JoVE Journal > Immunology and Infection
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Abstract
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Immunologie et infection

Tratamento de produtos de plaquetas com riboflavina e luz UV: Eficácia Contra alta Titer contaminação bacteriana

Published: August 24, 2015
doi:
10.3791/52820
, , , ,
1Terumo BCT,Scientific Affairs

Summary

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

Abstract

Contaminação de unidades de plaquetas por bactérias tem sido reconhecida como um risco significativo de transfusão, devido às suas condições de armazenamento pós-doação. Os produtos são rotineiramente armazenadas a 22 ° C num agitador de agitação, uma condição que pode promover o crescimento bacteriano. Embora o número total de bactérias que se acredita ser introduzida num produto de plaquetas é extremamente baixa, estas bactérias podem multiplicar-se a um título muito elevado antes da transfusão, potencialmente resultando em efeitos adversos graves. O objectivo deste estudo foi o de avaliar um processo de redução de agentes patogénicos riboflavina base contra um painel de bactérias que foram identificadas como contaminantes comuns de produtos de plaquetas. Este painel incluiu os seguintes organismos: S. epidermidis, S. aureus, S. mitis, S. pyogenes, S. marcescens, Y. enterocolitica, B. neotomae, B. cereus, E. coli, P. aeruginosa e K. pneumoniae. Cada unidade de plaquetas foi inoculado com uma alta carga bacteriana e as amostras foram removidas bOTH antes e após o tratamento. Um ensaio de formação de colónias, usando um esquema de diluição ponto final, foi usado para determinar os pré-tratamento e pós-tratamento títulos bacterianos. Redução log foi calculada subtraindo-se o título pós-tratamento do título de pré-tratamento. Foram observadas as seguintes reduções de log: S. epidermidis 4,7 log (99,998%), S. aureus 4,8 log (99,998%), S. mitis 3,7 log (99,98%), S. pyogenes 2,6 log (99,7%), S. marcescens 4,0 log (99,99%), Y. enterocolitica 3.3 log (99,95%), B. neotomae 5,4 log (99,9996%), B. cereus 2,6 log (99,7%), E. coli ≥5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4,7 log (99,998%) e K . pneumoniae 2,8 log (99,8%). Os resultados deste estudo sugerem que o processo pode ajudar a diminuir o risco de eventos adversos graves transfusão associados à contaminação bacteriana.

Introduction

A transfusão de plaquetas, plasma, glóbulos vermelhos embalados e produtos de sangue total desempenhar um papel importante na medicina moderna e pode ser utilizada para tratar várias condições médicas, substituir fluidos vitais e, finalmente, salvar vidas. As plaquetas são um produto celular que, ou são isoladas a partir de sangue total, e reunido em uma dose ou transfusable são recolhidos através do processo de aférese plaquetária. O principal papel de plaquetas no corpo é para parar o sangramento em locais de feridas e para ajudar a manter a hemostasia. Pacientes que sofrem de uma contagem de células de plaquetas baixa (trombocitopenia) são suscetíveis a eventos hemorrágicos espontâneos e são transfundidos com plaquetas de trazer sua contagem de células de plaquetas para trás em um intervalo normal. Plaquetas recolhidos são armazenados durante um período máximo de 5-7 dias e são armazenadas a 22 ± 2 ° C enquanto sob agitação constante.

Apesar de as propriedades de transfusões de plaquetas salvar a vida continua a haver um pequeno risco para receptores de transfusão devido a contamination desses produtos por parasitas, bactérias e vírus 11. A implementação de teste de ácido nucleico virai (NAT) diminuiu de forma significativa o risco de transmissão viral de sangue suportados agentes principais, tais como o vírus da hepatite C (HCV), vírus da hepatite B (HBV) e o vírus da imuno-deficiência humana (HIV) 5. Uma publicação recente do Canadian Blood Services estima o risco residual para esses agentes a ser de 1 por 8.000.000 doações para HIV, 1 por 6,7 milhões de doações para HCV e 1 por 1.700.000 doações para HBV 15.

