마우스 경부 림프절의 고주파 초음파 이미징

이 프로토콜에서 보여준 모든 동물 절차를 검토하고 프로토콜 11-0412 및 14-0514 아래에있는 웨스트 버지니아 대학 동물 관리 및 사용위원회의 승인과 관리 및 사용에 대한 NIH 가이드에 설명 된 원칙과 절차에 따라 진행되고있다 동물의. 1. 동물 준비 1.5 L / 분으로 100 %의 산소와 혼합 3 % 이소 플루오 란을 사용하여 유도 챔버에 단일 마우스를 마취. 40 ° C로 예열과 37-42 ° C의 (그림 2A) 사이에 유지 이미징 플랫폼에서 앙와위에서 유도 챔버와 장소에서 동물을 제거합니다. 발가락 핀치에 응답의 부족으로 마취를 확인합니다. 마취 시스템에 연결 원추형 두부 내에서 마우스 주둥이를 놓습니다. 정상 상태의 진정 (1.5 L / 분 100 % 산소와 혼합 1.5 % 이소 플루오 란)을 유지하기 위해 마취를 적용합니다. dryin 방지하기 위해 눈 윤활제를 각각의 눈을 적용G. 전극에 전극 젤을 적용하고 해당 전극에 네 발을 각각 확보하기 위해 테이프를 사용합니다. 전극 패드는 심장 박동과 호흡 속도 모니터링을 허용하는 이미징 시스템에 동물의 ECG를 전송할 것이다. 윤활 체온의 연속 모니터링을 위해 직장 온도 프로브를 삽입한다. 정상 마우스의 체온은 36.9 ° C이다. 1-2 ° C의 변화는 마취 동안 정상입니다. 마우스의 목에서 털을 제거하는 제모 크림을 사용합니다. 머리와 초과 제모 크림을 제거하기 위해 물에 적신 거즈로 목 영역을 씻어. 선택적으로, 나머지 체모 (그림 2B)을 제거하는 제모 크림의 추가 응용 프로그램을 사용합니다. 마우스 경부 림프절 2. 식별 및 이미지 인식 HFUS 사용 , 시작 모피없는 목 영역 가온 초음파 겔의 층을 적용한다. 최적의 이미지 젤의 자유 응용 프로그램을 사용하여품질 (그림 2C). 초음파 이미징을 방해 할 수의인가 겔, 기포를 도입하는 피. 이미징 플랫폼 그래서 마우스가 약간 상승 머리 위치 20 ~ 30 °를 조정합니다. 이 위치는 마우스에 대한 최적의 호흡 속도를 보장하는 데 도움이됩니다. 장착 시스템에 횡 방향으로 40 MHz의 트랜스 듀서를 놓고 변환기 스캔 헤드의 전면이 초음파 젤 (그림 2C)에 침지 될 때까지 조심스럽게 내립니다. 참고 : 과도한 호흡 곤란을 일으킬 수 있으므로, 마우스 목에 과도한 압력을 넣지해야합니다. 촬상 변환기와 마우스 사이 겔 완충액을하는 또, 유용하다. 림프절의 B 모드 이미징 및 감지 : 밝기 (B-) 다음과 같은 매개 변수에 대한 모드 설정을 조정, HFUS 수집 소프트웨어를 제어하는​​ 컴퓨터를 사용하여 다음, 깊이 10.00 22dB 게인MM은 14.08 mm 폭. 참고 :이 설정은 시작 지점을 제안하고, 다른 응용 프로그램 사이에서 최적의 영상 획득을위한 약간의 조정이 필요할 수 있습니다. 주위의 고 에코 필드 내에서 피부 표면에 가까운 타원형 저 에코 구조 정상 자궁 경부 림프절을 관찰한다. 병에 걸린 림프절의 모양은 모델에 따라 다를 수 있습니다. 체계적으로 이미지가 목 지역 내의 모든 림프절 다음 단계를 사용하려면 : 흉부 지역으로 방식이 꼬리 지느러미에 뇌에 목을 스캔하고 Y 축를 사용합니다. 이미지를 중앙에 X 축를 사용합니다. 주요 랜드 마크 확인 : 구강, 혀, 그리고 갑상선 (도 3A, B와 C를 각각); 가로 마우스 경부의 복부 표면을 조정하는 목의 양측에도 B 모드 영상에 보이게, 이미징 플랫폼 기울. 경사의 양은 각 마우스의 생리에 따라 달라집니다. </lI> 목 통하여 림프절 및 관련 경계표를 매핑하기 위해, 갑상선에 구강 / 혀 영역에서 전체 목부 영역의 3 차원 검사를 실시한다. 혀 / 구강 영역 (그림 3A)를 찾습니다과 Y 규모에 숫자 위치를 확인합니다. 갑상선 (그림 3C)를 찾습니다과 Y 규모에 숫자 위치를 확인합니다. 이미지화 경부 지역 mm의 전체 길이를 결정하기 위해 (2.4.1) 및 (2.4.2)에서 얻어진 값 사이의 차이를 계산한다. 결정된 전체 길이의 중간 지점에 변환기를 중앙에 Y 노브를 사용합니다. 를 눌러 "3D". 총 길이를 입력합니다. 