La inducción de la mesenquimales-epitelial Transitions en células de sarcoma

plasticidad fenotípica se refiere a una transición reversible entre fenotipos celulares, y es comúnmente dividido en dos tipos, epitelial-a-mesenquimal (EMT) transiciones y transiciones-mesenquimal-a epitelial (MET). Esta plasticidad fenotípica juega un papel importante en los procesos normales de los organismos multicelulares, como el desarrollo y la cicatrización de la herida ^1; sin embargo, estas mismas vías y programas de expresión génica también pueden conducir a la enfermedad, tales como fibrosis (revisado en ^{2, 3, 4)} y metástasis de carcinoma (revisado en las referencias ^{5, 6, 7, 8).} Durante la metástasis, por ejemplo, EMT interrumpe la polaridad celular, interacciones célula-célula, y promueve la invasión ^{9, 10.} En conjunto, contribuyen EMTs de un estado fenotípico que facilitan la divulgación de las células cancerosas. Además, EMT también conduce a una serie de otras alteraciones fenotípicas que impulsan un fenotipo agresivo, incluyendo la desregulación del metabolismo de la célula de cáncer ^6, el desarrollo de resistencia a los medicamentos ^{11, 12,} mayor capacidad tumor-iniciación ^{13, 14} y el anfitrión de la evasión inmune ^15.

plasticidad fenotípica se ha estudiado bien en la progresión del carcinoma; sin embargo, sarcomas también exhiben plasticidad fenotípica. Curiosamente, parece como si algunos de los mismos controladores de plasticidad fenotípica en los carcinomas también contribuyen a la plasticidad del sarcoma y agresividad. Por ejemplo, se ha demostrado que las células tumorales circulantes (CTC) de pacientes con sarcoma de expresar EpCAM, una proteína de superficie celular que se encuentra típicamente en las células epiteliales ^16. Addicionalmente, 250 muestras de sarcoma de tejido blando se clasificaron como de tipo epitelial o mesenquimal-como basado en la expresión génica. Los pacientes de la firma biomarcador epitelial tuvieron un mejor pronóstico que los pacientes con la firma biomarcador mesenquimal ^17. Esto es coherente con muchos carcinomas, en los que los pacientes con más carcinomas epiteliales-como tienen mejores resultados en comparación con los pacientes con más tumores mesenquimales-como ^18.

Mientras que algunos sarcomas muestran biomarcadores y vías de expresión génica consistentes con MET, las bases moleculares de esta plasticidad fenotípica siguen siendo poco conocidos. Para estudiar los mecanismos y los conductores de MET en el sarcoma hemos desarrollado un modelo de inducción MET utilizando dos factores-epiteliales específica, el microRNA (MIR) -200 familia y Grainyhead-como 2 (GRHL2). El MIR-200 son una familia de pequeños ARN no codificantes que regulan la expresión génica mediante la unión a los 3' UTRs de messenger ARN y la prevención de traducción en proteína. La familia miR-200 se compone de dos subgrupos – uno que contiene miR-141 y miR-200a, y el otro incluyendo miR-200b, miR-200c, y miR-429. Los miembros de la familia miR-200 se enriquecen en tejidos epiteliales, y la pérdida de miR-200 se asocia con metástasis en carcinomas ^19. La familia miR-200 también es downregulated en sarcomas de tejidos blandos en comparación con el tejido normal ^20. Al igual que en los miR-200, GRHL2 es un regulador clave que es importante para el desarrollo del epitelio ^21. El factor de transcripción GRHL2 actúa de dos formas de regular por incremento genes epiteliales, tales como E-cadherina: 1) en las células epiteliales, GRHL2 directamente reprime el regulador maestro EMT, ZEB1 ^22; y 2) GRHL2 activa directamente la transcripción de genes epiteliales ^23. Nuestras investigaciones anteriores han demostrado que la expresión combinada de miR-200 y GRHL2 en las células del sarcomainduce un fenotipo MET-como ^24. A continuación, presentamos un protocolo detallado para crear un modelo in vitro de la inducción de MET en células de sarcoma usando la expresión ectópica de miR-200 y GRHL2.