Met behulp van de mouw techniek in een muismodel van aorta transplantatie - een instructie Video
Summary
Presenteren we een orthotopic aortaklep transplantatie model met behulp van de mouw techniek in muizen. Het is een zeer snelle wapendrager-methode, die kan worden ingezet in studies van vasculaire ziekte.
Abstract
Aorta transplantatie Orthotopic met behulp van de mouw techniek vermindert schade aan de aorta met mislukkingstarief van slechts 10-20%. De tijd om de aorta in muizen met behulp van de methode mouw anastomose was kort en gemakkelijk gemiddeld 20 min, studies van iso/allo transplantaten toelaat. Het volgende artikel beschrijft de procedure van de aorta transplantatie gebruikt in ons laboratorium. De muizen waren verdoofd met een mengsel van 1,5% volume Isofluraan en 100% zuurstof via een gezichtsmasker. Op dit punt, het segment van de aorta tussen de renale bloedvaten en de bifurcatie werd gescheiden van de vena cava, vrij bereid en clampedat de proximale en distale segmenten met een enkele zijde hechtdraad. Voorafgaand aan de verwijdering van de aorta, werd een zoutoplossing met heparine geïnjecteerd in de vena cava inferior. Vervolgens de aorta werd gesneden tussen de klauwen en een zoutoplossing heparine oplossing werd gebruikt voor het spoelen van de lumen. De techniek van de mouw met monofilamenten hechtingen werd gebruikt om te planten van de abdominale aorta in de positie van de orthotopic.
Introduction
Zoals opgemerkt in een eerdere studie, is veel aandacht besteed aan lymfkliertest aorta transplantatie modellen waarmee discriminatie tussen specifieke vasculaire reacties veroorzaakt door de prothese zelf en bepaalde systemische factoren die verband houden met een arteriogenic omgeving 1 , 2 , 3. de belangrijkste factor die hier een cruciale rol speelt is de beschikbaarheid van knock-out en transgene muizen. Hun betrokkenheid bij een dergelijk model biedt de mogelijkheid om te identificeren en bepalen van nieuwe pathofysiologische trajecten in verband met de ontwikkeling van degeneratieve vaatziekten, zoals atherosclerose en aneurysma vorming4, 5.
Het is vermeldenswaard dat tijdens de enting een intrinsieke ischemie/reperfusie letsel aan de vaartuigen die bestemd zijn voor de transplantatie weergegeven. Dus, het voorkomen van specifieke problemen met de integriteit van de prothese of een onverwachte ontstekingsreactie in de postoperatieve periode kan niet worden uitgesloten eventueel uitschakeling pathofysiologische veranderingen in degeneratieve vasculaire ziekten3 ,4,5,6,7. Mouw wapendrager is de alternatieve methode in eind voor arteriële wapendrager van vaartuigen met een diameter van minder dan een millimeter en is met succes toegepast in de nier- en cardiale transplantatie bij ratten die werd vervolgens aangepast op aorta transplantatie in muizen door Dambrin et al. 8 , 9 , 10 , 11.
Aorta schade met behulp van de mouw transplantatie techniek wordt geminimaliseerd met een zeer lage technische mislukkingstarief, te wijten aan het duurzame gemiddeld slechts 20 min. De resultaten van onze vorige hebben uitstekende functionele en structurele eigenschappen van een isograft in vivo aangetoond na de transplantatie die met behulp van de mouw techniek1. Dambrin et al. beschrijven die na een korte leercurve het slagingspercentage was meer dan 78%10. Complicaties zoals trombose zijn zeldzaam, bijvoorbeeld Engelbrecht et al. deed niet observeren trombose met behulp van de mouw techniek in niertransplantatie in de rat8.
Het model van de lymfkliertest aorta transplantatie met mouw anastomoses is een snelle en eenvoudige tool om te studeren van iso/allograft reacties in het getransplanteerde vaartuig. Deze video toont de aorta transplantatie procedure uitgevoerd in ons laboratorium. Dit model van de transplantatie kan nuttig zijn bij het bepalen van de pathologische mechanismen van vasculaire degeneratieve ziekte en kan bijdragen aan de verdere evaluatie van moleculaire en farmacologische interventies12.
Protocol
Representative Results
Discussion
Voorafgaand aan deze studie werden verschillende andere modellen van transplantatie in muizen grondig geanalyseerd3,6,7,10,13,14. Het model van de aorta transplantatie met behulp van de techniek van de mouw met wijzigingen door Dambrin et al. werd geselecteerd als het gevonden die aan onze criteria en een hoge betrouwbaarheid van de mouw anastomosis in vergelijking met conventionele end-to-end hechtdraad methoden toonde 1 , 10.