Embora as bactérias normalmente angariar menos atenção do público em geral, a frequência de contaminação bacteriana em produtos de plaquetas foi estimado para ser tão alta quanto 1: 1000 7 e porque milhões de produtos de plaquetas são transfundidos cada ano muitos destinatários estão expostos a potenciais complicações fatais como sepse 6. A investigação sugere que a carga bacteriana no momentode contaminação é baixo, <100 unidades formadoras de colónias (UFC) / produto 2,16, no entanto, o ambiente rico em nutrientes e temperatura ambiente de armazenamento permite que bactérias contaminem a proliferar a perigosamente altos títulos antes da transfusão. Atualmente, os métodos só aprovados disponíveis para evitar que os produtos contaminados por bactérias de chegar a um destinatário de plaquetas é através do uso de sistemas de cultura de base e ponto rápido dos testes de cuidado. Resumidamente, para os sistemas de cultura de produtos à base de plaquetas são armazenadas em um agitador a 22 ° C durante 12-24 h, para permitir a proliferação de bactérias no produto, no qual uma amostra de 4-8 mL é retirada a partir do produto de plaquetas e inoculados num frasco contendo meio nutriente. O frasco é colocado num instrumento que monitora o frasco para o crescimento bacteriano. Se o instrumento detecta o crescimento bacteriano dentro da garrafa que é apanhado e a unidade de plaquetas correspondente é descartado. Enquanto este processo é razoavelmente bem sucedida na detecção de gro rápidoasa organismos, muitas das espécies de crescimento lento não crescem a um título suficientemente elevado para ser detectado, criando, assim, o potencial para as unidades de falsos negativos para ser lançado para a transfusão 7,12,14,16,22. Ao contrário dos sistemas de detecção de cultura com base, ponto de teste rápido cuidados é tipicamente realizada no final do período de armazenagem de plaquetas quando a carga bacteriana tem aumentado significativamente. Os títulos mais elevados são necessários dado que o ponto de cuidados testes são menos sensíveis do que os sistemas de cultura de base, e apenas detectar com fiabilidade, uma vez que as bactérias atingir um título ≥1 x 10 3 CFU / ml 17. No entanto, tais testes podem fornecer resultados dentro de 1 hora da amostragem. A variabilidade no desempenho destes ensaios levaram ao lançamento de um produto falso negativo, causando uma reacção séptico fatal no recipiente 9.

Uma forma alternativa para combater o problema da contaminação bacteriana de produtos de plaquetas é através do uso de rotina de um agente patogénico Proc reduçãoess que podem inactivar bactérias contaminantes em vez de tentar detectá-los. Usando riboflavina como um fotossensibilizador, em combinação com luz UV, tem demonstrado reduzir a infecciosidade de uma vasta gama de contaminantes transmitidas pelo sangue patogénicos, incluindo bactérias 3,4,8,10,19-21 .A utilização de riboflavina e UV luz para a redução dos organismos patogénicos é não-tóxico e não-mutagênico, e componentes tratados com luz UV e riboflavina foram mostrados para ser seguro para receptores de transfusão, bem como para aqueles que manipulam produtos derivados de sangue 18. Resumidamente, as moléculas de riboflavina pode associar com os ácidos nucleicos (ADN e ARN) de bactérias, parasitas, vírus e qualquer célula nucleada (por exemplo, células brancas do sangue). A exposição à luz UV ativa riboflavina, causando uma alteração química de grupos funcionais dos ácidos nucleicos (principalmente bases de guanina), impedindo assim a replicação e / ou a transcrição dos ácidos nucleicos e deixando o organismo inactivado 13. Anucleadas como placae permite que as células vermelhas do sangue não são afectados pela química de riboflavina, devido à falta de ácido nucleico.

Trabalhos anteriores com a tecnologia riboflavina e luz UV avaliaram um grupo seleto de bactérias usando um desenho experimental destina-se a imitar um produto de plaquetas contaminadas com uma carga bacteriana clinicamente relevante (<20 UFC / produto) 8. O objetivo deste estudo foi avaliar o processo de riboflavina e luz UV contra a contaminação bacteriana título elevado (> 1,0 x 10 5 UFC / ml) em produtos de plaquetas tratadas no plasma, a fim medir a capacidade de redução bacteriana total do sistema. Com base em dados recolhidos a partir de estudos de hemovigilância 1, um painel de comumente ocorrem organismos gram positivas negativas e gram foi selecionado para avaliação neste estudo e incluiu as seguintes espécies: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Streptococcus pyogenes, Serratia marcescens, Yersinia enterocolitica ,Neotomae Brucella, Bacillus cereus (forma vegetativa), Esherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae. Todos os organismos, exceto B. cereus, foram obtidas da ATCC e foi colocada uma prioridade na obtenção de estirpes bacterianas que foram identificados como sendo isolado a partir de componentes do sangue. O B. cereus testados neste estudo é uma estirpe clínica isolada internamente a partir de um produto de plaquetas contaminado.

