Протокол представляется для синтеза ядро оболочка легированный лантаноиды upconversion нанокристаллов (универсальные) и их клеточных приложений для регулирования белок канала на ближней ИК-области спектра (NIR) света освещение.
Легированный лантаноиды upconversion нанокристаллов (универсальные) привлекли большое внимание в последние годы, на основе их перспективных и controllable оптическими свойствами, которые позволяют для поглощения в ближней ИК-области спектра (NIR) света и впоследствии может преобразовать его в мультиплексированных выбросов, которые охватывают более широкий спектр регионов от УФ до видимой в НДК. Эта статья представляет подробные экспериментальные процедуры для совместного осадки высокой температуры синтеза ядро оболочка универсальные, которые включают различные лантаноиды ионов в нанокристаллов для эффективного преобразования глубокие ткани проницаемые NIR возбуждения (808 Нм) в сильной синий выбросов на 480 Нм. Контролируя модификации поверхности с Биосовместимых полимеров (полиакриловой кислоты, ПАА), подготовлена как универсальные приобретает большой растворимость в буферных растворов. Гидрофильные нанокристаллов далее функционализированных с конкретными лигандами (dibenzyl cyclooctyne, DBCO) для локализации на клеточной мембраны. По НИР свет (808 нм) облучения, upconverted синий выбросов может эффективно активировать свет закрытый канал белка на мембране клеток и конкретно регулировать приток катионита (например, Ca2 +) в цитоплазме. Этот протокол предоставляет возможные методологии для синтеза ядро оболочка легированный лантаноиды универсальные и последующих биосовместимых модификации поверхности для дальнейшей сотовой приложений.
В последние годы легированный лантаноиды upconversion нанокристаллов (универсальные) широко используются как альтернатива обычных органических красителей и квантовые точки в биомедицинских приложений, которые основаны главным образом на их выдающиеся химические и оптические свойства, включая большой биосовместимость, высокая устойчивость к Фотообесцвечивание и выбросов узкой полосой пропускания1,2,3. Что еще более важно они могут служить перспективных nanotransducer с отличным ткани проникновения глубины в естественных условиях для преобразования NIR регионах через несколько фотонных и ближней ИК-области спектра (NIR) возбуждения в широкий спектр выбросов от УФ, видимой, upconversion процесс4,5. Эти уникальные свойства делают легированный лантаноиды универсальные служить вектором особенно многообещающим для зондирования биологических, биомедицинских изображений и заболеваний theranostics6,,78.
Общие компоненты универсальные основаны главным образом на легированных лантаноиды ионов в матрице изолирующие хост, содержащий сенсибилизатор (например, Yb3 +, Nd3 +) и активатор (например, Tm3 +, Er3 +, Хо 3 +) в рамках кристалл однородно9. Различные оптического излучения от нанокристаллов приписывается локализованные электронных перехода в пределах 4f орбитали лантаноиды активаторов вследствие их лестница как аранжированный энергетический уровень10. Таким образом важно, чтобы точно контролировать размер и морфология синтезированных универсальные с многокомпонентных лантаноиды активаторов. По праву некоторые перспективные методы хорошо созданы для подготовки легированный лантаноиды универсальные, включая термического разложения, Сопредседатель осадки высокой температуры, гидротермального синтеза, золь гель обработки, т. д.11 , 12 , 13 среди этих подходов, метод высокотемпературной Сопредседатель осадков является одним из наиболее популярным и удобным стратегий для синтеза универсальные, который строго контролироваться подготовить желаемого высокого качества нанокристаллов с единообразной формой и распределение по размерам в относительно короткое время реакции и лоу кост14. Однако большинство наноструктур синтезируется этот метод главным образом ограничен с гидрофобным лигандами как олеиновой кислоты и oleylamine, которые обычно препятствуют их дальнейшему bioapplication из-за ограниченной растворимости гидрофобные лиганд в водном растворе 15. Таким образом, это необходимо для выполнения подходящей поверхности природную подготовить биосовместимых универсальные в биологических приложений в пробирке и в естественных условиях.
Здесь мы представляем подробную экспериментальной процедуры для синтеза ядро оболочка универсальные наноструктур через метод совместного осадки высокой температуры и возможности модификации технику для functionalize Биосовместимых полимеров на поверхности универсальные для дальнейшее сотовой приложений. Это универсальные nanoplatform включает в себя три лантаноиды ионов (Yb3 +, Nd3 +и Tm3 +) в нанокристаллов приобретать сильное синий выбросов (~ 480 Нм) на свет возбуждения NIR 808 нм, который имеет большую глубину проникновения в живой ткани. Хорошо известно, что Nd3 +-легированный универсальные отображения свернутого водные эффекты поглощения и перегрева на этом спектральные окна (808 нм) по сравнению с обычными UCNs на 980 нм облучения16,17, 18. Кроме того, использовать универсальные в биологических системах, гидрофобные лигандами (олеиновая кислота) на поверхности универсальные, sonication в раствор кислоты19, во-первых, удаляются. Затем лиганд свободной Универсальные дальнейшие изменения с Биосовместимых полимеров (полиакриловой кислоты, ПАА) приобрести большой растворимость в водных растворах20. Кроме того, в качестве доказательства в концепция в клеточных приложений, универсальные гидрофильные далее функционализированных с молекулярной лигандами (dibenzyl cyclooctyne, DBCO) для конкретных локализации на N3-меткой клеточной мембраны. По НИР свет (808 нм) облучения, upconverted синий выбросов на 480 Нм можно эффективно активировать свет закрытого канала белок, channelrhodopsins-2 (ChR2), на поверхности клеток и таким образом облегчить приток катионита (например, Ca2 + ионный) через мембраны клеток живых.
