الطريقة النمام المغناطيسي للكشف عن<em> الخيطيات</em> يرقات في عينات العضلات
Summary
منع الخيطيات البشري في العديد من البلدان في جميع أنحاء العالم تقوم على فحص العينات في المختبرات العضلات من الحيوانات الحساسة بالطرق الهضم، والتي تعتبر طريقة محرك مغناطيسي معيار الذهب.
Abstract
الخيطيات هو المرض الموهن في البشر ويسببه استهلاك اللحوم النيئة أو غير المطبوخة من الحيوانات المصابة يرقات الدودة الخيطية من جنس الخيطيات. وأهم مصادر العدوى الإنسان في جميع أنحاء العالم واللحوم اللعبة ولحم الخنزير أو منتجات لحوم الخنزير. في العديد من البلدان، ويستند منع الخيطيات الإنسان على تحديد الحيوانات المصابة عن طريق الهضم الاصطناعي للعينات العضلات من جثث الحيوانات عرضة للإصابة.
هناك العديد من الطرق بناء على الهضم من اللحم ولكنه يعتبر طريقة محرك مغناطيسي معيار الذهب. هذا الأسلوب يسمح للكشف عن الديدان الخيطية اليرقات بواسطة المجهر بعد الهضم الأنزيمي من عينات العضلات واللاحقة الترشيح والترسيب الخطوات. على الرغم من أن هذه الطريقة لا تتطلب معدات خاصة ومكلفة، والضوابط الداخلية لا يمكن استخدامها. ولذلك، ينبغي applie إدارة الجودة الصارمةد طوال فترة الاختبار. والهدف من هذا العمل هو توفير معالجة تعليمات مفصلة ونقاط المراقبة الحرجة من طريقة للمحللين، استنادا إلى تجربة المختبر المرجعي للاتحاد الأوروبي لطفيليات والمختبر المرجعي الوطني لألمانيا بشأن الخيطيات.
Introduction
يمكن الكشف عن الديدان الخيطية من جنس الخيطيات في العضلات المخططة من أكلة اللحوم وآكل النبات والحيوان الثدييات والطيور والزواحف في جميع أنحاء العالم. ويمكن لهذه الديدان الخيطية الحيوانية تصل إلى البشر عندما الخام أو اللحوم شبه الخام ومنتجات اللحوم المشتقة من الخنازير، الخيول، ويتم تناولها الحيوانات لعبة. هذا حيواني المنشأ يمكن أن يكون مرض خطير في البشر تتميز علامات اصم والأعراض، مثل الإسهال، والحمى، وذمة الحجاج وألم عضلي والمضاعفات المحتملة مثل التهاب عضلة القلب، ومرض الانسداد التجلطي والتهاب الدماغ 1.
شعرينة حلزونية هو العامل المسبب للمرض انتشارا من عدوى الديدان الخيطية في الحيوانات البرية والداجنة وتسبب معظم الإصابات البشرية في جميع أنحاء العالم. في أوروبا وشمال وغرب أفريقيا، وغرب آسيا، الخيطيات britovi هي مصدر آخر من الإصابات البشرية. وبالإضافة إلى ذلك، يتم الإبلاغ عن عشرة أصناف أخرى أقل شيوعا مثل المسبب تم العثور على وكلاء من الأمراض التي تصيب البشر وفي مناطق مختلفة من العالم، وعادة في الحيوانات البرية 2. بالإضافة إلى الحيوانات البرية مثل الخنازير البرية والدببة وحيوانات الفظ وحيوان الغرير، يمثل لحم الخنزير أهم مصدر من حالات العدوى البشرية في جميع أنحاء العالم.
أفضل طريقة لمنع الخيطيات هي الامتناع عن تناول منتجات اللحوم النيئة ولطهي أي اللحوم، خاصة اللحوم لعبة لدرجات حرارة آمنة (> 65 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة، أي لتغيير لون اللحم من الوردي إلى البني في جوهر منتجات اللحوم) 3. حددت الاتحاد الأوروبي ووزارة الزراعة الأميركية تجميد والطبخ مرات ودرجات الحرارة لمنتجات لحوم الخنازير التي يمكن استخدامها لقتل T. الحلزونية اليرقات في اللحوم 4، 5. وعلاوة على ذلك، تم نشر توصيات لتثبيط الخيطيات في اللحوم ومنتجات اللحوم من قبل اللجنة الدولية للالخيطيات"XREF"> 6. في أوروبا، بالإضافة إلى إدخال ظروف السكن للرقابة في قطعان الخنازير التجارية التي يكون فيها خطر الإصابة الخيطيات لا يكاد يذكر، ويستند منع الخيطيات البشري على فحص العينات في المختبرات العضلات من الحيوانات الحساسة 4.
لأغراض السلامة الغذائية، وفحوصات الهضم هي الإجراءات الوحيدة التي يعول عليها للكشف المباشر من الديدان الخيطية اليرقات في اللحوم 3 و 7. حتى لو كانت هناك العديد من الاختلافات من الفحص الهضم، وطريقة النمام المغناطيسي هو الطريقة المقبولة دوليا المرجع 3 و 4 و 7. ويستند هذا الفحص للكشف عن الديدان الخيطية اليرقات في أنسجة العضلات المخططة. بعد الهضم الأنزيمي من عينات العضلات واللاحقة الترشيح والترسيب الخطوات، ترييتم تحديد chinella اليرقات بواسطة المجهر. اعتمادا على الالتزامات التجارية والتشريعات الوطنية، هناك العديد من الاختلافات الصغيرة في البروتوكول العام للطريقة محرك مغناطيسي. هنا، تستند تفاصيل تقنية عن متطلبات الاتحاد الأوروبي 4، مواصفات ISO 8، والمبادئ التوجيهية تكنولوجيا المعلومات والاتصالات 6، وتجربة المختبر المرجعي للاتحاد الأوروبي لطفيليات (EURLP) والمختبر المرجعي الألمانية للالخيطيات.
