对于检测磁力搅拌器方法<em>旋毛虫</em>幼虫肌肉样品

1.准备 样品采集 注意：可用于单个或合并肌肉样品的磁性搅拌器方法。 从适当的好发部位，并以适当量9收集样品。请参阅该国要求或信息和通信技术，世界动物卫生组织或ISO的建议。 对于欧盟，例如，采取从隔膜支柱1g的样品在过渡到国内的猪的强壮有力的一部分。确保所有的肌肉样本不含所有的脂肪和筋膜。 如果舌头测试，删除之前测试的表面层。 请注意，如果样品被冻结，因为大多数旋毛虫不抗冻和死亡后解开，是消化不太耐倾向于坚持容器壁，从而降低检测灵敏度。 注意：如果冻结，加倍为L样本量东和增加沉降时间（见下文）。 消化液的制备 添加25％的盐酸（16±0.5毫升），以2升46预热自来水 – 48℃到3升的玻璃烧杯中。过低的温度会导致消化不完全;过高的温度停用胃蛋白酶的酶学性质。 放置一个搅拌棒的烧杯中，并搅拌一预热板溶液（46 – 48℃）。 添加10±0.2克胃蛋白酶（1：10,000 NF，1：12500 BP公司，2000 FIP）到酸性溶液中。 注意：胃蛋白酶的质量是最重要的和酶的活性必须由生产者进行认证。对于实验室安全原因，并保持胃蛋白酶活性，增加消化液的组件的顺序必须坚持。 肌肉样品制备 砍在搅拌机或粉碎机百克肌肉样本。为了方便BLEN丁，加2毫升预热水样品和以最大速度融合为2 – 3秒。 第二混合前，打开搅拌机和混合碗缘缘的底部，并重复交融的顶级传送任何肌肉样本。继续以2连发混合 – 3秒，直到肉没有明显的碎片依然存在。 注：太少混合，可能会导致消化不完全，而过多的混合可以在样品6损坏旋毛虫存在。 2.程序 肌肉样本消化 传送1升消化流体成圆筒。转移绞肉放入烧杯中，并在消化流体用勺子或叉子传播。彻底用500mL的预热消化流体进3升烧杯中漂洗搅拌器盖子，叶片和搅拌器碗。 注：可导致SENS的损失不完全漂洗itivity。 用铝箔覆盖烧杯，并保持44一恒定温度 – 46℃，用一温度计监测。 炒出的消化液30分钟，无飞溅创建了深刻的漩涡，直到肉颗粒消失。根据测试肉（野生动物如肉）的类型，增加消化时间直至最多60分钟。 过滤和消化流体的沉降 以确定未消化的组织的量，调整刻度为零，在使用前称量筛，并注意其重量。筛应清洁，没有任何组织的粒子，这可能阻碍旋毛虫到达沉降漏斗。检查分液漏斗垂直平整。 消化后，小心地倒入通过180微米筛消化液到分离玻璃漏斗。分离玻璃漏斗的宽度不应bË长度大于55％，使良好的幼虫沉淀。请注意，以避免任何溢出。 为了避免灵敏度降低，彻底冲洗玻璃烧杯中，并从一个挤压洗涤瓶用约200毫升自来水的筛和漂洗水转移到沉淀玻璃漏斗。小心仔细冲洗3升烧杯中的边缘。提起筛子，彻底筛下冲洗的面积。 未消化的组织量的确定 注意：由于在该方法的执行错误，肌肉组织可以保持在筛上，以及筋膜和结缔组织这是难消化。未消化的组织的量在第一10分钟沉淀步骤（见2.5）来测定。这允许大约30分钟的筛干，残留水会影响未消化的组织所确定的权重。 广场上规模纸巾，并权衡与undiges筛特德组织。 从未消化组织筛子过滤重量减去前筛的重量。如果起始样品重量的不超过5％保留在筛（ 即 5克/ 100克原料）在消化过程被认为是令人满意的。 