Summary

Intratracheal 접종의 Fischer 344 쥐 Francisella tularensis

Published: September 30, 2017
doi:

Summary

이 프로토콜 설명으로 Fischer 344 쥐의 예방 접종 intratracheal Francisella tularensis. 이 이렇게 모방이 잠재적인 biothreat 에이전트에 인간의 폐 노출 백신과 폐 tularemia에 대 한 치료 효능을 테스트 하는 데 사용할 수 있습니다.

Abstract

폐 감염 박테리아 Francisella tularensis 심각 하 고 잠재적으로 치명적인 질병, tularemia, 인간에서 발생할 수 있습니다. 인 간에 대 한 승인된 tularemia 백신의 현재 부족, 연구는 적절 한 동물 모델을 활용 하 여 백신 개발에 집중 된다. Fischer 344 쥐 인간의 F. tularensis 감염 민감성을 반영 하 고 따라서 tularemia 백신 개발을 위한 매력적인 모델 하는 모델로 떠오르고 있다. F. tularensis 와 Fischer 344 쥐의 Intratracheal 접종 모방 인간에서 폐 노출 합니다. 쥐 기관지에 성공적인 배달 폐 배달을 위해 중요 하다. 조명으로 후 두 경 제대로 마 취 쥐;의 기관을 넣어야 하는 데 사용 됩니다. 기관 내에서 정확한 위치 호흡을 감지 하는 간단한 장치에 의해 결정 됩니다. 삽 관 법, 따라 F. tularensis 문화는 주사기를 통해 측정 된 복용량에 전달 됩니다. 이 기술은 표준화 백신 효능 평가 하 쥐 기관지 내 F. tularensis 의 폐 전달 합니다.

Introduction

F. tularensis (피트) 인간의 질병의 원인 tularemia. 박테리아는 폐 경로 통해 획득 하는 경우는 높은 사망률 및 사망1폐 렴 성 tularemia을이 끈다. F. tularensis aerosolized 형태와 관련 된 위험으로 인해 biothreat 에이전트 간주 됩니다 그리고 현재 미국에서 인간 사용을 위해 승인 없는 백신 집중 노력 백신 및 치료 대책이 세균성 biothreat의 불법 사용에 대 한 인간의 인구를 보호 하기 위해 폐 렴 성 tularemia 개발 진행 현재입니다.

Tularemia 연구의 많은 마우스 모델의 F. tularensis 감염, 생쥐의 극단적인 감도 및 시 약의 보급에 집중 했다. 그러나, 쥐가 모델2백신 효능을 입증의 어려움으로 인해 백신 개발에 대 한 어려운 모델을 입증 했다. 최근, Fischer 344 쥐 tularemia 백신 개발3모델로 개발 되었습니다. 다양 한 F. tularensis 종에 Fischer 344 쥐의 감도 인간의 감도4, 모방 및 쥐 보호 될 수 있다 F. tularensis 폐 문제에 대 한 예방 접종에 의해 보호 하기 위해 알려진 라이브 백신 긴장으로 인간5,,67. Fischer 344 쥐 인간의 F. tularensis 감염의 일부 기능 모델, 폐 F. tularensis 으로부터 보호 하는 백신의 개발에 대 한 매우 유용한 모델 수 있습니다 노출.

효과적인 백신 F. tularensis폐 노출에 대 한 인간을 보호 하기 위해 필요 합니다. 무기 F. tularensis 에서 대부분 폐 노출 aerosolized 박테리아 폐8에 흡입 될 것 이다. 그러나, F. tularensis 의 어로 졸 생성 위험 하 고 복잡 하며 전문된 장비 및 포함. 대체 경로 아마도 더 쥐에서 폐 노출의 여러 실험실에 대 한 적응력이 부족 한 전문된 장비는 intratracheal 접종6통해. 이 기술은 마 취 쥐의 기관지 내 카 테 터의 올바른 배치에 대 한 후 두 경을 사용합니다. 기도, 식도, 보다는 오히려 내의 배치는 폐에서 공기를 시각화 하는 간단한 장치에 의해 확인 됩니다. F. tularensis 는 이후 주사기, 카 테 터는 박테리아의 폐 전달 되도록에 공기의 도입 선행으로 관리 하 여 카 테 터를 통해 폐로 전달. Jemski5 이전 그 F. tularensis intranasal 노선을 통해 Fischer 344 쥐에 주사 수 없습니다 수 교양 폐에서 3 일 후 접종까지 보고, 쥐에서 그 intranasal 접종을 나타내는지 않습니다 하는 반면, 하지 직접 전달에서의 결과 폐에 박테리아.

