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Abstract
Introduction
Protocol
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Acknowledgements
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Immunologie et infection

Transmissão sexual de tripanosomas americanas de machos e fêmeas para companheiros de ingênua

Published: January 27, 2019
doi:
10.3791/57985
, , , , ,
1Chagas Disease Multidisciplinary Research Laboratory, Faculty of Medicine,University of Brasilia, 2Instituto Evandro Chagas

Summary

O Trypanosoma cruzi agente da doença de Chagas produz duradouro infecções assintomáticas que se desenvolvem abruptamente em patologia clinicamente reconhecida. O protocolo de pesquisa a seguir descreve um curto prazo baseada na família epidemiológico estudo para desvendar a T. cruzi infecção transmitida sexualmente da mãe à progênie.

Abstract

Tripanossomíase americana é transmitida aos seres humanos por insetos triatomíneos através da ingestão de alimentos contaminados, por transfusão de sangue ou acidentalmente em hospitais e laboratórios de pesquisa. Além disso, a infecção Trypanosoma cruzi é transmitida congenitamente de uma mãe chagásica, a sua prole, mas contribuição do parceiro masculino de contaminação no útero é desconhecida. Os achados de ninhos e aglomerados de amastigotes e de trypomastigotes nas células do ovário theca, no goniablasts e no lúmen dos túbulos seminíferos sugerem que infecções de T. cruzi são transmitidas sexualmente. O protocolo de pesquisa neste documento apresenta os resultados de uma população de estudo família mostrando parasita DNA nuclear, as células mononucleares do sangue diploide e os gametas haploides de assuntos humanos. Assim, três amostras biológicas independentes coletadas um ano separados confirmaram que T. cruzi infecções sexualmente foram transmitidas à descendência. Curiosamente, o específico do anticorpo de T. cruzi foi ausente na maioria de descendência familiar que gerou tolerância imunológica para o antígeno do parasita. Tolerância imunológica foi demonstrada em frango refratário para T. cruzi após a primeira semana de crescimento embrionário e pintos nascidos de ovos flagellate-inoculados foram incapazes de produzir o anticorpo específico. Além disso, a instilação do sêmen humano ejacula intraperitonealmente ou na vagina de ratos ingênuos rendido amastigotes de T. cruzi no epidídimo, tubo seminífero, ducto deferente e tuba uterina, com ausência de inflamação reações nos órgãos imunes privilegiados de reprodução. A criação do T. cruzi-infectados de ratos masculinos e femininos com companheiros de ingênua resultaram na aquisição das infecções, que mais tarde foram transmitidas aos descendentes. Portanto, um programa robusto de educação, informação e comunicação que envolve a população e organizações sociais é considerado necessário para prevenir a doença de Chagas.

Introduction

O protozoário parasita Trypanosoma cruzi pertencentes à família t sofre trypomastigote e amastigotas estágios do ciclo de vida em hospedeiros mamíferos e existe como avaliação do inseto-vetor (Reduviid: Triatominae) intestino e em cultura axénica. Nas últimas décadas, vários estudos têm demonstrado a presença da doença de Chagas em países em quatro continentes consideradas alóctones bug livre1,2,3,4,5, 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13. o; a dispersão de tripanosomas americanas foi inicialmente atribuída aos imigrantes latino-americanos para o hemisfério norte, mas a possibilidade de que alguns são casos autóctones da doença de Chagas já não pode ser negada3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14. somente reconhecível endógena fonte de T. cruzi transmissão tenha sido atribuída a transferência da mãe chagásica do parasita para a prole em aproximadamente 10% das gestações15; contribuição do parceiro masculino para infecções no útero através de ejacula sêmen manteve-se não reconhecida.