Protocol

1. Preparação: suspensão de bactérias A partir de uma placa de cultura de estrias, inocular assepticamente uma única colónia em um frasco de 250 ml esterilizado, contendo 100 ml do meio de crescimento apropriado (Tabela 1) por meio de ansa de inoculação estéril. Colocar o frasco dentro de um incubador com agitação orbital a as condições adequadas (Tabela 1) durante 1-2 dias, verificando-se o crescimento periodicamente. Defina a velocidade do agitador a 140 RPM. Transferir assepticamente a suspensão bacteriana em dois tubos de 50 ml estéreis cónicos e os tubos de centrífuga a 3000 xg durante 20 min a 23 ° C. Aspirar o sobrenadante e ressuspender cada pellet bacteriano com 15 ml de água de peptona estéril. Vortex conforme necessário. Combine a cultura de bactérias suspensas em um tubo / container. Titule a cultura de reserva em triplicado por seção 4 para determinar o título cultura estoque. Leve à geladeira por até 2 semanas a 477; 2 ° C até ser necessário. Re-título na cultura no momento da utilização, ver passo 4.8. 2. Preparação de plaquetas produto: Recolha um produto de plaquetas humano aférese padrão em um banco de sangue credenciada. O produto de plaquetas deve atender às seguintes especificações de coleta: 90-360 ml de volume e 0,8 -3,8 x 10 6 plaquetas / ul concentração. Certifique-se de que o produto de plaquetas tem descansado para um mínimo de 2 horas antes do processamento para redução de patógenos. Armazenamento dos produtos a 22 ± 2 ° C num incubador de plaquetas sem agitação durante estes 2 h. Depois de duas horas de garantir que o produto de plaquetas é agitada a 22 ± 2 ° C num incubador de plaquetas. Use o produto por até 22 horas após coleta. Utilizando uma seringa de 3 ml de remover uma amostra de 2 mL para medir a 22C do produto em plaquetas de pH. Use um analisador de gases de sangue para garantir que o produto tem um pH> 6.6. Utilizar a mesma amostra para medir a concentração de plaquetas de o produto de plaquetas usando um analisador hematológico. Verifique se o produto atende a 0.80-3.8 x 10 6 plaquetas / ul exigência concentração coleção. Visualmente avaliar o redemoinho do produto plaquetas. Se o produto tem um "0" homogeneizar o produto vai ser descartado. Mantenha o saco de plaquetas-se sob uma fonte de luz branca direta e aperte o saco de plaquetas brevemente. Visualmente observar o padrão de roda da amostra de plaquetas. Pontuação do produto utilizando a seguinte escala. NOTA: 2 – redemoinho Positivo: roda inhomogeneity visível ao longo de todo o saco com forte contraste. 1 – Intermediate Swirl: Alguns inhomogeneity visível, mas apenas em alguns lugares e com pouco contraste. 0 – redemoinho negativo: homogeneidade Turbid restante antes e depois apertar o saco de plaquetas Processo 3. A riboflavina e UV Light: TranSfer o produto de plaquetas para um riboflavina e UV iluminação de luz e saco de armazenamento utilizando um dispositivo de tubo de encaixe estéril. Após a transferência remover o saco de recolha de unidade de plaquetas vazio usando um aferidor de tubulação e descartar o saco vazio como resíduo bioinfectante. Remover uma bolsa de 35 ml de 500 mM riboflavina solução estoque de sua luz invólucro exterior de protecção. Doca estéril o kit de riboflavina para a linha de entrada do tratamento e armazenamento de saco. Deixar o conteúdo para drenar para dentro da unidade de plaquetas. Pendure a bolsa / tratamento e armazenagem saco riboflavina definido a partir da bolsa riboflavina e expressar suavemente ar residual para fora do tratamento e armazenamento de saco e para o saco de riboflavina. Assegurar uma pequena quantidade de produto de plaquetas também é expresso na bolsa de riboflavina para enxaguar qualquer riboflavina residual no produto de plaquetas. Permitir que a solução riboflavina e plaquetas drenar de volta para o tratamento e armazenamento de saco e, em seguida, apertar a linha de entrada. Retire o saco vazio nos riboflavinaing um aferidor de tubulação e descartar o saco vazio como resíduo bioinfectante. Doca estéril uma "linha 6 tubos com conector de seringa fêmea para a linha de entrada da iluminação e saco de armazenamento. Anexar uma seringa de 10 ml (remover o êmbolo) na conexão seringa feminino. Adicionar