F. tularensis (F. tularensis subsp. tularensis, F. tularensis subsp. holarctica) 형태의 선택 에이전트 Biosafety 수준 3 (BSL3) 견제 절차, videography 방지 하는 필요 합니다. 그러나, F. novicida (Fn) 선택 에이전트 상태 건강 한 인간, 그것의 avirulence 때문에 면제 이며 Biosafety 수준 2 (BSL2) 조건9,10에서 안전 하 게 이용 될 수 있다. 또한, Fn F. tularensis 폐 노출 intratracheal 접종11,,1213를 통해 전달 하는 경우에 대하여 보호할 수 있는 라이브 감쇠 백신에 대 한 기준 역할을 합니다. 여기에 제시 된 기술은 인간을 위한 모델 쥐를 이용 하 여 폐 경로 통해 발생 하는 감염의 연구에 대 한 수 있습니다. 이 기술은 특수에 어로 졸 생성 장비에 대 한 필요 없이 수행할 수 있습니다. Fn는 여기 촬영 기술을 위해 사용 되었다.

Protocol

이 작업 치료와 국립 보건원의 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에서 권장에 따라 수행 되었다. 설치류와 관련 된 동물 프로토콜 프로토콜 MU009(RA) 텍사스 대학 샌 안토니오 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 했다. 1. 카 테 터 준비, 기도 표시기와 F. tularensis Inoculum 준비 테 (20 G x 2에서) 잘라 바늘에 무딘 하 고 부드러운 바늘의 ?…

Representative Results

쥐에 F. tularensis 의 intratracheal 접종에 체액 반응 UV 활동 되지 않 ㄴ 박테리아에 대 한 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA)에 의해 결정 될 수 있다11위에서 설명한 대로. 사 전체 셀 박테리아 Fischer 344 쥐의 총 면역 글로불린 G (IgG) 응답은 Fn의 감쇠 긴장 평가 게시물-intratracheal 접종 (107 CFU inoculum) 14 일과 하루 28 (그림 1</stro…

Discussion

Fischer 344 쥐 tularemia 백신 개발3에 대 한 중요 한 모델이 되 고 있다. F. tularensis 폐 경로 통해 노출은 이러한에 어로 졸으로 전달 하는 때문에 F. tularensis의 무기 형태에 대 한 효능을 보여주는 중요 합니다. 쥐의 Intratracheal 접종 생성 장비, 비싼, 크고 복잡 한에 어로 졸에 대 한 필요 없이 F. tularensis 쥐 폐의 노출을 수 있습니다. 또한 F. tularensis 형태의 선택…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 계약 HDTRA1-14-C-0116, 방위 위협 감소 기관 (DTRA) 감염 유전체학 (국방부 #W911NF-11-1-0136)에 우수를 위한 센터에 의해 지원 되었다.

Materials

GreenLine fiber optic blade size 0 Carefusion 5-5231-00 Macintosh American profile
GreenLight system laryngoscope handle Carefusion 4559GSP
Exel International Safelet I.V. Catheter EXEL INTERNATIONAL 26743
Slip Tip Sterile Syringes 1ml BD 309659
Broad Point Dressing Thumb Forceps Thermo Scientific 76-302
200ul barrier tip GeneseeScientific 24-142
1000ul pipette tip Olympus Plastics 24-173
Dremel 3000-2/28 Rotary tool kit Dremel 3000228
Rodent Intubation Stand Braintree Scientific RIS 200
Isoflurane Butler Schein NDC 11695-6776-2
Rodent anesthesia machine Surgivet VTC302 Classic T3
Rodent Anesthesia chamber Braintree Scientific AB 1

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Citer Cet Article
Nguyen, J. Q., Zogaj, X., Adelani, A. A., Chu, P., Yu, J., Arulanandam, B. P., Klose, K. E. Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis. J. Vis. Exp. (127), e56123, doi:10.3791/56123 (2017).

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