Protocol
Representative Results
Discussion
على الرغم من أن طريقة محرك مغناطيسي يمكن القيام بها بسهولة، وليس الالتزام بدقة التفاصيل الفنية يؤدي إلى عدم كفاية حساسية، مما يهدد صحة المستهلك. وقد تم تسليط الضوء على نقاط المراقبة الحرجة في النص أعلاه. وبالإضافة إلى ذلك، واستخدام المعدات المناسبة أمر بالغ الأهمية لنجاح الاختبار. ينبغي بذل كل سفن من الزجاج وماصة نصائح المغلفة مع السيليكون للحد من التزام اليرقات إلى السطح.
حساسية طريقة الهضم يعتمد على كثافة اليرقات في العضلات وكمية عينة العضلات اختبار. لكثافة اليرقات من 3-5 غاز البترول المسال من الأنسجة العضلية، أفيد حساسية من 100٪، ولكن أقل من 1 غاز البترول المسال انخفض حساسية إلى 40٪ 13. اعتمادا على أنواع الحيوانات المضيفة اختبار، وحساسية الاختبار يمكن تحسينها عن طريق زيادة كمية العينة المستخدمة. طعبء nfection في الحياة البرية عادة ما تكون منخفضة، وتستخدم أحجام عينات بالتالي أكبر 14. تختلف مواقع ميل أيضا بين الحيوانات المضيفة. هنا، وهضم أقل من بعض الأنسجة العضلية مثل يحتاج اللسان أن تؤخذ بعين الاعتبار، وهو ما يمكن أن يؤدي أيضا إلى عينة أكبر أحجام 15.
وعلاوة على ذلك، من المهم أن نفهم أن الطريقة النمام المغناطيسي لا تشمل الضوابط الداخلية. لذلك، وإدارة ضمان الجودة من أخذ العينات وثائق ضرورية للحصول على نتائج صحيحة ودقيقة. يجب مراقبة جودة الأداء مختبر للكشف عن الديدان الخيطية اليرقات في عينات العضلات من خلال المشاركة المنتظمة من كل المحلل في اختبارات الكفاءة.
قيود إضافية على الطريقة هي أن مرحلة تحديد النهائية من اليرقات العضلات عن طريق الفحص المجهري هو ذاتي للغاية وهيئة التعليم العاليتعتمد vily على علم التشكل اليرقات التي كتبها المحلل التحقيق.
طريقة بديلة للاهتمام للتحايل على هذه المشكلة هو الأسلوب محرك مغناطيسي / على عزل مرشح تليها كشف اليرقات من خلال اختبار تراص اللاتكس. ومع ذلك، وفقا لتشريعات الاتحاد الأوروبي هذه الطريقة تعتبر فقط أي ما يعادل لاختبار حوم الخنازير المحلية ولكن ليس بالنسبة للحيوانات التي هي أكثر عرضة للعدوى مثل الخنزير البري (4). التعرف على المستضد اليرقات مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة يجعل اختبار أكثر موضوعية، ولكن ينفي المختبر إمكانية تحديد عدد من اليرقات في كل غرام من اللحوم 16.
وتشمل المزيد من الاختلافات في طريقة النمام المغناطيسي للالمجمعة عينة الهضم تقنية طريقة / الترسيب بمساعدة ميكانيكيا، وبمساعدة آلية تجميع عينة حفرطريقة estion / على تقنية فلتر العزلة، وطريقة الهضم الآلي للالعينات المجمعة من تقنية تصل إلى 35 غرام. وتستند هذه التقنيات كلها على الهضم الاصطناعي من اللحم والتصور والعد من الديدان الخيطية اليرقات، ولكنها تختلف في المعدات المستخدمة في الترشيح والترسيب الخطوات.
اليرقات معزولة يمكن زيادة التعرف على مستوى الأنواع من خلال اختبار الجزيئي (على سبيل المثال، تعدد الإرسال PCR) 17. وفقا لتشريعات الاتحاد الأوروبي، يجب أن تحال جميع العينات الإيجابية إلى المختبر المرجعي الوطني أو EURLP لتحديد أنواع الديدان الخيطية.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نرجو نشكر سابين Reckinger للحصول على المساعدة الفنية والدعم الممتاز.
Materials
| Knife,Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
| Blender | With a sharp chopping blade | ||
| Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
| Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
| Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation | ||
| Stands, rings and clamps | |||
| Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
| Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
| Glass beaker | Capacity 3 litres | ||
| Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube | ||
| Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
| Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
| Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
| 25 % hydrochloric acid | |||
| Pepsin | Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml | ||
| Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
| Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
| Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
| Metal tray | Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice | ||
| Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 ml) | ||
| Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 ° C | ||
| Siphon | For tap water |
References
- Gottstein, B., Pozio, E., Nöckler, K. Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis. Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).
- Pozio, E., Murrell, D. K. Systematics and epidemiology of Trichinella. Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).
- 9 CFR Part 318.10 – Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf (2012)
- Gamble, H. R., et al. International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption. Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).
- Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis. Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).
- Nöckler, K., Kapel, C. M. O. Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation. FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).
- Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. . Veterinärmedizinische Parasitologie. , (2006).
- Despommier, D. D., Müller, M. The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis. J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).
- Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion. Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).
- Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat. J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).
- Malakauskas, A., et al. Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia. Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).
- Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife. Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).
- Interisano, M., et al. Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs. Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).
- Pozio, E., La Rosa, ., G, PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples. Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).