assepticamente 5 ml de bactérias de ações para o corpo da seringa através de uma pipeta. Abrir o grampo na linha de entrada e permitir que a bactéria seja drenado para o produto de plaquetas. Lavar o corpo da seringa, permitindo que algum produto de plaquetas a fluir de volta para o corpo da seringa de 10 ml. Remover o tambor da seringa de 10 ml. Assepticamente anexar uma seringa de 30 mL e lavar a porta de entrada de um mínimo de duas vezes para assegurar que as bactérias banco é misturado no produto de plaquetas. Depois que o produto é bem misturado, utilizar uma seringa limpa 5-10 ml e remover uma amostra de 2 ml pré-tratamento. Utilizando uma nova seringa assegurar que o ar introduzido a partir do passo a inoculação ou amostragem passo é removido. Titular a amostra pré-tratamento por seção 4. Remova a linha de entrada do tratamento e armazenamento de saco e pesar o produto. Colocar o produto para o iluminador e seguir os comandos de ecrã para começar um tratamento de plaquetas padrão. Digite na Operator ID. Seguros e montar o saco para a placa iluminador. Digite o ID da amostra para o Iluminador usando o leitor de código de barras ou o teclado de entrada manual. Tipo de produto Scan. Fechar o grampo de quartzo. O dispositivo de iluminação irá entregar automaticamente 6,24 J / ml de energia. O tempo de tratamento típico demora 5-10 min. Após o tratamento doca estéril uma "linha 6 tubos com conector de seringa fêmea para a linha ampola da amostra de tratamento e saco de armazenamento. Verifique se o produto é bem misturado e em seguida, anexar uma seringa de 5 ml e remover um 2 ml da amostra de pós-tratamento. Titule a pós-tratamento samsoas por seção 4. 4. bacteriana Titer Estimar o título das amostras de pré-tratamento e pós-tratamento e preparar o número apropriado de tubos de 5 ml de diluição necessário para efectuar uma diluição em série ponto final de cada amostra. Assepticamente encher os tubos necessários com 1,8 ml de água peptonada. Titer cada amostra utilizando um regime de diluição em série de 10 vezes. Transferir assepticamente 0,2 ml da amostra não diluída para o primeiro tubo de diluição (10 -1). Vortex este tubo de diluição e de transferência de 0,2 ml para o próximo tubo de diluição. Continuar a diluição em série através do número necessário de diluições. Transferência assepticamente 100 ul de cada diluição a ser revestida a uma placa de agar apropriado (Tabela 1). Usando um espalhador de células estéril, distribuir uniformemente a amostra em cada placa de ágar. Inverter e incubar as placas nas condições apropriadas ( <strong> Tabela 1) por 1-2 dias de testes para o crescimento periodicamente. Contagem de placas com 30-300 colônias. As placas contendo mais de 300 colônias são considerados demasiado numerosos para contar (TnTc). As placas que continham menos de 30 colónias são considerados abaixo do limite de quantificação (LOQ). Calcula-se a título de cada amostra de teste e gravar os resultados como CFU / ml. Utilize a seguinte equação para calcular CFU / ml: Se não houver colônias na placa de diluição menor, use a seguinte equação para calcular o limite de detecção (LOD): e Onde: N = número de partículas menor (CFU) em produto que pode ser detectado com segurança. P = probabilidade de que um microorganismo será não detectado; para 95% de confiança de detecção de um microrganismo, P = 0,05. V = volume total do produto em ml v = volume banhado (ml) x nível de diluição de placa Para controlo negativo, placa 0,5 ml de peptona a água que é utilizado para as diluições em série em cada uma das duas placas de agar. Utilizar o mesmo tipo de placa como as amostras a serem testadas. Inverter e incubar a placa em condições adequadas por 1-2 dias a verificação de crescimento periodicamente. Se o crescimento é observado em qualquer placa de ágar, a garrafa de água peptonada usado deve ser eliminado; os resultados do estudo também são invalidados. Para Controlo Positivo, re-titulação da cultura de reserva de bactéria que foi usado. Inverter e incubar as placas com as condições adequadas para 1-2 dias para verificar o crescimento periodicamente. O título deve ser de ± 1,0 log ufc / ml do registroed título de estoque (ver secção 1.5) para o estudo seja considerado válido.