Это видео протокол предусматривает возможные методологии легированный лантаноиды универсальные синтеза, биосовместимых модификации поверхности и универсальные bioapplication в живых клетках. Любые различия в методах синтеза и химические реактивы, используемые в Нанокристаллические роста будет влиять на размер распределения, морфология и upconversion Спектры люминесценции (UCL) окончательный универсальные наноструктур, используемая в экспериментах по ячейке. Этот подробный видео-протокол готов помочь новых исследователей в этой области для улучшения воспроизводимость универсальные с методом высокотемпературной Сопредседатель осадков и избежать наиболее распространенных ошибок в универсальные биосовместимых модификации поверхности для дальнейшей Сотовый приложений.
Эта статья представил метод синтеза ядро оболочка легированный лантаноиды upconversion нанокристаллов (универсальные) и их модификации поверхности с функциональной постановление для сотовых приложений. Этот роман Наноматериал обладает выдающиеся оптические свойства, выделяющие УФ и види…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была частично поддерживается НТУ-МТА-MUV ДН/16001, RG110/16 (S), (RG 11/13) и (RG 35/15) награжден в Nanyang технологический университет, Сингапур и национальные естественные науки фонд из Китая (NSFC) (№ 51628201).
1-Octadecene | Sigma Aldrich | O806 | Technical grade |
oleic acid | Sigma Aldrich | 364525 | Technical grade |
Methanol | Fisher Scientific | A412 | Technical grade |
Ethanol | Fisher Scientific | A405 | Technical grade |
Acetone | Fisher Scientific | A18 | Technical grade |
Hexane | Sigma Aldrich | H292 | Technical grade |
Thulium (III) acetate hydrate (Tm(CH3CO2)3) | Sigma Aldrich | 367702 | 99.9% trace metals basis |
Neodymium (III) acetate hydrate (Nd(CH3CO2)3) | Sigma Aldrich | 325805 | 99.9% trace metals basis |
Ytterbium (III) acetate hydrate (Yb(CH3CO2)3) | Sigma Aldrich | 326011 | 99.9% trace metals basis |
Yttrium(III) acetate hydrate (Y(CH3CO2)3) | Sigma Aldrich | 326046 | 99.9% trace metals basis |
Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma Aldrich | S5881 | reagent grade |
Ammonium fluoride (NH4F) | Sigma Aldrich | 338869 | ACS reagent |
Hydrogen chloride (HCl) | Fisher Scientific | A144 | reagent grade |
polyacrylic acid (PAA) | Sigma Aldrich | 323667 | average Mw 1800 |
1-Hydroxybenzotriazole hydrate (HOBT) | Sigma Aldrich | 54802 | ACS reagent |
1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDC) | Sigma Aldrich | E7750 | commercial grade |
Dibenzocyclooctyne-amine (DBCO-NH2) | Sigma Aldrich | 761540 | ACS reagent |
N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) | Sigma Aldrich | D125806 | ACS reagent |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Fisher Scientific | BP231 | Technical grade |
HEK293 cell line | ATCC | CRL-1573 | human embryonic kidney |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Sigma Aldrich | F1051 | ACS reagent |
Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15140122 | 10,000 U/mL |
plasmid (pCAGGS-ChR2-Venus) | Addgene | 15753 | Plasmid sent as bacteria in agar stab |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Thermo Fisher | 11965092 | High glucose |
opti-Modified Eagle Medium (MEM) | Thermo Fisher | 51985034 | Reduced Serum Media |
Lipofectamine 3000 Transfection Reagent | Thermo Fisher | L3000015 | Lipid-Based Transfection |
N-Azidoacetylmannosamine, Acetylated (Ac4ManNAz) | Sigma Aldrich | A7605 | ACS reagent |
Trypsin-EDTA (0.25%) | Thermo Fisher | 25200056 | Phenol red |
Rhod-3 AM Calcium Imaging Kit | Thermo Fisher | R10145 | Fluorescence dye |
5-carboxytetramethylrhodamine-azide (Rhod-N3) | Sigma Aldrich | 760757 | Azide-fluor 545 |
Confical dish | ibidi GmbH | 81158 | Glass Bottom, 35 mm |
50 ml conical centrifuge tubes | Greiner Bio-One | 227261 | Polypropylene |
15 ml conical centrifuge tubes | Greiner Bio-One | 188271 | Polypropylene |
1.5 ml conical microcentrifuge tubes | Greiner Bio-One | 616201 | Polypropylene |
Phenylmethyl silicone oil | Clearco Products | 63148-52-7 | Less than 320 degrees Celsius |
Glass thermometer | GH Zeal | L0111/10 | From -10 to 360 degrees Celsius |
12-well plate | Sigma Aldrich | Z707775 | Polystyrene |