Bygge inn Pericytes i en Endothelial celle perle spirende analysen

Angiogenese er avgjørende for riktig embryogenesis og sårheling, og det også spiller nøkkelroller i mange sykdommer, inkludert kreft progresjon¹ og coronary arterien sykdom. ^{2 , 3} har en bedre forståelse av hvordan angiogenese oppstår under normal utvikling, og hvordan den aktiveres i patologisk sammenhenger, er avgjørende for utviklingen av romanen, effektiv therapeutics. Trofaste i vitro modeller som recapitulate viktige faser og celletyper involvert i angiogenese i vivo er nødvendig for å tillate forskere å karakterisere molekylære mekanismer kjøring angiogenese og gjøre nye funn i endothelial regulering.

Nakatsu og Hughes har optimalisert en spirende perle analysen som de har vist gjennomgår de mange kjente stadiene av spirende angiogenese. ^{4 , 5} formålet med metoden som presenteres her er å bygge på analysen optimalisert ved Nakatsu og Hughes ved å innlemme perictyes i analysen, slik at freske celler i endothelial celle spirende paracrine og juxtracrine roller kan innlemmes i romanen angiogenese studier. Pericytes er veggmaleri celler som er definert av deres rolle som celler som har nær fysisk kontakt med endotelceller på grunn av deres bygges i vaskulær kjelleren membranen. ⁶ Pericytes og endotelceller delta i komplekse cross-talk via signalnettverk trasé inkludert hakk signalnettverk, Ang-Tie2, PDGFRβ, TGFRβ og mange andre. ^{7 , 8} musen modeller mangelfull i disse signalveier viser dårlig pericyte dekning av utvikle blodkar i embryogenesis, fører til dårlig vaskulær remodeling og dysfunksjonelle blodkar. ⁷ i tillegg rollen pericytes i patologisk angiogenese er viktig men ofte under-verdsatt. For eksempel er en unik funksjon i svulst blodkar at fartøyene er umodne, lekk og dysfunksjonelle på grunn av dårlig pericyte dekning. ⁹ det har blitt foreslått at tilstedeværelse eller fravær av pericytes dramatisk påvirker fenotypen av svulst blodårer og er en viktig formidler av Svar å antiangiogenic og antitumor terapier. ⁹ derfor inkludert rollen pericytes i vitro analyser er nøkkelen til mer fullstendig fange viktig mekanismer for endothelial regulering.

Selv om det er mange i vitro og ex vivo analyser for tiden ansatt å studere angiogenese, finnes det mangler å vurdere i hver. Noen som endothelial spredning og endothelial migrasjon analyser, er altfor forenklet og fokusere på en endothelial funksjon i et isolert miljø på vev kultur plast. ¹⁰ andre analyser skje i en mer 3 dimensjonale (3D), som Matrigel rør formasjon analysen,¹⁰ men disse analyser er fortsatt unyansert og fokusere mer på evnen til endotelceller å overføre og danner de novo vaskulære strukturer, i motsetning til spirende fra eksisterende blodkar. Videre innlemme ingen av disse analyser veggmaleri celletyper. Det er ex vivo modeller som ring aorta analysen som innlemme pericytes i vert orgelet, men genetisk manipulering av disse modellene er mye mer utfordrende på grunn av nødvendigheten av knockout eller transgene musen modeller av den veier rundt. Perlen spirende analysen er ideelt fordi det modeller endothelial spirende, spredning, migrasjon og selv anastomose og lumen formasjon i en 3D matrise. ⁴ analysen trofast gir mekanistisk vurdering av de mange ulike stadiene av spirende, samtidig gir direkte genmodifisering av enten endotelceller eller pericytes i en mer kontrollert setting. Det fibrin clots som inneholder spirende perlene kan lett fast, beiset og fotografert på ulike stadier av spirende; disse spirer kan også plasseres i en live bildebehandling kammer å utføre sanntid avbilding av spirende. Metodene som presenteres her er ideelt for å studere grunnleggende mekanismer av angiogenese gjennom i dybden phenotyping og grundig analyse av veier aktivert under angiogenese.