Relacionar estomática conductancia de la hoja Rasgos funcionales

1. Conductancia estomática Las mediciones de conductancia estomática NOTA: Los autores hicieron uso de un tipo simple de porómetro estado estacionario (Decagon SC1). El diseño de la porometer tiene la ventaja de pequeño tamaño, funcionamiento manual intuitivo y alta fiabilidad. Cuando se mide la conductancia estomática en el campo, asegúrese de reducir al mínimo la distancia entre los individuos medidos para un ciclo de medición repetida a ser la más eficiente posible. Elija las hojas de diferentes especies y los individuos de acuerdo con un patrón reproducible (misma altura, la misma exposición, misma posición dentro de la planta, si es posible sólo desde el mismo nodo, y sólo de una categoría; sol o sombra hojas, etc.). Sólo medida deja en condición sana, no dañada y plenamente desarrollado. Marque las hojas de los individuos (por ejemplo, con las ataduras de cables o cinta de color), para asegurar que las mediciones repetidas se realizan en la misma hoja. NOTA: Measurelemen- de conductancia estomática deben hacerse sólo en la superficie de la hoja al mismo tiempo evitar la nervadura central y fuertes venas de las hojas. Comience mediciones en las primeras horas de la mañana antes del amanecer tomar de cinco a diez mediciones repetidas hasta que los valores de conductancia de estomas muestra una clara disminución al mediodía. NOTA: Un curso diario de las mediciones entregará buenos datos para el análisis de las relaciones entre vpd y conductancia estomática. Mediciones VPD Con cada g de medición S, registrar la temperatura y la humedad relativa preferiblemente con registradores portátiles para medir directamente las condiciones en la posición de la misma hoja. Para el cálculo del déficit de presión de vapor, utilizar la fórmula agosto-Roche Magnus 15. = saturación de presión de vapor de agua e s [hPa] <p clculo = "jove_content"> T = temperatura [° C] Modelo g S – respuesta vpd Ahora especies sabias argumentales todos los datos g S contra vpd, combinando todos los cursos diarios de hojas individuales en un análisis por cada especie. Extraer el valor máximo observado en los datos de la conductancia estomática buscando el valor máximo. Para escalar el modelo para la comparabilidad especies sabias, dividir a los valores observados a través del valor máximo observado para la especie (g S / g SMAX). Para cada especie, regresar los logits de g S (g S / g SMAX) para vpd y el término cuadrático de vpd utilizando un modelo lineal generalizado con una distribución de error binomial (a, byc representan parámetros de regresión): <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52738/52738fig1highres.jpg" widþ = "700" /> Figura 1. Ejemplo de los valores trazados y el modelo ajustado a g S -. Vpd conductancia estomática representa en función del déficit de presión de vapor para la especie Liquidambar formosana. Puntos vacíos representan los valores observados. (A) de la conductancia estomática máxima, el vpd a la máxima conductancia estomática y la media de la conductancia estomática se extrajo de la conductancia absoluta por lo tanto no escalado estomática (g S) de datos. (B) los datos de conductancia estomática Scaled (S / g SMAX g) se representaron para extraer los parámetros relativos (que se muestra como puntos negros) 20. Vuelva a imprimir con permiso de 20. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52738/52738fig2highres.jpg" width = "400" /> Figura 2. Todos los modelos ajustados para todas las especies. Gráficos de modelo para los datos de la conductancia estomática a la regresión vpd para todas las especies. Especies de hoja perenne son representados por líneas negras, especies de hojas caducas por líneas rojas 20. Vuelva a imprimir con permiso de 20. NOTA: El uso de los logits lugar de regresión g S directamente a vpd, conduce hasta el punto que modeló valores máximos no superen g SMAX y que g S se aproxima a 0 a alta vpd. Extraer parámetros de la regulación de los estomas para cada especie Calcule g modelado valores SMAX absolutos (MAXFIT en la Figura 1B). Para ello, el cálculo de la vpd a la máxima conductancia estomática de ajuste de la primera derivada de 1.4.2 a cero, lo que da vpd gsMaxFit = -b / 2a. Inserte vpd gsMaxFit en la fórmula de 1.4.2 y elevar a la potencia de correo para obtener MAXFIT. Calcular el mean de todas las mediciones de conductancia por especie (ver Figura 1 A). NOTA: El uso de software estadístico R (http://www.r-project.org). Para calcular los valores relativos, del modelo a escala (g S / g SMAX), extraer la conductancia estomática y los valores VPD para los dos puntos siguientes: (1) la conductancia estomática y vpd en el máximo de la modelo (MAXFIT) y (2) vpd en el segundo punto de inflexión de la curva (véase la Figura 1B). Multiplique estos valores por g SMAX para obtener valores absolutos g S para estos puntos. Vea la Figura 2 para una superposición completa de los modelos individuales de los 39 especies analizadas. 