常温<em>离体</em>肾脏的灌注肾的移植保护移植前

注意：研究方案的示意性概述示于图1。 图1.研究方案。本研究的常温体外肾脏灌注协议是基于一个猪的模型。的肾移植物的血管外科解剖并用500ml组氨酸 – 色氨酸酮戊二酸（HTK）冲洗后，将移植物可以检索。冷藏后（SCS）3小时，肾脏移植是常温灌注离体 （NEVKP）多个小时，直到指定的移植。 所有动物人文关怀符合'“实验动物管理的原则'''实验动物的护理指南'由美国国立卫生研究院公布制定的全国协会医学研究和”，加拿大安大略省。在多伦多综合研究所的动物护理委员会批准的所有研究。 1.动物在这个协议 – （33千克27）使用雄性约克夏猪。 2.器官检索术前程序房子的雄性约克夏猪的研究设施为至少一周，以减少他们的压力水平。快猪诱导麻醉前至少6小时。 通过注射氯胺酮（25毫克/千克），阿托品（0.04毫克/千克），和咪达唑仑（0.15毫克/千克）的肌内引发猪麻醉。接着，从壳体设施到手术室（OR）运输的动物。 将猪上或桌子仰卧位。让它呼吸2升氧气与异氟醚5％油然而生。松弛后，暴露声带与喉镜，用2％利多卡因将它们喷雾到防止由插管痉挛。自动对焦之三插管6.5毫米的管道，阻止与3袖口 – 5毫升空气。 注：Capnometry揭示了气管插管的正确位置。 降低了异氟醚气至2.5％。呼吸机设置为14 – 16次呼吸/分钟，潮气量到10 – 24毫升/公斤体重。密切监测猪。心脏速率和氧饱和度由脉搏血氧被记录下来。 在无菌条件下，引入一个8.5大一×10cm的导管插入在Seldinger技术13的颈静脉。因此，用针穿刺静脉血管。引入线后，更换导管针。消除电线固定导管到皮肤上。管理将200ml每小时乳酸林格氏液在整个手术。 手术过程继消毒和覆盖手术区域，执行从xyphoid正中切口，以耻骨联合。为了改善曝光，延长的手术方法左外侧切口。涵盖了大，小肠道用毛巾并把它们放置到左侧向右侧肾脏最佳接入。 分离从腹主动脉的下腔静脉（IVC）。结扎主动脉分支从主动脉的背面。 完成后主动脉夹层到后面，绕过主动脉颅一个绑带，以肾分支机构。此外，把两个连写颅髂分叉。将左肾动脉周围领带。 自由右肾从其附着的组织。解剖肾静脉，动脉，输尿管。 打开隔膜和管理每公斤体重捐助1000 IU肝素到心脏。对于DCD模式，心内后3分钟全身肝素注射40 MVAL氯化钾诱发心脏骤停。心脏骤停的价值作为热缺血的起点。 同时，收集血液，连接的CPDA袋（柠檬酸盐，磷酸盐，葡萄糖，一个线denosine），以引入到左上颈静脉导管。执行软旋（1500 XG无制动）。取出血浆和无菌条件下捉鬼外套（生物安全柜II级）和存储红细胞输血。 导管插入与器官平齐线以上髂骨分叉的主动脉。扎连字在主动脉和左肾动脉。 同花顺组氨酸，色氨酸酮戊二酸（HTK）解决方案的肾以100厘米水柱2 O的压力夹紧胸部静脉和经颈静脉导管采集血液。下面切开肾静脉腹腔静脉，以确保肾脏的最佳平齐。 右肾的完整冲洗后，检索与主动脉的其中一部分的移植物。切开肾静脉和离开输尿管长。 移植肾的灌注表背准备无组织粘连肾脏。关闭主动脉颅部分用领带第二导管插入一个1/4“×3/8”减速器的下部。摘下领带小动脉分支从主动脉的到来。 