Oprichting van een klinisch relevante<em> Ex Vivo</em> Mock Cataract Surgery model voor het onderzoeken van Epithelial Wound Repair in een Inheems Microenvironment

De klinisch significante, mock staaroperatie, ex vivo epitheliale wondgenezing model beschreven is ontwikkeld om een instrument voor het onderzoeken van de mechanismen die de reparatie van epitheelweefsels regelen in respons op een verwonding verschaffen. Belangrijkste voordelen die werden nagestreefd bij het ​​creëren van deze model inbegrepen 1) het verschaffen van omstandigheden die nauw gerepliceerd in vivo respons op verwonding in een kweek, 2) gemak van het moduleren van de regulerende elementen van de reparatie, en 3) het vermogen om het beeld reparatieproces in zijn geheel, in real time. De uitdaging was daarom een ​​cultuurmodel waarin mogelijke was studeren creëren en manipuleren epitheliale wondheling in natieve micro de cellen. De beschikbaarheid van deze wond-repair model opent nieuwe mogelijkheden voor de identificatie van de endogene signalen signalen van matrixeiwitten, cytokines en chemokines dat het reparatieproces te regelen. Bovendien is het model geschikt voor het onderzoeken hoe eenn epitheel kan bewegen als collectief vel opnieuw epithelium aan het wondgebied ^2,3, en voor het bepalen van het geslacht van mesenchymale cellen leider aan de wondrand die functioneren richten van de collectieve migratie van epitheel ⁴ gewonden. Dit model verschaft een platform waarmee therapeutische doeltreffende wondgenezing kan bevorderen en de afwijkende wondheling ⁵ identificeren.

Er zijn al een aantal beschikbare wond-reparatie modellen, zowel in de cultuur en in vivo, waarin het grootste deel van wat bekend is over de wond reparatieproces vandaag hebben geleverd. In dierlijke modellen letsel, zoals cornea ^6-12 en ^13-17 huid, is er de mogelijkheid om de reactie van het weefsel te bestuderen verwonding in het kader van de reparatie mediatoren die betrokken kan zijn bij het ​​proces, en de bijdragen van de vaatstelsel en het zenuwstelsel. Er zijn echter beperkingen aan het manipuleren van de experimentale aandoeningen in vivo, en het is nog niet mogelijk imaging studies verrichten van reparaties respons in vivo continu in de tijd. Daarentegen zijn de meeste in vitro opgewikkelde reparatie cultuurmodellen, zoals scratch wond, kan gemakkelijk worden gemanipuleerd en tijd gevolgd maar missen de omgevingscontext bestuderen wondheling in het in vivo weefsel. Terwijl ex vivo modellen bieden het voordeel van het bestuderen van de schade reparatieproces continu in de tijd in verband met micro de cellen gekoppeld aan het vermogen om de moleculaire regulatoren van de reparatie te moduleren op enig tijdstip in het proces, zijn er weinig modellen die deze passen parameters.

Hier wordt beschreven een werkwijze om zeer reproduceerbare ex vivo epitheliale wondgenezing culturen die reactie van een epitheliaal weefsel van een fysiologische verwonding reproduceren genereren. Met behulp van de kippenembryo lens als een tissue bron, een ex vivo mock cataract operatie wordt uitgevoerd. De lens is een ideale weefsel te gebruiken voor deze studies aangezien het self-contained binnen een dikke basaal membraan capsule, avasculaire, niet geïnnerveerd, en vrij van eventuele bijbehorende stroma ^18,19. In de menselijke ziekte, cataractchirurgie richt gezichtsverlies vanwege vertroebeling van de lens, en omvat het verwijderen van de lensvezel celmassa, die het grootste deel van de lens omvat. Na cataractchirurgie zicht wordt hersteld door het inbrengen van een kunstmatige intraoculaire lens. De cataract chirurgische procedure door het verwijderen van vezels cellen induceert een verwonding respons in de aangrenzende lensepitheel, die reageert door re-epithelisatie van het achterste gebied van het lenskapsel dat bezet was door de vezel cellen. In cataract chirurgie, zoals in de meeste wondheling respons treedt er soms een afwijkende fibrotische resultaat van de wondgenezingsreactie, op de opkomst van myofibroblasten, die bekend is in het lens Posterior Capsule Ondoorzichtig ^20-22. Om de staaroperatie wondgenezing model te genereren, is een staaroperatie procedure nagebootst in lenzen verwijderd uit het kippenembryo oog op een fysiologische letsel te produceren. Microchirurgische verwijdering van lensvezel cellen resulteert in een zeer constante cirkelvormige wond midden van de lens epitheelcellen. Deze cel populatie blijft stevig aan de lens basaal membraan capsule en wordt verwond door de chirurgische procedure. De epitheliale cellen migreren naar de Denuded gebied van de endogene basale membraan naar de wond, onder leiding van een populatie van vimentine rijk mesenchymale cellen in het reparatieproces zogenaamde leader cellen ¹ genezen. Met dit model kunnen de respons van een epithelium om schade eenvoudig kunnen worden gevisualiseerd gevolgd met de tijd in de context van de micro cellen. De cellen kunnen worden geraadpleegd door wijziging van de expressie of activatie van moleculen verwachting een rol spelen in wondheling. Een krachtige eigenschap van this model is de mogelijkheid te isoleren en studiemigratie-specifieke veranderingen in het kader van wondgenezing. Het vermogen om grote aantallen voldoen ex vivo kweken wondgenezende leeftijd bereiden studies is een ander voordeel van dit model. Zo, dit modelsysteem biedt een unieke gelegenheid om te plagen elkaar mechanismen van wondheling en test therapeutica voor hun effect op de wondgenezing proces. De ex vivo mock staaroperatie model zal naar verwachting brede toepasbaarheid hebben, die een cruciale bron voor het bestuderen van mechanismen van letsel reparatie.