Mais de um século atrás, os investigadores16,17 observadas intracelular de T. cruzi amastigotes nas células do ovário theca e no germe linha células dos testículos de casos agudos da doença de Chagas. Os ninhos e grupos de T. cruzi trypomastigotes e amastigotes em células theca do ovário, no goniablasts e no lúmen dos túbulos seminíferos (Figura 1) de casos de doença de Chagas agudos mortais desenvolvem imune privilégio nos órgãos de reprodução na ausência de inflamatório infiltra18,19. Nas últimas décadas, alguns estudos experimentais demonstraram ninhos das formas amastigotas redondo de T. cruzi no tubo seminífero, epidídimo e ducto deferente , bem como no útero, ovário e tubos células theca de ratos infectados agudamente 1,20,21,22. Além disso, no decurso de estudos familiares para documentar a transferência de DNA mitocondrial de pacientes de Chagas dos pais para seus descendentes, T. cruzi DNA nuclear (nDNA) verificou-se em humano haploide germe de células linha23, de protozoários e estágios de ciclo de vida do parasita foram observados a ejacula de chagásicos ratos24. Esses achados estão de acordo com relatórios sobre a tolerância imunológica alcançado pela progenitura de T. cruzi –infectados hosts na ausência de anticorpos específicos1,25,26. Além disso, relatórios epidemiológicos que sugeriram a propagação endêmica da doença de Chagas para outros continentes,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12,13 são suportados por estudos experimentais, mostrando que a doença de Chagas pode ser transmitida sexualmente1 . A presente investigação apresenta um protocolo de estudo epidemiológico de família e mostra que a infecção do T. cruzi se propaga por relações sexuais.

Protocol

O ser humano e as comissões de pesquisa Animal da faculdade de medicina da Universidade de Brasília aprovaram todos os procedimentos com seres humanos e animais de laboratório, respectivamente, em protocolos de pesquisa 2500.167567 e 10411/2011. O Comitê de ética do público Fundação Hospital Gaspar Vianna (protocolo n. º 054/2009 e 2009/11163 CONEP) aprovou os formulários de consentimento livre para o estudo de campo, com extensão para o Ministério da saúde Comissão Nacional de investigação humana (CONEP …

Representative Results

Esta pesquisa, conduzida de acordo com o protocolo, teve como objetivo detectar casos agudos da doença de Chagas por exames clínicos e parasitológicos. Amostras de sangue venoso foram submetidas a exame microscópico direto e cultura in vitro para o crescimento do parasita. Vinte e um casos agudos da doença de Chagas mostraram T. cruzi no sangue. O protocolo de pesquisa garantiu o isolamento do T. cruzi ECI1-ECI21 da doença de Chagas aguda, e o DNA amostras expostas…

Discussion

Aqui, vamos discutir um protocolo de investigação baseada na família que respondeu à pergunta de se a doença de Chagas humana decorre de doenças sexualmente transmissíveis intraspecies T. cruzi infecções. Estudos iniciais não poderiam fornecer evidências da transmissão sexual das infecções de T. cruzi , provavelmente porque os dados e informações disponíveis sobre a doença de Chagas foram obtidas separadamente o individual3,4<s…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Reconhecemos que as instalações de laboratório e os comentários críticos de Izabela Dourado, Carla Araujo e inteligente Gomes e a assistência técnica de Bruno Dalago e Rafael Andrade. Estamos em dívida para com a Fundação para o avanço da ciência (FAPDF), o Conselho de pesquisa nacional, Ministério da ciência e tecnologia (CNPq/MCT) e a Agência para a formação de recursos humanos, Ministério da educação (CAPES / ME), Brasil, para apoiar estas investigações.

Materials

BCIP and NBT redox system Sigma-Aldrich 681 451 001
Blood DNA Purification columns Amersham Biosciences 27-9603-01
d-ATP, [α-32P], 250 µCi.   Perkin Elmer   BLU012H
DNA, Solution Salt Fish Sperm AMRESCO 064-10G
dNTP Set, 100 mM Solutions GE Healthcare 28-4065-51
Eco RI Invitrogen 15202-021
Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated Southern Biotech        2040-04
Goat anti-human IgG- FITC conjugated Biocompare MB5198020
Hybond – N+ nylon membrane GE Healthcare RPN303B
Hybridization oven Thomas Scientific 95-0031-02
Micro imaging software cell Sens software Olympus, Japan
Molecular probes labeling System Invitrogen 700-0030
Nsi I Sigma-Aldrich R5584 1KU
Plasmid Prep Mini Spin Kit GE Healthcare 28-9042-70
Plate reader  Bio-Tek GmBH 2015
Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated Sigma-Aldrich A9171
Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated Sigma-Aldrich F8888
Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated Sigma Aldrich A2418 
Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated Biorad MCA5787
Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine Sigma-Aldrich G25DNA-RO 
Taq DNA Polymerase Recombinant Invitrogen 11615-010
Thermal cycler system Biorad, USA 1709703
Vector Systems Promega A1380
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Almeida, A. B., Araújo, P. F., Bernal, F. M., Rosa, A. d. C., Valente, S. A., Teixeira, A. R. Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates. J. Vis. Exp. (143), e57985, doi:10.3791/57985 (2019).
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