如果未消化的组织的量超过5％时，重复使用新鲜肌肉样品的测试。如果剩余的组织主要是由未消化的肌肉组织的和新鲜样品不可用，再次消化未消化遗体和除了原始样品检查。 消化液的沉淀 保持过滤消化流体在分液漏斗中30分钟。如果不受干扰，在旋毛虫会沉淀在漏斗的底部。 如果使用冷冻的样品，增加沉降时间为最多60分钟。 一旦沉积完成后，完全打开活塞分液漏斗中，让至少40消化液毫升迅速跑出来，放入量筒（80毫升，如果肌肉样品已经先前冻结）。 首先，让一半的流体的进入气缸，然后在相反的方向完全打开活塞，以允许10毫升消化流体的通过。最后，在另外10毫升相反的方向打开活塞。此过程可确保旋毛虫不会被困在水龙头。 注意：需要足够的速度，以避免残留在分液漏斗中的幼虫，降低灵敏度。 气缸中的消化流体的沉降 离开气缸中的沉淀10分钟，以允许幼虫沉积物。通过用移液管抽吸，而不会干扰10mL的沉积物除去30毫升上清液。 以减少样品中的组织的纤维的量，30毫升的自来水中添加的沉积物和离开另一个10米英寸重复，直到液体是明确的。 除去上清液，转移至10毫升洗净泥沙，以网格化培养皿或幼虫计数盆地。冲洗用10mL自来水筒，然后将水添加到样品中。 注意：在样品中作为大量碎片能够防止旋毛虫 （ 图1）的标识，如果需要的话应进行进一步的洗涤步骤，。 镜检 使用trichinoscope或立体显微镜具有可调强度的子级透射光源在一个15至20倍的放大倍率的洗涤步骤后，立即以检查样品。 浇样品放入网格培养皿后，检查由电网盘/盆系统网格。如果没有发现犯罪嫌疑人的结构，轻轻移动在网格培养皿或幼虫计数盆地流体以循环的方式让任何旋毛虫拉rvae，这潜在地忽略，在培养皿的中心积聚。重复检查。 如果发现可疑的结构，提高放大倍数40 – 100X。从盘/盆用移液器除去旋毛虫 ，并与90％的乙醇的管收集。 完整的菜已经被审查后，重复上述步骤，从盘/盆的轻轻摇动开始。重复该过程至少三次或直到没有更多的幼虫被找到。 计数幼虫的数目。关联到肌肉组织的量测试和本为每克（LPG）的幼虫。 如果太多的幼虫存在于消化流体以确定幼虫数可靠地，返回包含幼虫量筒中的流体，从挤压洗瓶用自来水冲洗，并留下幼虫沉降至底部。 一个10分钟沉降时间后，降低上清液到规定体积（ 例如10毫升）中。以确定确切体积，转移上清液到新的筒用吸管。 通过剧烈摇晃液均匀暂停幼虫。在摇动运动，加入20微升悬浮幼虫12滴到培养皿。 检查显微镜每下降。确定在240微升的幼虫数和删除的最高和最低计数。推断幼虫的数目，以上清液的总体积（ 例如 ，10毫升）。 注意：立体显微镜的质量是最重要的为旋毛虫的识别。 当幼虫在管通过吸移管收集，仔细检查幼虫不粘附在移液管壁而被转移到管中。 注：从合并的样品阳性结果旋毛虫必须跟踪从池中回原籍的尸体。在这里，池大小应逐步减少直至正面胎体鉴定者tified。样本大小也可以在这个过程中增加以增加灵敏度。其中集体样品的检查产生一个正的或不确定的结果，另外20克样品从每个猪服用。从五头猪各20 g样品汇集并使用所描述的方法检测。以这种方式，从20组的五头猪样本将被检查。当一个合并样品中的五头猪检测旋毛虫 ，将20g样品从该组中的个别猪收集并直到检测原点的正胎体每个单独检查。