NK細胞の機能を監視するためのサイトメトリーに基づくアッセイを流します

先天性免疫系ナチュラルキラー（NK）の一部として、細胞はウイルス感染や悪性形質転換した細胞に対する防御の第一線に寄与する。抑制と活性化受容体のシステムは、T細胞とは対照的に、前の抗原プライミングすることなく、健康で形質転換された細胞を区別できるようにします。標的細胞に遭遇すると、NK細胞は、それらの標的を殺すために免疫シナプスに自分の細胞傷害性顆粒（ 例えば、パーフォリン、グランザイム）の内容物を放出します。また、NK細胞が生産し、異なるサイトカインの種類（ 例えば、インターフェロンγ：;：TNF-α、IFN-γ、腫瘍壊死因子α）を分泌：標的細胞上に及びケモカイン（MIP-1β 例えば、マクロファージ炎症性タンパク質1βを）相互作用またはサイトカイン刺激^1。

このような細胞毒性、ケモカインおよびサイトカイン産生として十分なNK細胞の機能は、多様なDISの運命に重要な影響を持っています容易になります。それらは減少IFN-γ産生およびNK細胞受容体^2の活性化の低下した発現からなる診断で不良NK細胞プロフィールを示す場合、白血病患者は、再発率の増加を示します。標的細胞の相互作用の際にサイトカイン産生などNK細胞の数および機能の早期回復は、同種幹細胞移植^3を受け^ている患者において減少再発および生存率の改善率と関連しています。また、C型肝炎ウイルスに感染した患者におけるインターフェロン療法の開始時に、末梢NK細胞の脱顆粒の容量は、非応答者⁴よりも早い応答における強いです。リンパ腫または多発性骨髄腫を患っている患者における自家幹細胞移植（autoSCT）後15日目のNK細胞数（> 80 /μl）を改善された無増悪および全生存⁵を予測しています。メラノーマ患者におけるT細胞免疫グロブリンの発現およびムチンドメインcontaininG分子3（TIM-3）、NK細胞上の免疫調節タンパク質は、病期および予後⁶と相関します。

科学者たちは、過去数十年間を通じてNK細胞の機能を監視しています。事前のプライミングなしの腫瘍細胞に対するNK細胞の細胞毒性の最初の分析は^、51 Cr放出アッセイ^7を使用して対処しました。より最近では、科学者は、拡張NK細胞⁸の細胞毒性を評価するために、非放射性の方法を開発しました。サイトカインおよびケモカイン産生は、しばしば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）技術^9,10を用いて評価されています。過去数十年の間、これらの方法は、フローサイトメトリーに基づくアッセイによって補完されています。従来の表面染色プロトコルとの組み合わせでタンパク質輸送阻害剤（ 例えば、ブレフェルジンAおよびモネンシン）と細胞透過法の使用は、異なる特定のリンパにおけるケモカインおよびサイトカイン産生を研究する科学者を有効にしていますocyteサブセット（ 例えば 、T、BまたはNK細胞^）11。また、別のフローサイトメトリーベースのアッセイは、T及びNK細胞の細胞毒性をモニターするために開発されてきました。 2004年アルターらは 、細胞傷害性顆粒¹²の脱顆粒のマーカーとして標的細胞の遭遇時にNK細胞のリソソーム関連タンパク質のCD107a（LAMP1）の表面発現を記載しました。異なる蛍光色素及びマルチチャネルフローサイトメーターの広い範囲は、私たちの日に利用可能であるので、同時に異なるNK細胞サブセットに多様なNK細胞機能（細胞毒性、サイトカインおよびケモカイン産生）を監視することが可能となりました。これは、生検または白血球減少症を患っている患者の血液サンプル中、 例えば、サンプルサイズが制限される状況において特に重要となります。

グローバルNK細胞の機能をテストするために、別のフローサイトメトリーに基づくアッセイを効率的に組み合わせることができます。テオレルらは HEAからNK細胞を刺激し腫瘍細胞株K562とlthyドナーと^13、フローサイトメトリーを介して、NK細胞の脱顆粒、インサイドアウト信号およびケモカイン産生を分析しました。最近autoSCT中の腫瘍患者におけるNK細胞のサブグループ、表現型および機能はフローサイトメトリーに基づくアッセイを流す用いて分析しました。これは、NK細胞はautoSCT ¹¹後の非常に早い時点での腫瘍細胞の認識の際に、サイトカイン/ケモカインの脱顆粒及び生成することができたことが示されました。

ここでプロトコルが同時に異なるサブセット内のNK細胞の機能を監視することを可能にするフローサイトメトリーに基づくアッセイを使用して脱顆粒の容量、ケモカインおよびサイトカイン産生を含む、腫瘍細胞との相互作用にNK細胞の機能を評価するために記載されています。