导管插入肾静脉与1/4“X 3/8”直接减速。插管具有8大一输尿管鼻饲管。 置于冰上肾脏直到NEVKP的开始。 3.常温体外灌注肾（NEVKP） 灌注电路的研制灌注电路由新生儿体外循环设备（ 图2）。 所述灌注回路的图2的示意图。该电路由新生儿体外循环技术。该灌注溶液被收集于静脉储血。离心泵推动该溶液进氧合器，在那里它富含氧气并加热至37℃。 PA后通过肾动脉进入肾脏80毫米汞柱 – ssing动脉泡沫过滤器，灌注液被驱动用的60的压力。静脉流出（0 – 3毫米汞柱）导致灌注液放回静脉储血。注射器和输液泵确保与另外的化合物的供应量。尿液收集在整个灌注。灌注回路特性被连续记录。每小时静脉和动脉血液气体样品，和肾损伤标志物进行了分析。 连接定制电路灌注到肾脏灌注设备。 油管连接到静脉水库和氧合。动脉线管路连接到人工肺的动脉流出并定位在其支架气泡过滤器。连接吹扫管线。静脉线管连接到静脉水库的入口。 对于灌注过程中的评估，插上温度探头插入动脉插座，连接流量计和BUbble传感器到动脉线路管道，和连接压力线。连接的水位传感器。 连接静脉和动脉采样线的静脉和动脉取样口。 定位器官腔上的立场，并通过预制孔介绍静脉和动脉管。修复管道表和室牢固。 插入吸入管导入滚子泵和一个端部的位置进入腔室以收集液体。 氧管路连接到含95％ 的 O 2/5％CO 2和氧合气体罐。加热单元管路连接到氧合器和器官腔。 使用管夹关闭静脉和动脉流出线。应用另一种管夹的静脉储血的流出。 准备灌注的解决方案，额外的补充，并灌注电路用一个输液泵替换所产生的尿液乳酸林格氏液。 用一个注射泵施用营养（葡萄糖0.5毫升/小时，氨基酸为0.5ml /小时）和胰岛素（5单位/小时）进入静脉水库。利用第二注射器泵输注血管扩张剂（维拉帕米，0.25毫克/小时）直接进入动脉管路。 填写静脉水库灌注液。因此，倾林格氏乳酸（175毫升）中，STEEN溶液（200毫升），DRO（27毫升），肝素（1000 IU），碳酸氢钠以调节pH，和葡萄糖酸钙进入静脉水库。最后，加入洗净的红细胞（125毫升）中。 切换心脏人工心肺机（HLM）上。激活的压力，温度，电平，和气泡传感器面板。激活的数据管理系统（DMS），以在整个灌注记录数据。激活所述加热单元的地暖灌注溶液和器官腔至37℃。打开氧气供应。 打开管夹静脉水库后面并释放centrifug人泵头空气完全。启动离心泵以1000rpm和使溶液在整个电路推进。夹紧管道绕过动脉过滤器，并从动脉过滤器释放空气。 零压力线。激活的注射器和输液泵。 移植肾灌注从冰中取出肾脏，并在器官腔定位在床上用品的肾脏。将尿导管进入尿液收集器。在确保静脉和动脉导管是自由的空气，堵塞连接到管道。 关闭动脉和静脉管道线之间的快捷方式。通过调节离心泵的速度上设置的动脉压至75毫米汞柱。 记录的压力，动脉流量，温度，和存在气泡的连续与DMS。整个灌注仔细观察值。在灌注，血液泄漏到室是山口经由吸入管放回静脉储血反恐执行。 记录尿液生成量。静脉采集血液和尿液样本小时。监视灌注通过采取静脉和动脉血液气体样品和天冬氨酸转氨酶（AST），和乳酸分析。 在灌注结束时，从肾动脉断开管和静脉，冲洗用冷HTK接枝，并在冰上储存在无菌风琴袋直到移植。