Fréquente la queue-extrémité prélèvements chez les souris pour l’évaluation de la sécrétion de l’Hormone lutéinisante Pulsatile

Fonction des gonades chez les mammifères est dépendante de la sécrétion de gonadotrophine, hormone lutéinisante (LH) et folliculostimulante hormone de l’hypophyse. Les gonadotrophines sont sécrétées en soit un modèle pulsatile ou surtension en réponse à la sécrétion hypothalamique de la gonadolibérine (GnRH). La synthèse et la sécrétion de LH et FSH sont réglementés par une action endocrine, paracrine et autocrine d’une variété de molécules dont GnRH hypothalamique, hormones stéroïdes gonadiques et le système de l’activine-inhibin-follistatine, mais aussi une myriade de conditions physiologiques, y compris l’équilibre énergétique et de stress. ²

Le modèle pulsatile de LH dans le sang provient plutôt brusque décharge de LH dans le sang périphérique, suivi par environ exponentielle élimination. Important du modèle comprennent la fréquence de chaque décharge de LH et l’amplitude de la réponse de la LH, qui sont dictées, en partie, par la libération de GnRH. Due à la difficulté dans la collecte de sang portal hypothalamo-hypophysaire pour la mesure de GnRH pulsatile, l’échantillonnage et la mesure de LH est utilisé comme un proxy pour règlement de GnRH de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique. Donc, information critique est codée de la fréquence et l’amplitude des impulsions de LH, ce qui ne peut être déterminée à partir d’un seul échantillon.

Analyse de la sécrétion pulsatile de LH a toujours été limitée aux grands mammifères (moutons, les primates et les humains) en raison de leur volume sanguin important et la tolérance pour le prélèvement d’échantillons sanguins fréquents. Chez les rongeurs, les prélèvements sanguins fréquents se limitait au rat et atteint via oreillette cathéter à demeure. ^{3 , 4} le coût relativement faible et la disponibilité des ressources génétiques (par exemple , le cre-lox, le CRISPR) et des manipulations des circuits neuronaux complexes (p. ex. optogenetics, chemogenetics) faire des souris un organisme modèle attrayant ; Cependant, réalisation d’échantillons sanguins fréquents et l’analyse ultérieure des concentrations de LH a jusqu’à récemment, prouvé insaisissables. Cette tâche monumentale a été mis au point par Steyn et ses collaborateurs. ¹ depuis lors, plusieurs laboratoires ont commencé à utiliser les prélèvements sanguins fréquents et ultra-sensible des dosages de LH pour évaluer la sécrétion pulsatile de LH dans une variété de paradigmes expérimentaux. ^{5 , 6 , 7 , 8 , 9} il convient de noter que la poursuite d’une méthode pratique de rassembler plusieurs échantillons de sang des souris a été en cours pendant au moins 40 ans¹⁰ avec plusieurs perfectionnements réalisés le long du chemin. ^{11 , 12}

Évaluation des modèles d’impulsions LH (c’est-à-dire la fréquence et l’amplitude) représente une amélioration majeure dans le suivi de la sécrétion de gonadotrophine basale dans ce modèle animal génétiquement tractable. Traditionnellement, les concentrations de LH chez la souris ont été déterminées dans un échantillon sanguin. Une faiblesse d’échantillons monopoint est un ensemble de données très variable, parce que les concentrations de LH sont naturellement fluctuant au cours de chaque impulsion. Une autre faiblesse est que les mesures isolées manquer intrinsèquement critique information véhiculée par les patrons de la sécrétion de LH impulsion. Ainsi, une méthode de collecte des échantillons de sang fréquents en comportement librement, souris sans retenue (à l’exception de la manipulation douce lors de l’échantillonnage) fournira informations améliorées et s’avérer utiles à de nombreux laboratoires enquêter sur règlement hormone pulsatile.

Nous décrivons ici un protocole pour la collecte de fréquents (toutes les 6 min) des échantillons provenant de souris éveillés, sans retenue de sang. Ce qui est important, nous incluons une manipulation protocole d’acclimatation qui permet pour détection robuste et continue des sécrétion pulsatile de LH dans les échantillons de sang entier recueillies pendant un laps de temps où, avant et après l’évaluation à une stimulation aiguë peut être déterminé, comme la réponse au stress psychosocial d’immobilisation et de retenue. Un test efficace pour les concentrations de LH provenant d’échantillons de sang entier a été décrit précédemment ; ¹ le présent protocole est axé sur une méthode pour rassembler les échantillons de sang pour une mesure du pouls LH.