Representative Results

A redução de onze diferentes espécies bacterianas foi avaliada utilizando o processo PRT baseado riboflavina e luz UV. Estes agentes representam alguns dos contaminantes mais comuns de produtos de plaquetas e incluem bactérias Gram-positivas e cinco seis organismos gram negativos. Pelo menos seis produtos de plaquetas foram avaliados por organismo e cada produto foi inoculado com bactérias suficiente para se obter> 1,0 x 10 5 CFU / ml de bactérias título final no produto de plaquetas. Antes do tratamento, foi removida uma amostra para determinar o título de pré-tratamento, após o que o produto foi prontamente plaquetas tratadas com o processo de riboflavina e UV. Após o tratamento dos produtos de plaquetas foram observadas as seguintes reduções de log: S. epidermidis 4,7 log (99,998%), S. aureus 4,8 log (99,998%), S. mitis 3,7 log (99,98%), S. pyogenes 2,6 log (99,7%), S. marcescens 4,0 log (99,99%), Y. enterocolitica 3.3 log (99,95%), B.neotomae 5,4 log (99,9996%), B. cereus 2,6 log (99,7%), E. coli ≥ 5,4 log (99,9996%), aeruginosa 4,7 log P. (99,998%) e K. pneumoniae 2,8 log (99,8%) (Figura 2). Todas as unidades satisfeitas as especificações do sistema conforme indicado anteriormente para o processo de riboflavina e UV. Testes de redução adicional foi realizada com S. pyogenes usando creme leucocitário plaquetas derivadas. Não foi observada diferença significativa na redução de S. pyogenes em creme leucocitário plaquetas derivadas de plaquetas por aférese contra (dados não mostrados). Tabela 1: As condições de crescimento para as espécies bacterianas avaliadas usando riboflavina e luz UV. Um painel de ambas as bactérias Gram-negativas e Gram-positivas que foram mostrados para contaminar os produtos de plaquetas foram seleccionados para este estudo. As condições de crescimento (temperatura e tipo de mídia) utilizados para propagar e titer os organismos são mostrados. Figura 1: processo de redução de luz patógeno riboflavina e UV. Riboflavina foi dissolvido em 0,9% de solução salina a uma concentração nominal de 500 um. A solução foi esterilizada e ligado drenada para cada produto de plaquetas. As bactérias foram adicionados assepticamente para cada unidade de plaquetas e, em seguida, tratada com 6,2 J / ml de energia UV (aproximadamente 6-10 minutos). Neste estudo in vitro a unidade de plaquetas pós-tratamento foram amostrados para determinar o título bacteriano final. Figura 2: Redução de diferentes espécies bacterianas, quando tratados com riboflavina e luz UV riboflavina e luz UV foi usada para reduzir as cargas bacterianas de contaminantes bacterianos comuns de produtos de plaquetas.. A redução log 10 é a diferençaentre a média título de pré-tratamento e da média título pós-tratamento. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussion

Triagem bacteriana tornou-se prática comum nas instituições bancárias de sangue e para muitos locais que serve como o principal método para evitar a transfusão de plaquetas contaminadas com bactérias. Embora o rastreio bacteriana normalmente interdita a maioria de rápido crescimento de bactérias Gram negativas, como S. marcescens, E. coli e E. cloacae, ele se esforça para detectar crescimento lento bactérias Gram positivas como S. aureus, Streptococcus spp., e S. epidermidis 8. Infelizmente, estes três bactérias Gram-positivas estão implicados em para cima de 50% de todas as unidades de plaquetas contaminadas e transfusão de plaquetas dos produtos contendo estes três organismos tem conduzir a mortalidade dos pacientes 1.

Rastreio bacteriano baseia-se na titulação bacteriana num produto de plaquetas de ser suficientemente elevada de modo a que pelo menos um organismo está contido dentro do típico 4-8 ml da amostra de rastreio. Se o título bacteriana não é suficientemente elevado para uma bactéria para ser capturado no volume de amostra 4-8 ml, a unidade está incorretamente sinalizado como negativa e ele é liberado para transfusão. Uma abordagem alternativa ao rastreio bacteriana pode ser empregar um processo de pró-activo que pode ser realizada em todas as unidades de plaquetas e que pode tornar os organismos contaminantes como não funcional.