2. Las mediciones de los estomas Rasgos Tomar muestras preferiblemente de exactamente las mismas hojas que se han utilizado para las mediciones de conductancia estomática. Si esto no es posible, aplicar el mismo procedimiento de selección que se aplicó para elegir las hojaspara las mediciones de conductancia estomática, preferiblemente en los mismos individuos. Aplicar una fina capa de incoloros, de secado rápido esmalte de uñas (prueba de diferentes marcas, algunos son más adecuados que otros) a una muestra fresca. Si las muestras no pueden ser procesadas de inmediato, guárdelos en un 70% de alcohol. Después de que el esmalte de uñas se ha secado, pelar suavemente la impresión de la hoja y de proceder para el análisis microscópico, como con una muestra normal de la hoja. NOTA: En el caso de las hojas con una alta densidad de tricomas una etapa anterior de la aplicación de hidróxido de sodio o una solución 1: 1 de peróxido de ácido acético y oxígeno puede conducir a mejores resultados. Análisis microscopio óptico Conecte una cámara a un microscopio óptico capaz de aumentos entre 40X a 400X. Después de la cámara está conectada al microscopio, que coincida con las imágenes tomadas a la ampliación óptica y resolución de la imagen, por ejemplo, con la ayuda de una escala. Empleando i de código abiertosoftware de procesamiento de mago como ImageJ 16 analizar estas fotos. Dibuja una forma con la herramienta de forma de la herramienta de análisis de imagen en la imagen en un área sin suciedad, huellas digitales, las áreas dañadas, o grandes venas de la hoja. Cuente estomas en esta área y en total de al menos 50 000 m 2 por muestra. Mida guardia estomática longitud de la célula y la longitud de los poros. Calcular el número de estomas por mm2. Calcular el índice estomático como la relación de la densidad de los estomas para el número de células epidérmicas por mm 2. 3. Evaluación de la vena de la hoja Rasgos NOTA: Para la evaluación de los rasgos de la vena de la hoja, una modificación de un protocolo de Saco y Scoffoni 17 fue empleado. preparación de la muestra NOTA: Para optimizar la visibilidad de las venas de las hojas, las hojas se blanquea primero y luego se tiñeron con safranina y verde malaquita. Para blanquear el leaves, a dejar al menos 72 horas en el 50% de solución de decolorante (prueba de diferentes marcas, de nuevo algunos podrían trabajar mejor). Alternativamente, use solución al 5% o solución de KOH al 10% o 25% de solución de NaOH H 2 O 2. Calentar la solución hasta 30 ° C o combinar las diferentes soluciones de la etapa 3.1.1 para obtener mejores efectos. Enjuague varias veces con agua después. Adaptar el proceso de blanqueo para las especies específicas, dependiendo de sus características hojas. NOTA: Más grueso hojas pueden necesitar períodos de baño de solución y, o las soluciones más agresivas largos. Hojas tiernas más delgadas y más pueden ser blanqueados en un grado satisfactorio en menos de 72 horas. Para colorear las hojas colocarlos en etanol al 100%. Ellos Colorea por 2 – 30 min en solución safranina 1%. Para mejorar la coloración, añadir un tratamiento adicional con 1% de solución de verde de malaquita solamente durante varios segundos. Adaptar el protocolo para todas las especies en términos de tiempo y la intensidad para lograr resultados óptimos. Enjuague sítiempos Veral en el agua después. Si las hojas son de manchado profundamente, algún tiempo en etanol o decolorante puede ayudar. Análisis de las muestras Analiza las hojas con un escáner de luz de fondo a una resolución de aproximadamente 1200 dpi. Coinciden con las exploraciones adoptadas para la resolución de la imagen, por ejemplo, con la ayuda de una escala, para asegurarse de que la longitud de píxeles se remonta a las medidas absolutas de longitud de la hoja escaneada. Medir el área, perímetro, longitud y anchura de las hojas. Calcula varios índices, por ejemplo, la longitud / anchura y la circunferencia 2 / área. Corte un 1 por 1 cm rectángulo de en medio de la imagen. Medir el diámetro de las venas de primero y segundo orden (no incluya la principal vena central). Mida la longitud de todas las venas de primer orden en este cuadrante (densidad vena). 4. Evaluación de Otros Leaf Rasgos NOTA: Los asnos rasgos foliares típicos como específicaárea foliar (SLA), hoja de materia seca (CMSH), área foliar, contenido de elementos, hoja hábito, hoja Pinnado, hoja de tipo compuesto, hoja tipo margen etc. siguientes establecido protocolos 18,19. Rasgos de la hoja de observación Evaluar Pinnado hoja, hoja de tipo compuesto, hoja tipo de margen y la presencia de nectarios extraflorales 18,19 través de la observación en el campo. Rasgos de la hoja de análisis Recoger muestras de hojas frescas, preferentemente en los mismos individuos que los utilizados para las otras medidas, para la determinación del área específica foliar (SLA), área foliar y la hoja de contenido de materia seca (CMSH) 18,19. Después de 48 horas en el horno de secado a 80 ° C, mida el contenido de elementos y relaciones, de preferencia en las mismas hojas.