从大鼠的侧尾静脉血液取样

是用带成年雄性Long-Evans大鼠全部实验。所有的程序都按照健康（NIH）指南实验动物的护理和使用美国国家研究院​​和批准了麻省理工学院的机构动物护理和使用委员会及动物护理和使用审查办公室该USAMRMC。 1.准备通过在针放置屏蔽针在含肝素500微升管（1000 USP单位/ ml），然后抽吸和排出肝素溶液Heparinise导管和注射器。 附加蝴蝶导管注射器。保持屏蔽过导管，以保护该尖端从损坏的针。 撤回肝素的体积比的血液将被收集的体积稍大。取下注射器，并用空气填充它。 重新连接的注射器的导管，并使用空气排出体内多余的肝素液;确保只有微量残留在管，针头，和注射器。 将无菌导尿管，用还连着注射器，在无菌的表面。 快速安全的老鼠在一个干净的布，确保fore-和后爪有一个舒服的姿势和呼吸不受限制。 与固定钩环带的包;确保外生殖器不收缩。 有一个助手轻轻地，坚决抑制大鼠（腹部和尾部的基地）上扎实的工作表面用尾巴挂在柜台边。 2.采血浸泡在42℃的水中尾巴40-50秒，以扩张血管，并用干纸巾的尾巴。找到尾静脉放血（同尾转动整个身体，以防止扭曲的尾巴）。 注：尾巴的充分变暖的快速收藏品关键为n的血液试样。如果脉管收缩，导管的正确放置是困难的，并且血流量大大减少。加热垫可被用作替代水浸泡。 确定的采样点。 注意：动脉位于沿尾部的中间背侧;不要使用它进行抽样。 目标要么位于横向于动脉的左，右尾静脉。尾部，这由各个应变和随着年龄的增加色素沉着，可能会掩盖一些血管。在尾部的下部定位的静脉的一部分。 擦拭用2％氯己定的防腐溶液中的目标区域。 通过抽出从零柱塞到约50微升创建在注射器和导管的负压。 轻轻地紧紧握住尾巴尖端附近，以保持尾部直线整个样本采集。确保血液流动不被过度得紧闭塞。慢慢将导管插入静脉以浅角度从尾尖约5厘米。当静脉被穿透，血液将流入导管。慢慢撤回注射器的柱塞以收集在一个稳定的速率所需要的体积（〜每秒20微升）。 请教兽医人员约可收集的最大血量的信息。血应当收集的最大量取决于大鼠的体重和健康状况。别在14天时间段撤回总血量的15％以上。 注：血液是更加困难的动物都敏锐地强调抽样集合，因为应激激素收缩血管的前几分钟，收集。例如，移动老鼠的家笼，以一种新颖的房间，需要几分钟来包装动物，或在导管的重复插入到静脉都可能引发急性应激反应。 促进布卢通过“挤奶”静脉d流。运行一个手指沿静脉的长度，从朝向尾部的末端的基础上，但仍超过2厘米从插入针或导管的尖端可以成为从静脉移位。 如果血液不能成功地从导管渗透的初始部位采集，还重新插入针上的静脉。如果收集血液在最初部位，通过断开并重新连接导管和注射器重新插入静脉前重新加压针头。在一般情况下，避免额外的穿透。 作为多个穿透可导致尾静脉塌陷，其中的血液供应的尾部被切断和软尾组织变得坏死，安乐死大鼠是否有尾静脉塌陷。 当足够的样品体积被收集，通过断开和重新连接该导管释放压力的注射器。稍微吸用注射器活塞（约50＆＃181;升），并撤回从静脉针头。 注意：如果针不首先释放压力的注射器抽出，血液滴落从针。 简要施加压力插入部位止血，并用擦拭消毒液的区域。返回老鼠的笼子。 3.处理血样吸空气，以确保没有血液保持导管针内，并用剪刀剪开的导管就在上面的针。排出血液进入无菌1.5 ml离心管。 注意：如果血液通过针推动时，所述剪切力可能导致红血细胞破裂可以与许多下游测定干扰。卸下针以避免溶血。 收集血浆，含有EDTA作为抗凝剂（这里使用管，用10微升的0.1M EDTA为200-400微升血液;确保EDTA的使用不干扰瓦特的浓度第i个下游测定）和在冰上的地方。 在冷冻离心机（4℃）内收集的10分钟10分钟旋转的全血样品在2100×g离心。洗脱的血浆，避免干扰的红，白血细胞层。 收集血清，代替样品（无抗凝血剂）在室温下长达30分钟，以使凝块。在2000×g下旋转该收集管在冷冻离心机（4℃）。血清然后可以洗脱。 使用立即样品或储存在-80℃下长达一年。