así, la incorporación de especies de insectos más es importante investigar cómo los sistemas evolucionados a través de taxa. Poco se sabe sobre cómo desarrollo condiciones afectan el tiempo de emergencia de adultos; por lo tanto, nuestro sistema puede utilizarse para descifrar los efectos de tratamientos de emergencia. Además, combinaciones de señales ambientales pueden afectar las respuestas de insectos, así los experimentos futuros deben incorporar múltiples señales ambientales para entender sus efectos relativos sobre la aparición. Por último, el despliegue en el campo para observar cómo median en entornos naturales ritmos de aparición es de interés. La facilidad de uso de este sistema y su combinación única de fabricación aditiva, la programación de código abierto y rasgos biológicos observables, lo convierten en un candidato para el uso en un ajuste educativo.
The authors have nothing to disclose.
Nos gustaría reconocer el grupo de trabajo del insecto Criobiología y Ecofisiología en Fargo, ND por sus comentarios útiles en experimentos usando el sistema descrito.
PLA printer filament | www.lulzbot.com | various | Catalog number varies by color |
0.5 mL microcentrifuge tubes | www.daigger.com | EF4254C | |
4.5 mm size "bb" metal pellets | www.amazon.com | B00419C1IA | Daisy 4.5 mm metal size bb pellets |
6.0 mm plastic "softair" pellets | www.amazon.com | B003QNELYE | Crosman 6 mm airsoft pellets |
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