Deze techniek is in vele opzichten gunstig met kruis-clamp tijd aanzienlijk verminderd minimaliseren van de schade aan de aorta tijdens de operatie. Een lage incidentie van trombose werd waargenomen naast het vermijden van een potentiële mismatch in vaartuig kaliber tussen de donor en de ontvanger. De bovenstaande opmerkingen maken deze techniek zeer geschikt voor onderzoek naar vaatziekten in aorta transplantaties in muizen.
In een follow-up studie waarin werd een echografie uitgevoerd 8 weken na de transplantatie, werden geen significante veranderingen waargenomen. Dit bevestigd veronderstellingen dat schade aan de aorta tijdens de operatie zou minimaal1.
De praktijk procedure gepresenteerd in dit artikel garandeert geen bijzondere waardevermindering zowel in de integriteit van de graft en de functie daarvan. Daarom kan worden geconcludeerd dat dit experimentele transplantatie model als een waardevol instrument voor toekomstige moleculaire en farmacologische onderzoek van degeneratieve vaartuig ziekte bij genetisch gemodificeerde muizen dienen kan.
Wij geloven dat de video-gids als lesmateriaal ter illustratie van het gebruik van dit eenvoudige arterio-arterial model functioneren en kan dat het aan een verdere vruchtbare debat over vele belangrijke kwesties in vasculaire pathologieën bijdragen zal. Deze zeer snelle wapendrager-methode kan worden gebruikt om te studeren vasculaire ziekte bij genetisch gemodificeerde muizen. Het kan ook worden gebruikt als een wijziging in het aneurysma model gecombineerd met transplantatie.
Er zijn kritische punten tijdens de procedure. Het plaatsen van de hechtdraad zelf is de meest kritische stap. De chirurg heeft te verzorgen om te voorkomen dat eventuele torsie van de aorta door de juiste uitlijning van donor en ontvanger. De klemmen zijn zorgvuldig verwijderd na inzage van de anastomose. De distale klem moet altijd eerst wat resulteert in lage druk houden van de wanden samen voorafgaand aan de release van de proximale hogedruk zijde worden vrijgegeven. Het gevolg van het niet goed na de reeks van versie zou worden bloeden.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We zouden graag bedanken Roma Wieczorek en Peter Kurdybacha voor hun uitstekende bewerken hulp, en Leon Decker en Uli Heuter voor hun uitstekende technische bijstand.
Materials
| Halsey Needle Holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Dumont #5-45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #5 Forceps – | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Lexer-Baby Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Vannas Scissors | Aesculap, Germany | Typ OC498R | |
| Castroviejo Suture Forceps | Geuder, Germany | 19015 | |
| 6-0 silk black (Silk) | Deknatel, Research Triangle Park NC, USA | 18020-60- FST | |
| 11-0 monofilament (Ethilon) | Ethicon, Norderstedt, Germany | EH7438G | |
| 3-0 polyglycolic acid suture (Serafit) | Serag-Wiessner, Naila, Germany | 60203214 | |
| Isofluorane | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon | ||
| Bepanthene eye and nose cream | Bayer, Germany | ||
| Microscop | Zeiss | Opmi MDO/S5 | |
| Vaporiser | Eickemeyer | TEC3 | |
| Ultrasound | Vevo, Canada | 770,2100 |
References
- Rowinska, Z., et al. Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging. Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).
- Daugherty, A. Mouse models of atherosclerosis. Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).
- Xu, Q. Mouse models of arteriosclerosis: from arterial injuries to vascular grafts. Am J Pathol. 165 (1), 1-10 (2004).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).
- Zernecke, A., Shagdarsuren, E., Weber, C. Chemokines in atherosclerosis: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (11), 1897-1908 (2008).
- Chereshnev, I., et al. Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation. J Surg Res. 111 (2), 171-176 (2003).
- Koulack, J., McAlister, V. C., Giacomantonio, C. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Engelbrecht, G., Kahn, D., Duminy, F., Hickman, R. New rapid technique for renal transplantation in the rat. Microsurgery. 13 (6), 340-344 (1992).
- Baxter, K., Hao, P. M., Howden, B. O., Saunder, A., Jablonski, P. Modified technique of abdominal heart transplantation in the rat. J Heart Lung Transplant. 17 (11), 1057-1064 (1998).
- Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis. J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).
- Siemionow, M. Histopathology of microarterial anastomoses: end-to-end versus end-in-end (sleeve) technique. J Hand Surg Am. 15, 619-625 (1990).
- Charo, I. F., Ransohoff, R. M. The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation. N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).
- Sun, H., et al. Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation. Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).
- Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease. J Vis Exp. (69), e4338 (2012).
