神经变性慢性淀粉样蛋白-β低聚物输注的动物模型是由抗体治疗灌注抵消与渗透泵

伦理声明：该项目的协议动物与加拿大议会关于动物饲养的准则获得来自总医院心圣心，蒙特利尔的动物护理委员会批准，符合要求。 1.导管立体定向手术前的准备工作切PE50导管（6厘米的长度），将用于连接与渗透泵套管（ 见图1A）。填PE50导管与人工脑脊液（ACSF）和密封该导管的两端。保持所述导管在4℃直至使用。 2.植入插管通过立体定向执行在无菌条件下手术。高压灭菌所有的手术器械和材料。清洁立体定位仪，彻底的工作区域，并用70％乙醇溶液消毒。戴上口罩，头发帽子和无菌手套。通过注入腹膜内（IP）氯胺酮和赛拉嗪的溶液（100毫克/千克和10毫克/公斤，分别）麻醉大鼠。用温和的捏脚趾检查后确认动作麻醉。 手术前至少30分钟皮下（SC）给麻醉动物;注入的非类固醇抗炎药（1毫克/千克美洛昔康）。 使用剪剃动物的头部和与葡萄糖酸洗必泰溶液2％和异丙醇2％三次皮肤消毒。对眼睛应用兽医眼药膏，以防止干燥时的麻醉下。 将动物与耳酒吧立体框架上。固定在立体框架的保持臂一个插管。通过将鼻锥递送3％异氟烷在整个过程中注入（SC）局部麻醉剂（布比卡因（1.5毫克/千克）和利多卡因（1.5毫克/千克）在头部的顶部。麻醉是维护，整个手术视野应该是披了，但它并没有在这里完成，以更好地展示该技术。 使在头部的顶部用手术刀3厘米的切口。安装4个夹子切口周围离开头骨清晰。采用圆尖剪刀，使一个袋（2×2 平方厘米）的动物的肩胛骨之间的皮肤下。 刮用刀片颅骨骨膜。头骨上应用纱布如果出血。 验证头骨是平的，立体框架上完全一致。为了确保头骨是平的，检查高度的前囟门和拉姆达坐标。取将被用作参考点前囟的坐标。 从囟开始，计算将在海马双侧植入两个导向套管的坐标（正位： – 0.42厘米;中侧：±0.30厘米;背腹： -根据Paxinos和Watson大鼠脑图谱0.28厘米）29 。指示用标记在插管的位置。 在两个套管的着床点来说钻颅骨孔（0.5毫米）。钻两个孔等大约5毫米的位置和下面的这些要点插入应用牙科粘固粉时将巩固套管螺丝。 切预先充满脑脊液用手术刀在导管的一端，而在套管的角臂插入。固定用牙科水泥的第一套管。避免将牙齿周围的水泥的位置在第二套管。 让2牙科水泥干 – 3分钟，然后取出从第一套管持有人的手臂，并固定第二套管在里面。重复步骤2.11和2.12。把虚拟套管两个引导套管。确保虚设和导向导管具有相同的长度，以防止组织浸润和阻止插管。 插入在先前的动物的肩胛骨之间所作的口袋两个导管的自由端。取下夹子，并缝合了皮肤缝合线4-0。 注：顶部导向套管需要为即将到来的Aβo输液访问。 取下立体框架的动物和放回到笼子里。在手术后的恢复，将笼在加热水毯，直到动物醒来。笼应在垫部分，所以如果需要的老鼠可以远离热移动。监控动物不断，直到它重新获得足够的意识，以保持胸骨斜卧。 返回大鼠动物设施从手术中恢复的密切监控10天。 注意：不要返回已动过手术，以公司的其他动物，直到完全康复的动物。美洛昔康（1毫克/千克）在手术后治疗疼痛两天给予每天一次。 3.渗透泵安装一天安装之前，填充渗透泵与6E10抗体（1毫克/毫升; 100微升）和对照IgG1根据在无菌条件下制造商的说明;抗体（100微升1毫克/毫升）。保持在无菌蒸馏水泵在37℃下过夜，以激活泵。 麻醉用异氟烷3％大鼠安装渗透泵（7天0.5微升/小时）。肩胛骨之间剃并用葡萄糖酸洗必泰溶液2％和异丙醇2％皮肤消毒。使2厘米的切口与肩胛骨之间手术刀来定位连接到导向导管的PE50导管。 切含有牙科用水泥用解剖刀的PE50导管的末端。在渗透泵连接到PE50导管，并在泵和导管连接处添加一些牙科水泥固定连接。 用缝合线4-0紧紧缝合皮肤。摆在笼子里的供热水垫动物回来。从异氟烷麻醉（约5分钟）观察动物唤醒迅速。 注意：手术需要Appro公司ximately 5至10分钟。 4.Aβo输液清醒和自由​​活动大鼠制备如先前报道的Aβo溶液（0.2微克/微升）。28,30允许Aβo动态和自发聚集在室温输液前1小时。 对输液泵安装两个10微升注射器。用5微升无菌蒸馏水填充注射器。切两PE50导管至约60厘米的长度用手术刀。填用1ml注射器和21G针头用无菌蒸馏水两个导管。 保持1ml的注射器在导管的一端，另一端连接到汉密尔顿注射器。卸下1ml的注射器和检查是否有导管内无气泡。 在PE50导管的末尾插入套管内部。使用无菌蒸馏水，填写连接到PE50导管内插管起来TO1微升汉密尔顿注射器。使用p气泡ulling回活塞高达2微升。 混合通过上下吹打使用粘附的最小的尖端的Aβo溶液。避免混合过程中形成气泡。拉回活塞高达3.5微升填充1.5微升Aβo解决内部套管。 做之前和在两个导管进行气泡后标记线。这可作为持续输注的检查点。输液，把附近的输液泵笼并删除其封面。 发生在一个依偎的老鼠，紧紧围绕刮其脖子上依偎的手臂固定大鼠头部。从两个导向套管除去虚设插管。插入先前在导向导管中制备的内部套管。验证它们是否完全插入并固定良好的引导套管的底部。 从依偎释放大鼠和放回它在笼子里，限制竞争的压力。密切监测，以确保导管不扭曲toget她和输液做得好。 打开输液泵。注入1微升Aβo溶液以0.1微升/分钟（10分钟）的速率。期间输液，检查从3.5微升注射器活塞移动至2.5微升，并且在这两个PE50导管气泡连续地移动。 留在原地内部插管输液接连5分钟，以允许Aβo解决方案有效扩散。把老鼠回到依偎去除内部套管和封顶引导套管，防止注入液回流。使用虚拟插管，只是套管的角度臂前停止。返回动物在笼子里。 在连续6天，每天天重复Aβo输液一次。断头安乐死的动物。