Neste estudo, os títulos elevados de bactérias foram propositadamente adicionadas às unidades de plaquetas para testar a capacidade de redução total do processo de redução de luz patógeno riboflavina e UV. Embora as cargas bacterianas testadas neste estudo ultrapassam de longe os normalmente encontrados em produtos de sangue, no momento da doação, este estudo ajuda a demonstrar que o processo de riboflavina e luz UV é capaz de reduzir significativamente a título de bactérias viáveis ​​numa unidade de plaquetas contaminado por 2,6 a 5,4 log (% de redução 99,7-99,9996 bactérias contaminantes) (Figura 2). Para obter uma accuravalor da redução log te, é fundamental que o operador tem boa técnica asséptica, juntamente com habilidades de pipetagem precisos ao realizar as etapas de titulação bacterianas. Pipetagem imprecisa ao realizar diluições em série podem conduzir a uma acumulação de erros, assim, uma medição título impreciso.

Os dados coletados neste estudo apoia o trabalho anterior com riboflavina e luz ultravioleta, que desafiou o sistema contra baixo nível, bacteremia clinicamente relevantes (<20 UFC / unidade). O estudo anterior foi concebido para mimetizar um evento contaminação clínica real e os resultados mostraram riboflavina e luz UV foi eficaz na prevenção do crescimento de bactérias ao longo do período de armazenagem de plaquetas de 7 dias. Modelando com base nos dados do estudo anterior sugere que as estimativas de risco de contaminação bacteriana de corrente de produtos de plaquetas pode ser reduzida em tanto quanto 98% em relação aos níveis de corrente 8. O processo de riboflavina e luz UV compara favoravelmente com tela bacterianaing, que só demonstrou uma eficácia de 66% para detectar contaminantes bacterianos em unidades de plaquetas quando desafiado com uma carga bacteriana clinicamente relevantes 8.

Tal como acontece com todas as tecnologias, o tratamento PRT de produtos de plaquetas para evitar complicações associadas com unidades de plaquetas contaminadas com bactérias tem as suas limitações. PRT sistemas não são eficazes contra os esporos bacterianos e não inactivar endotoxinas, mesmo se, assim, um sistema PRT pode inactivar títulos elevados de bactérias Gram-negativas da endotoxina restante ainda pode causar choque séptico no receptor. PRT é melhor realizada precocemente durante o armazenamento antes que as bactérias podem se propagar para altos títulos.

Em conclusão, conforme demonstrado pela combinação destes dois estudos, o processo de riboflavina e luz UV é eficaz em reduzir as cargas bacterianas de ambas as bactérias gram negativas e gram positivos e podem oferecer uma alternativa viável para a triagem bacteriana. Rotineiramente treatinprodutos g de plaquetas com riboflavina e luz UV também tem o benefício adicional de reduzir o potencial de transmissão de outros agentes transmitidos pelo sangue, como vírus e parasitas.

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors have no acknowledgements.

Materials

Mirasol Illuminator Terumo BCT N/A
Mirasol Treatment/Storage Bag Terumo BCT N/A
Hematology Analyzer Beckman-Coulter Ac•T diff 
Blood Gas Analyzer Siemens RapidLab 1265 
Sterile Docking Device Terumo BCT TSCD
Platelet Incubator Helmer PC2200
Orbital Incubator Shaker Lab-Line 4628
Dry Incubator Fisher Iso-temp
Class II A/B3 Biosafety Cabinet Thermo-forma 1286
Tubing Sealer Sebra Smart Sealer II
Table Top Centrifuge IEC Centra GP8R
10 mL Syringe BD 309604
30 mL Syringe BD 309650
5 mL Dilution Tube VWR 211-0058
50 mL Conical Tube Corning 430290
Micropipette Gilson P-200
Micropipette Rainin R-200
Repeat Pipette Eppendorf 4780
1-200 µL Filter Tip Costar 4810
25 mL Disposable Serrological Pipette Costar 4489
5 mL Disposable Serrological Pipette Costar 4487
35 mL 500 µM Riboflavin Terumo BCT 35 mL 500 µM 
Brucella Agar with 5% Horse Blood BBL 221547
Brain Heart Infusion Teknova B9993
Peptone Water BD 257087
Trypticase Soy Broth BD 299113
Trypticase Soy Agar Remel R01917
Heat Inactivated Horse Serum Gibco 26050
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References

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Platelet ProductsRiboflavinUV LightBacterial ContaminationPathogen ReductionLog ReductionS. EpidermidisS. AureusS. MitisS. PyogenesS. MarcescensY. EnterocoliticaB. NeotomaeB. CereusE. ColiP. AeruginosaK. Pneumoniae

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Keil, S. D., Hovenga, N., Gilmour, D., Marschner, S., Goodrich, R. Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination. J. Vis. Exp. (102), e52820, doi:10.3791/52820 (2015).
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