The recording of electroencephalogram (EEG) and electromyogram (EMG) in freely behaving mice is a critical step to correlate behavior and physiology with sleep and wakefulness. The experimental protocol described herein provides a cable-based system for acquiring EEG and EMG recordings in mice.
Recording of the epidural electroencephalogram (EEG) and electromyogram (EMG) in small animals, like mice and rats, has been pivotal to study the homeodynamics and circuitry of sleep-wake regulation. In many laboratories, a cable-based sleep recording system is used to monitor the EEG and EMG in freely behaving mice in combination with computer software for automatic scoring of the vigilance states on the basis of power spectrum analysis of EEG data. A description of this system is detailed herein. Steel screws are implanted over the frontal cortical area and the parietal area of 1 hemisphere for monitoring EEG signals. In addition, EMG activity is monitored by the bilateral placement of wires in both neck muscles. Non-rapid eye movement (Non-REM; NREM) sleep is characterized by large, slow brain waves with delta activity below 4 Hz in the EEG, whereas a shift from low-frequency delta activity to a rapid low-voltage EEG in the theta range between 6 and 10 Hz can be observed at the transition from NREM to REM sleep. By contrast, wakefulness is identified by low- to moderate-voltage brain waves in the EEG trace and significant EMG activity.
Технический прогресс часто осаждают квантовые скачки в понимании нейробиологических процессов. Например, открытие Ганса Бергера в 1929 году, что электрические потенциалы, записанные с человеческого головы взял форму синусоидальных волн, частота которых была непосредственно связана с уровнем бодрствования субъекта, привело к быстрому прогрессу в понимании сон-бодрствование регулирование, в обоих животных и человека, так. 1. Для этого дня electroencephlogram (ЭЭГ), в сочетании с электромиограмме (ЭМГ), то есть., электрическая активность производится скелетных мышц, представляет собой данные "костяк" из почти каждый экспериментальные и клинические Оценка, которая стремится соотнести поведение и физиологию с деятельностью корковых нейронов в себя животных, включая человека. В большинстве основной научно-исследовательских лабораторий сна эти ЭЭГ выполняется с помощью кабельной системы на основе (рисунок 1), в котором приобрела Dата подвергается офф-лайн, чтобы узор и спектрального анализа [например., применяя быстрого преобразования Фурье (БПФ) алгоритм], чтобы определить, бдительность состояние снимаемого объекта. 2, 3 Сон состоит из движения быстрого глаз (REM) и не-REM (NREM) сон. Быстрый сон характеризуется быстрым низкого напряжения ЭЭГ, случайного движения глаз, мышц и атонии, состояние, при котором мышцы эффективно парализован. Медленного сна также известен как парадоксального сна, потому что активность мозга напоминает бодрствования, в то время как тело в основном отключен от головного мозга и, как представляется, в глубокий сон. Напротив, моторные нейроны стимулируются во время NREM сна, но нет движения глаз. Человек NREM сна можно разделить на 4 этапа, в результате чего 4-й стадии называется сон или медленного сна и определенных больших медленных волн мозга с дельта активности между 0,5 – 4 Гц в ЭЭГ. С другой стороны, разделение между фаз NREM сна в небольших животных, как крысы Ай мышей, не было установлено, в основном потому, что они не имеют длинные периоды консолидированной сна, как показано на человека.
