ラットの外側尾静脈から血液をサンプリング

全ての実験は、成体雄ロングエバンスラットを用いて行きました。すべての手順は、米国国立衛生研究所に応じて、実験動物の管理と使用に関する（NIH）ガイドであり、マサチューセッツ工科大学の施設内動物管理使用委員会との動物管理使用レビュー庁によって承認されましたUSAMRMC。 1.準備ヘパリン（千USP単位/ ml）を含む500μlのチューブでシールド針を配置した後、針を介してヘパリン溶液を吸引して排出することによりHepariniseカテーテルとシリンジ。 シリンジに蝶カテーテルを取り付けます。損傷から鋭い先端を保護するために、カテーテルの針の上にシールドしてください。 収集される血液の量よりもわずかに大きいヘパリンの量を撤回。注射器を外し、空気でそれを埋めます。 再アタッチカテーテルに注射器を使用し、空気は、過剰なヘパリン溶液を排出します。確実に微量のみ、チューブ、針、シリンジに残ります。 滅菌表面に、ついたまま注射器で、滅菌カテーテルを配置します。 すぐに前足と後足が快適な位置にあり、呼吸が制限されていないことを保証きれいな布でラットを固定します。 フックとループテープでラップを固定し、外性器がくびれていないことを確認してください。 優しくアシスタントを持ち、しっかりと尾はカウンターの端にぶら下がっで堅実な仕事の表面上にラット（腹部と尾の付け根）を抑制する。 2.採血 40〜50秒の血管を拡張し、ペーパータオルで尾を乾燥させるために42℃の水に尾を浸し。 （尾をねじる防止するために、尾と体全体を回転させる）から採血する尾静脈の位置を確認します。 注：尾の十分な温暖化が急速collectioのために重要です血液サンプルのN。血管系の狭窄された場合、カテーテルの適切な配置が困難であり、血流が大幅に低減されます。加熱パッドは、水浸漬の代わりに使用することができます。 サンプリング点を特定します。 注：動脈は尾の半ば背側面に沿って位置します。サンプリングのためにこれを使用しないでください。 動脈への側方に位置する左右の尾静脈のいずれかをターゲットにしています。菌株によって異なり、年齢とともに増加する尾の色素沈着は、血管系の一部を覆い隠すことができます。尾の下部に静脈の一部を対象としています。 2％クロルヘキシジン消毒液でターゲット領域を拭いてください。 約50μlにゼロからプランジャーを引き出すことによって、注射器やカテーテル内の負圧を作成します。 ストレートサンプル収集を通じて尾を維持するために先端付近優しく、しっかりと尾を持ちます。血流が過度にタイトなグリップによって閉塞されていないことを確認してください。ゆっくりと約5cm、尾の先端から浅い角度で静脈にカテーテルを挿入します。静脈が貫通されると、血液がカテーテル内に流れます。ゆっくりと一定の速度（毎秒〜20μL）で所望の体積を収集するために、注射器のプランジャーを撤回。 収集することができる最大の血液量については、獣医のスタッフにご相談ください。収集する必要があります血液の最大量は、ラットの体重と健康状態に依存します。 14日の期間中の総血液量の15％以上を撤回しないでください。 注：血液は急性ストレスホルモンが血管系を収縮するので、コレクションをサンプリングする前に数分で強調された動物から収集するためにはるかに困難です。例えば、動物をラップするのに数分を取って、新規の部屋にラットのホームケージを移動、または静脈にカテーテルの挿入を繰り返し、すべての急性ストレス反応を引き起こす可能性があります。 blooを促進「搾乳」静脈からdフロー。尾の先端に向かってベースから、静脈の長さに沿って指を実行しますが、挿入された針やカテーテルの先端から2cm以上が静脈から除去になる可能性が残っています。 血液が正常にカテーテルの浸透の最初のサイトから収集することができない場合は、静脈までさらに針を再挿入します。血液は最初のサイトで収集された場合は、切断した後、静脈に先立って再挿入するカテーテルと注射器を再接続することにより、針を再加圧します。一般的には、追加の貫通を避けます。 複数の貫通は、尾への血液供給が遮断され、柔らかい尾組織を壊死されるようになる中で、尾静脈の崩壊を引き起こす可能性がありますように尾静脈の崩壊がある場合に、ラットを安楽死させます。 十分な試料体積が収集されると、切断したカテーテルを再接続することによって、注射器内の圧力を解放します。吸引液がわずかにシリンジプランジャを使用して（〜50＆＃181; L）、および静脈から針を撤回。 注意：針が第1のシリンジ内の圧力を解放することなく撤回された場合、血液が針から滴下します。 簡単に説明すると出血を止めるために挿入部位に圧力を適用し、消毒液で拭きます。そのホームケージにラットを返します。 3.血液サンプルを処理吸引した空気には血液がカテーテル針の内部に残っていないことを確認し、ちょうど針の上にカテーテルチューブをカットするはさみを使用しています。滅菌1.5ミリリットルのマイクロチューブに血液を放出します。 注：血液が針を通して押された場合、剪断力は、多くの下流のアッセイを妨害し得る破裂する赤血球を引き起こす可能性があります。溶血を回避するために、針を外します。 血漿、ここで（抗凝固剤としてEDTAが含まれている血液の200〜400μlの0.1 M EDTA10μlのを使用し、使用チューブを収集するには、使用されるEDTAの濃度は、Wに干渉しないよう下流アッセイ番目）、氷上に置きます。 回収の10分以内に10分間冷却遠心機（4℃）で2,100×gでの全血サンプルをスピン。赤および白血球層を乱す避け、プラズマを溶出します。 凝固を可能にするために最大30分間、室温で（抗凝固剤を含まない）は、血液、血清、場所のサンプルを収集します。 2,000×gで冷却遠心機（4℃）で回収チューブをスピン。血清は、その後、溶出され得ます。 使用直ちに試料、または1年まで-80℃で保存。