小鼠树突状细胞亚群的分离的高效和高产的方法

树突状细胞（DC）近四十年前被发现的“大星状（希腊树枝 ）细胞”淋巴器官¹中。许多研究表明，DC是，能有效地刺激幼稚T细胞²的唯一的抗原呈递细胞。这些细胞的主要功能是吸收和抗原的演示和高效的处理和这些装载到抗原呈递分子。在小鼠脾，DCS可以分离成浆和常规子集。该浆区议会由CD11c的低表达和高层次的B220和GR-1的表征。他们还积极为表面标志mPDCA1和分泌型我回应样受体9（TLR9）配体干扰素收费。传统的DC是很高的表面CD11c和MHC II类的表达。它们可以分成基于表型标记如CD4，CD8α，DEC205，CD的表面表达三种不同的亚群11b和树突细胞抑制性受体2（DCIR2由33D1抗体识别）的蛋白质^3,4。所述CD8α ^方位的DCs也称为CDC1，是阳性DEC205，但阴性骨髓标志物例如CD11b和33D1。该CD8α ^负片的DC，也叫CDC2，都积极为33D1，CD11b和CD4但缺乏DEC205。双重否定的子集（ 即阴性CD4和CD8α）是比较少见的，而且是负DEC205和33D1。它是最特征子集，并且可以是CD8α ^负片直流的较少分化形式。

在各个DC亚群的表型差异也延伸到他们的体内功能。所述CD8α ^负片 DC是高度吞噬细胞和被认为呈现外源抗原主要通过MHC II类到的CD4 T细胞^3。与此相反，CD8α ^方位 DC是专门用在MHC I类可溶性蛋白抗原的介绍在一种机制称为交叉呈递。交叉呈递的结果取决于这些树突⁵的激活状态，并且可以导致细胞毒性T细胞（CTL）或调节性T细胞^{6 2,7-}发展扩大。针对使用抗DEC205抗体介导的递送结果在很大程度上T细胞⁸的缺失抗原CD8α ^波什的DC，而从感染的细胞凋亡细胞的抗原的演示诱导强CTL反应^9。

除了识别肽抗原的，哺乳动物免疫系统已发展到识别脂质和糖脂抗原。这些抗原由CD1分子，其是存在于各种哺乳动物多个相关形式I类MHC样细胞表面蛋白呈现。在小鼠中，称为CD1d的高度保守的CD1分子的单一类型的负责糖脂抗原¹⁰的介绍。专业识别CD1d分子/糖脂复合物的T细胞群被称为不变NKT细胞（iNKT细胞）。这些细胞表达了与TCRβ链具有有限多样性¹¹配对的不变TCRα链组成的半不变的T细胞受体（TCR）。不像需要增殖和分化成为活化的效应T细胞的常规T细胞，iNKT细胞存在作为效应人口并开始糖脂给药¹²后迅速响应。生理相关脂质抗原呈递细胞的识别是一个活跃的研究领域，并且几种不同的细胞类型，例如B细胞，巨噬细胞和DC已经被建议来执行此功能。然而，有人证明DC的CD8α ^方位子集是主要的细胞介导的摄取和脂质抗原呈现给小鼠iNKT细胞¹³和CD8 T细胞¹⁴的糖脂介导的交叉敏化。

众所周知，在普通的淋巴和常见髓系祖细胞，其需要用于产生的pDC，CD8 ^方位和CD8 ^负片 DC亚群，快速FMS相关受体酪氨酸激酶3（FLT-3）的。 在体内的Flt-3配体（FLT-3L）给药，emigratFlt-3的表达来自骨髓祖细胞的离子增加，导致外周淋巴器官的增加的播种和它们的成熟的DC子代¹⁶的扩张。承诺B，T或NK细胞分化的途径中损失FLT-3的表达。因此，只有很少的改变是在这些细胞中时的Flt-3L给药观察到。在DC群相似膨胀荷瘤小鼠由B16黑素瘤细胞系分泌的鼠的Flt-3L，其中提供了用于提供的Flt-3L ^17,18的持续全身水平的简单和经济的方法的注入而产生的肿瘤中观察到。使用这种方法，我们已开发了基于对B16黑色素瘤细胞的分泌的Flt-3L刺激小鼠脾所有正常DC亚群的膨胀，从而大大增加了这些细胞可被分离用于随后的实验的收率植入一个协议。我们一贯发现，在10 – 皮下IM14天在FLT-3分泌肿瘤的种植，小鼠树突状明显富集脾肿大发展构成40 – 总脾细胞的60％。从这些脾脏，不同的DC亚群可以使用标准的高纯度雇用特定子集，表型标记市售的细胞纯化试剂盒进行隔离。