살 모 넬 라 종 /Shigella 종 설사에 기인 하는 일반적인 병원 체. 여기, 우리는 살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼을설명/Shigella 종 실시간 PCR를 사용 하 여 결합 가이드 문화.
급성 위장염의 지저분한 구두 전송 시간, 특히 때 감염 발생 합니다 음식과 물을 처리 하는 사람들은 살 모 넬 라 종/Shigella 종에 의해 살 모 넬 라 종/Shigella 종의 검출을 위한 표준 방법은 직접 문화 이지만 노동 집약 및 시간이 걸리는. 여기, 우리가 살 모 넬 라 종/Shigella 종 검사, 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR) 가이드 문화를 함께 사용 하 여에 대 한 높은 처리 플랫폼을 설명 합니다. 두 가지 주요 단계가 있습니다: 실시간 PCR와 인도 문화. 우리 방법의 각 단계를 설명 하는 첫 번째 단계 (실시간 PCR)에 대 한: 컬렉션, 사전 농축, DNA 추출 및 실시간 PCR. 실시간 PCR 결과 긍정적인 경우 (가이드 문화) 2 단계 수행 됩니다: 선택적 문화, 생 화 확 적인 식별 및 serological 특성화. 우리는 또한 그것에서 생성 하는 대표적인 결과를 보여 줍니다. 여기에 설명 된 프로토콜의 살 모 넬 라 종, 특정, 민감한 빠르고 높은 처리량 검열을 위한 가치 있는 플랫폼 될 것 이라고 /Shigella 종
설사 아직도 높은 발생률과 일반적인 건강 문제는 세계적으로1,2율입니다. 일부 환자 (예: 느슨한과 물 변, 화장실에가 서 긴급), 주에 대 한 다양 한 증상을 보여 사망률은 상대적으로 낮은 사회 경제적 영향 매우 높은3,4하 게 하는. 더 심각 하 게, 일부 환자도 치료5경우 과민성 대 장 증후군을 개발할 수 있습니다. 박테리아, 바이러스 및 설사6을 일으킬 수 있는 기생충의 다양 한 종류가 있다입니다. 살 모 넬 라 종 /Shigella 종 급성 위장염7,,89,,1011의 전송에 대 한 가장 흔한 박테리아 중입니다. 따라서, 많은 군 법률이 나 규정 일반 살 모 넬 라 종 발행Shigella 종 음식과 물을 처리 하는 사람들 중 심사 /. 예를 들어 중국 정부 의무 살 모 넬 라 종에 대 한 법률을 발행 했다 /Shigella 종 심사는 일년에 한 번.
살 모 넬 라 종에 대 한 표준 방법 /Shigella 종 탐지는 박테리아 문화. 박테리아 문화 및 연속 생화학 식별 및 혈 청 학적인 특성을 통해 질병 발발 관리 및 항균 프로 파일링 응급 환자 치료를 촉진 수 있는 박테리아의 종류를 확인할 수 있습니다. 12. 그것은 또한 살 모 넬 라 종 중 감염의 소스를 추적 도움이 수 /Shigella 종 발발13. 그러나,이 방법은 노동 집약 (필요한 수동 작업) 고 시간이 (몇 일), 특히 많은 수의 샘플7의 테스트에 대 한입니다. 또한, 비-culturable (VBNC) 살 모 넬 라 종 하지만 가능한 /Shigella 종일부 대변 샘플에 있을 수 있습니다14. 이러한 단점에 비추어 많은 실험실 하려고 살 모 넬 라 종의 검출을 위한 새로운 기술을 개발 /Shigella 종15,16,,1718 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. 이러한 모든 방법을 사용 하는 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR)은 가장 일반적인 핵 산 증폭 검사 (NAAT). 이러한 NAAT 기반 방법의 한 가지 주요 한계는 죽은 박테리아, 심지어 세균 파편 포함 불완전 한 genomic DNA, 긍정적인 결과26, 질병의 정확한 진단에 크게 영향을 미칠 수 있는 게재 될 수 있습니다. 블랑코 외. 그 분자 분석 결과 매우 중요 한, 뿐만 아니라 가능한 살 모 넬 라 부분 게놈 뿐만 아니라 문화, 과거 감염 또는 오염26에서 죽거나 unviable 박테리아를 보여주었다. 따라서, 새로운 기술을 개발 한다.
여기, 우리는 결합 된 NAAT 메서드 및 경작을 기반으로 새로운 방법 설명. 그림 1에서 보듯이,이 새로운 방법 적용 실시간 PCR 처음 상영 하 고 긍정적인 샘플 박테리아 문화 및 식별에 대 한 전송 됩니다.
살 모 넬 라 종부터 /Shigella 종 종종 음식 중독 및 급성 위장염28,29 의 지저분한 구두 전송 관련 된 고 일상적인 방법은 노동 집약적인 또는 소모 7, 우리는 살 모 넬 라 종에 대 한 높은 처리 플랫폼을설명/Shigella 종 심사, 실시간 PCR를 사용 하 여 결합 가이드 문화.
이 플랫폼의 기능을 최대?…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 과학 및 기술 프로그램의 주 하이, 중국 (보조금 번호 20171009E030064), 과학 및 기술 프로그램의 광 동, 중국 (보조금 번호 2015A020211004)는 과학 및 기술 프로그램의 일반 관리에 의해 지원 되었다 질 감독, 검사 및 검역 (보조금 번호 2016IK302, 2017IK224) 중화 인민 공화국의의.
Tris | Sigma | 10708976001 | |
EDTA | Sigma | 798681 | |
NP40 | Sigma | 11332473001 | |
ddH2O | Takara | 9012 | |
PrimeSTAR HS (Premix) | Takara | R040Q | |
Nutrient Broth | LandBridge | CM106 | |
Nutrient agar | LandBridge | CM107 | |
Selenite Cystine medium | LandBridge | CM225 | |
XLD | LandBridge | CM219 | |
MAC | LandBridge | CM908 | |
Salmonella chromogenic agar | CHROMagar | SA130 | |
Salmonella diagnostic serum | Tianrun | SAL60 | |
Shigella diagnostic serum | Tianrun | SHI54 | |
anal swab (collecting tube plus) | Huachenyang | ||
slide | Mingsheng | 7102 | |
micro-loop | Weierkang | W511 | |
incubator | Jinghong | DNP-9082 | |
autoclave | AUL | SS-325 | |
dry bath | Jinghong | KB-20 | |
automated microbial identification system | bioMérieux | VITEK2 | other equivalent system could be used |
fluorescent real-time PCR machine | ThermoFisher | ABI7500 | other equivalent machine could be used |