Зика вирус (ZIKV) является flavivirus, передаваемых половым путем, либо комары Aedes aegypti и Aedes albopictus векторов комаров. ZIKV недавно была определена как угроза тяжелой общественного здравоохранения из-за его простота передачи и аффилированным неврологические симптомы¹. Один из самых относительно неврологические эффекты является развитие микроцефалия в зародышах родился беременных ВИЧ-инфицированных матерей^2,3. Микроцефалия является расстройство нервной, где меньше, чем типичный размер головы во время внутриутробного развития и при рождении, с окружностью, менее чем в 2 стандартных отклонения ниже среднего⁴. Меньше окружность головы обычно сопровождается целый ряд сопутствующих заболеваний, таких, как задержки в развитии, припадки, видение и потери слуха и кормление трудности.

Недавние исследования использовали Животные модели или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток для изучения эффекта ZIKV инфекции на развитие нервной системы^5,6,,78. Хотя эти исследования способствовали наши знания о ZIKV, использование различных видов или генетически модифицированные клетки может быть много времени и/или добавить дополнительные переменные, которые могут сбить с толку эффект ZIKV на развитие нервной клетки^{5, 6 , 7 , 8}. Однако, трудности с НСК культуры, особенно культуры не сторонник нейросферы, описанных в настоящем Протоколе, является, что культура является очень чувствительной к методам, используемым для проведения культуры⁹. Любые изменения в средних компонентов, или даже физической обработки культуры судна, достаточно, чтобы вызвать реакцию клетки⁹. Для решения этих вопросов, мы разработали в vitro плода мозг производные нервных стволовых клеток человека (hNSCs) культуры механистически допросить влияние ZIKV на фетальных нервных стволовых клеток. С помощью нашего метода, hNSCs были сохранены для более чем 80 пассажи без очевидной фенотипические изменения¹⁰. Кроме того, хромосомные изменения, такие как трисомия были либо none или минимальным¹¹. Эта культура НСК растет как non сторонник нейросферы культуры. Одним из преимуществ neurospheres является сферах создать уникальную нишу, экологической культуры, который более отражает в vivo ниш по сравнению с двумерной культур⁹. Еще одним преимуществом этого протокола является, что несколько типов клеток могут быть получены от НСК культуры, позволяя следователь наблюдать последствия данной переменной на НСК выживания и дифференциации. Этот протокол применяется для лиц, желающих ответить механистический вопросы, касающиеся развития центральной нервной системы или дисфункции. Следующий протокол описывает расширить культуру НСК заразить с ZIKV, и впоследствии дифференцировать hNSCs соблюдать воздействия инфекции на процесс дифференциации. Он также включает методы для хранения hNSCs для длительного использования и различать hNSCs в различные типы нейронов, которые позволяют дальнейшее расследование ZIKV-индуцированного дефицита, способствуя мозга мальформация¹¹. Мы считаем, что этот протокол также представляет интерес для исследователей, стремящихся понять влияние каких-либо экологических стимулов такие инфекции или токсинов на выживание нервных стволовых клеток и дифференциации.