На протяжении многих лет, и на основе интерпретации ЭЭГ, несколько моделей регулирования сон-бодрствование, и автоматических и гуморального основе, были предложены. Нервная и клеточная основа необходимости для сна или, в качестве альтернативы, "диск сна", остается нерешенным, но был позиционироваться как гомеостатического давления, который строит в период бодрствования и сна, рассеиваемой. Одна теория состоит в том, что эндогенные факторы накапливаются somnogenic во время бодрствования, и что их постепенное накопление является фундаментом для сна гомеостатического давления. В то время как первое официальное предположение, что сон регулируется гуморальными факторами была зачислена на работу Розенбаум, опубликованной в 1892 4, это было Ишимори 5, 6 и Pieron 7, которые независимо друг от друга, и более 100 лет назад, показали существование сна содействия химических веществ, Оба исследователя предложил, а на самом деле оказалось, что Hypnogenic вещества или 'hypnotoxins "присутствовали в спинномозговой жидкости (ликвора) из лишенных сна собак. 8 За последнее столетие несколько дополнительных предполагаемых Hypnogenic веществ, вовлеченных в гомеостатической процесса сна были определены (для обзора см. 9), в том числе простагландинов (PG) D 2, 10, 11 цитокинов аденозина, 12 анандамидом, 13 и пептида уротензин II. 14
Экспериментальная работа по Экономо 15, 16, Моруцци и Magoun 17 и других в начале и середине 20-го века, были выработаны выводы, которые вдохновили схемы на основе теории сна и бодрствования и, в определенной степени, омрачено тогдашних гуморальный теории спать. На сегодняшний день, несколько "моделей" схема были предложены, каждый по данным записей различного качества и количества (для обзора см. 18). Одна модельНапример, предлагается, чтобы медленного сна генерируется через аденозин-опосредованного ингибирования высвобождения ацетилхолина из холинергических нейронов в базальном переднем мозге, область основном consisiting ядра горизонтальной конечности диагональной полосы Брока и веществе inominata. 19 Еще один популярный модель регулирования сна / бодрствования описывает механизм переключения флип-флоп на основе взаимовыгодного тормозных взаимодействий между снотворных нейронов в вентролатеральной преоптическом и следа вызывающие нейронов в гипоталамусе и ствола мозга. 18, 20, 21 Кроме того, для переключения в и из сна, подобная взаимно ингибирующий взаимодействие было предложено областях в стволе головного мозга, то есть брюшной около водопровода головного мозга серый, боковая мостовой покрышку, и sublaterodorsal ядро. 22 В совокупности, эти модели оказались ценным эвристика и предоставляемые важные толковании рамки для исследований в области исследований сна; Тем не менее, выт полное понимание молекулярных механизмов и схем, регулирующих цикл сон-бодрствование потребует более полное знание его компонентов. Система для полиграфической записи подробно ниже, должны помочь в достижении этой цели.
Этот протокол описывает настройку для ЭЭГ / ЭМГ записей, что позволяет оценить сна и бодрствования под низким уровнем шума, экономически эффективных и высокой пропускной условиях. Из-за небольшого размера электрода головки ЭЭГ / ЭМГ, эта система может быть объединена с другими импланта…
The authors have nothing to disclose.
We thank Dr. Larry D. Frye for editorial help with this manuscript. This work was supported by Japan Society for the Promotion of Science Grants-in-Aid for Scientific Research 24300129 (to M.L.), 25890005 (to Y.O.) and 26640025 (to Y.T.), the National Agriculture and Food Research Organization (to Y.U.), the World Premier International Research Center Initiative (WPI) from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science, and Technology (to Y.O., Y.T., Y.U. and M.L.) and the Nestlé Nutrition Council, Japan (to M.L.).
4-pin header | Hirose | A3B-4PA-2DSA(71) | |
Ampicillin | Meiji Seika | N/A | |
Analog-to-digital converter | Contec | AD16-16U(PCIEV) | |
Caffeine | Sigma | C0750 | |
Carbide cutter | Minitor | B1055 | |
Crimp housing | Hirose | DF11-4DS-2C | |
Crimp socket | Hirose | DF11-30SC | |
Dental cement (Toughron Rebase) | Miki Chemical Product | N/A | |
Epoxy adhesive | Konishi | #16351 | |
FFC/FPC connector | Honda Tsushin Kogyo | FFC-10BMEP1(B) | |
Flat cable | Hitachi Cable | 20528-ST LF | |
Instant glue (Aron Alpha A) | Toagosei | N/A | |
Meloxicam | Boehringer Ingelheim | N/A | |
Pentobarbital | Kyoritsu Seiyaku | N/A | |
Signal amplifier | Biotex | N/A | |
Sleep recording chamber | APL | N/A | |
SleepSign software | Kissei Comtec | N/A | for EEG/EMG recording/analysis |
Slip ring | Biotex | N/A | |
Stainless steel screw | Yamazaki | N/A | φ1.0×2.0 |
Stainless steel wire | Cooner Wire | AS633 |