Perla base ensayo Multiplex para el análisis de perfiles de Cytokine de lágrima

Lágrimas son producidas por la glándula lagrimal y glándulas accesorias y cubrir la superficie externa del ojo. Película lagrimal consta de una capa de lípidos externa y una capa acuosa interna que incluye proteínas solubles, mucinas y membrana limitada mucinas. Lágrimas prevenir invasión microbiana, suministrar nutrientes y proporcionan lubricación a la superficie ocular. Lágrimas actúan como una interfaz entre el aire y el tejido para el transporte de oxígeno a la córnea. ¹ la película lagrimal se compone de proteínas, carbohidratos, lípidos y electrólitos. La asociación entre las proteínas de la lágrima con enfermedades oculares y sistémicas como enfermedad del ojo seco, conjuntivitis vernal, glaucoma, diabetes mellitus, cáncer y orbitopatía tiroidea asociada ha sido identificado en varios estudios. ^{2 , 3 , 4} muestras de lágrima se pueden recoger por los tubos de microcapillary o de flujo lagrimal (Schirmer tiras). Además, prueba de Schirmer es un procedimiento estándar realizado en la córnea y cirugía refractiva clínicas, cuyos resultados pueden utilizarse para los ensayos de análisis del cytokine. Toma de muestra no invasiva, accesibilidad de la muestra de bio y la Asociación de la composición de la lágrima con varias condiciones fisiológicas y patológicas que una potencial fuente de biomarcadores para varias enfermedades oculares y sistémicas de la película del rasgón. ^{4 , 5 , 6}

Rasgón de citoquinas juega un papel importante en el estudio de la salud ocular superficial y las condiciones inflamatorias de diferentes enfermedades oculares. ⁷ concentraciones anormales de varias citoquinas en las muestras de lágrima se informaron a estar asociada con la enfermedad del ojo seco, queratoconjuntivitis vernal (VKC), queratoconjuntivitis atópica (AKC), conjuntivitis alérgica estacional y uveitis. ^{8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13} las proteínas de la lágrima pueden analizarse por métodos tradicionales como la espectrometría de masas, western blot y análisis enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). ^{14 , 15} sin embargo, las limitaciones de estos métodos son sensibilidad pobre y un mayor volumen de muestra requerido para el análisis de múltiples citoquinas, desgarro en cada paciente. ^{16 , 17} ensayos multiplexores grano base se han desarrollado para analizar múltiples analitos en muestras de la mezcla compleja y aplicado con éxito en muestras de lágrima para analizar múltiples citoquinas en diferentes enfermedades. ^{6 , 18} A combinación de sandwich ELISA y técnicas de citometría de flujo permiten estos ensayos a ser más sensible que el ELISA para la cuantificación de múltiples analitos en una sola muestra. ¹⁹ este método puede ser aplicado en una variedad de muestras clínicas y sobrenadantes de cultivo celular y ayuda en el estudio de las respuestas inmunes en varias condiciones fisiopatológicas. ^{20 , 21 , 22 , 23 , 24}

Existen varios estudios comparando múltiplex de grano basado en ensayos de ELISA y han reportado una correlación entre los métodos. Loo et al. en comparación con grano base ensayo multiplex con ELISA convencional para la detección de la adiponectina, resistina, leptina y grelina en muestras de suero o plasma humano y reportado una fuerte correlación (r > 0.9) entre los ensayos. ²⁵ Dupont et al reportó una fuerte correlación entre ensayos multiplex grano base y ELISA para la detección de IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ y TNF-α en la fitohemaglutinina y lipopolisacárido estimularon sangre entera recogidos de las mujeres embarazadas. ²⁶ Pickering et al reportó otro fuerte correlación entre el ensayo múltiple de grano base y ELISA para la detección de anticuerpos del suero a polisacárido de Haemophilus influenzae tipo b (r = 0.96), Toxoides de Tetani del Clostridium (r = 0.96) y Corynebacterium diphtheriae (r = 0.91). ²⁷ Biagini et al informaron una alta correlación positiva (r = 0.852) entre grano basado en análisis multiplex y ELISA para la detección de Bacillus anthracis anti-PA IgG en muestras de suero. ²⁸ Wang et al informaron una correlación entre el ensayo múltiple de grano base y ELISA para la detección de biomarcadores de la enfermedad de Alzheimer amiloide-β 42 (r = 0.77), tau total (r = 0,94) y tau fosforilada en aminoácido 181 (r = 0,82) en muestras de líquido cefalorraquídeo. ²⁹ estos estudios han demostrado que la aplicabilidad de grano en variedad de muestras clínicas, requisitos de volumen de muestra más pequeños y una correlación con ELISA estándar, que hacen ensayos multiplex grano basado en un prometedor base ensayos multiplexores alternativa a los tradicionales métodos de ELISA para la detección de múltiples analitos en diferentes tipos de muestras en fenotipos diferentes de la enfermedad. Aquí describimos un protocolo estandarizado para el ensayo múltiple de grano base de perfiles de citocinas para 41 analitos en muestras de lágrima recolectadas de sujetos sanos utilizando tiras de Schirmer.