Allevamento la mosca della frutta<em> Drosophila melanogaster</em> Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

La maggior parte degli animali sono intimamente associati con i batteri ( 'microbiota') dalla nascita alla morte ^1. I confronti di ( 'convenzionale') gli animali privi di microrganismi ( 'axeniche') e di microrganismi-associati hanno dimostrato microbi influenzano diversi aspetti della salute degli animali, tra cui metabolica, nutrizionale, vascolari, epatiche, respiratorio, immunologico, endocrino, e la funzione neurologica ^2. La mosca della frutta Drosophila melanogaster è un modello chiave per comprendere molti di questi processi in presenza di microbi ^3,4 e per studiare l'influenza microbiota su ^5,6 salute degli animali. Nessuna specie batterica è presente in ogni individuo ( 'core'), ma Acetobacter e Lactobacillus specie numericamente dominano il microbiota di entrambi D. laboratorio-allevati e catturati in natura melanogaster. Altro Acetobacteraceae (compresi Komagataeibacter e Gluconobacter), Firmicutes (come Enterococcus e Leuconostoc), e Enterobacteriaceae sono sia spesso presente in individui Drosophila a bassa abbondanza, o irregolarmente presenti in grande abbondanza ^7-12.

Il microbiota di Drosophila e mammiferi è incostanti all'interno e attraverso le generazioni ^14,19. Microbiota incostanza può portare a rumore fenotipica quando si misurano i tratti microbiota-dipendente. Ad esempio, la memorizzazione Acetobacteraceae influenza lipidi (trigliceridi) in Drosophila ^15-18. Se Acetobacteraceae sono più abbondanti nella mosche di una fiala che in un altro ^19, mosche isogenici possono avere diversi fenotipi ^20. Una soluzione per il problema del microbiota incostanza nei topi ¹⁴ è stato in pratica dal 1960, con l'introduzione di una comunità definita di 8 specie microbiche dominanti per cuccioli di topo ogni nuova generazione (alterata Schaedler flora),assicurando che ogni cucciolo è esposto agli stessi membri chiave del microbiota del mouse. Questa pratica controlla per la composizione microbica anche quando il microbiota non è l'obiettivo primario di studio ^32, e imposta precedente per assicurare la presenza di microbi chiave in una varietà di condizioni sperimentali.

Per definire l'influenza dei microbi sulla Drosophila nutrizione, diversi protocolli per derivare linee di volo axenici sono state sviluppate, compresa ipoclorito dechorionation di embrioni (sia derivato de novo ogni generazione o mantenuta generationally mediante trasferimento diete sterili) e trattamento antibiotico ^13. Ci sono benefici per diversi approcci, come la facilità e rapidità sia per il trattamento di antibiotici e di trasferimento seriale, contro un maggior controllo delle variabili confondenti con de novo dechorionation (ad esempio, la densità d'uovo, i microbi contaminanti residui, fuori bersaglio effetti antibiotici). Indipendentemente dal metodo dipreparazione, introduzione di specie microbiche specificati axeniche embrioni permette cultura della Drosophila con definite le comunità ( 'gnotobiotic'). In alternativa, mimando l'uso di flora Schaedler, questa comunità potrebbe essere inoculato alle uova convenzionalmente stabilite (seguenti passaggi 6-7 solo) per assicurare la presenza di microbi trait-influenzano in ogni flacone ed evitare complicazioni del microbiota incostanza. Qui si descrive il protocollo per l'allevamento axeniche e gnotobiotic Drosophila da de novo dechorionation di embrioni, e per confermare la presenza di introdotto o contaminazione microbica taxa.