3D 스텝 사이즈를 들어, 목 전체 영역에 대해 이미지 시리즈 스택을 얻기 위해 0.076 mm을 사용한다. 스캐닝이 완료되면, 다음 4 인상, 목의 오른쪽 또는 왼쪽을 선택하고 관심있는 개인 림프절에 변환기 중앙마우스 오프 0 MHz의 변환기. 40 MHz의 변환기를 제거하고 높은 해상도의 이미지를 얻을 수 (또한 가로 위치)에서 50 MHz의 Microscan의 변환기로 교체합니다. 마우스 목에 초음파 젤을 보충하고, 초음파 젤로 50 MHz의 변환기를 낮 춥니 다. 3D 파워 도플러 영상 행동 3D는 엉덩이의 볼륨과 개별 경부 림프절 다음의 혈관에 출력 도플러로 검색 : 다음의 전원 모드 설정을 전원 Dopper을 획득하고 조정하는 시스템 키보드에있는 전원 버튼을 누릅니다 : PRF 4 kHz에서, 도플러는 34dB 이득, 2D 이득 30dB, 깊이 5.00 mm, 폭 4.73 mm로. 참고 : 이전과 마찬가지로, 이러한 설정은 제안의 시작 지점이며, 다양한 모델에 최적의 영상 획득을 위해 필요에 따라 수정 될 수있다. 관심있는 림프절의 두개골 가장 포인트를 찾아 Y 스케일의 위치를​​ 확인합니다. 같은 노드와 노트의 가장 꼬리 지점을 찾습니다Y 스케일의 위치. 림프절의 전체 길이를 결정하는 거리 차이를 계산한다 (단계 2.4.3 참조). Y 스케일의 위치를​​ 사용하여, 결정된 전체 길이의 중간 점에 변환기를 중심입니다. 를 눌러 "3D"총 림프절 길이를 입력합니다. 스텝 크기 0.051 mm를 사용합니다. 참고 : 가슴 부위에 트랜스 듀서의 근접성으로 인해, 50 MHz의 변환기로 인해 정상적인 호흡 운동 검출에 불안정한 도플러 이미지의 원인이 될 수 있습니다. 이것은 "생리 학적"탭에서 제공 "호흡 게이팅"옵션을 사용하여 제거 될 수있다. 파워 도플러 분석 및 이미지를 획득하는 "3D 스캔"을 선택 할 수있는 영역을 지정하는 노란색 상자에 선택한 림프절을 둘러싸고 있습니다. 마우스 오프 변환기를 올리고 목의 반대편으로 이동. 마우스 위에 트랜스 듀서를 내리고 IMA에 위에서 설명한 단계를 반복목의 측면에 GE의 림프절. 이후의 분석을위한 이미지 세트를 저장합니다. 3. 자궁 경부 림프절 생검 조직 검사에 대해 원하는 림프 노드를 선택하고 50 MHz의 트랜스 듀서와 HFUS 영상을 유지한다. 마우스 목의 각 측면에서 가장 큰 볼 경부 림프절을 선택했다. 림프절 확대는 전형적으로 염증 반응을 나타내며, 따라서 이러한 노드들은 생검을위한 이상적인 후보이다. 참고 : 우리는 자궁 경부 노드보다 작은 10mm 3에 조직 검사를 실시하는 것은 매우 어렵다 발견했다. 주사기 홀더에 부착 된 27 G, 0.5 인치 바늘로 1 ML의 주사기를 배치하여 조직 검사 용 바늘과 주사기를 준비합니다. 바늘을 마우스 목 (그림 4A)에 90 ° 방향을 바늘 홀더를 조정합니다. 바늘의 수준 마우스 전체 플랫폼을 승강하여 준비한다. 3D 모터를 제거하고 키 platf로 전환하여이를 달성ORM, 또는 제공 짧은 플랫폼에서 적당한 높이의 단단한 물체를 배치하여. 이 목적을 위해 플라스틱 미세 원심 분리 튜브 랙을 사용한다. 필요한 경우, 바늘 장치 반대 목의 측면에 위치한 노드 생검하기 위하여 플랫폼 180도 회전한다. 다음 "최대 및 확장 버퍼"를 선택하여, "환경 설정"을 선택하여 획득 설정을 조정합니다. 8.00 mm와 9.73 mm의 폭의 깊이로 시야를 확대. 화면 키 전화 사용 봉침을 켭니다. 봉침 화면에 바늘의 경로를 예측하고 생검에 대한 올바른 위치에 관심 림프절을 일렬로 사용자를 허용 할 것이다. 림프절은 중간 또는 약간 화면 (그림 4B)에서 센터의 왼쪽에있는 림프절을 중심으로보기에 지속적으로 남아 있는지 확인합니다. 절차의 전체 시네 루프를 얻으려면, 생체 검사를 시작하기 전에 시스템 키보드에 미리 트리거를 눌러. 바늘 끝이보기와 접촉 피부 (그림 4B)에 올 때까지 바늘 홀더를 조정합니다. 빠른 피부에 구멍을 밀어, 회사와 바늘을 전진. 팁 또한 캡슐 (그림 4C)을 천공하고, 수질 (그림 4D) 내 보일 때까지 바늘을 사전에 계속. 바늘이 제대로 노드 내에 위치되면, 부드럽게 생검 (그림 4D와 4E)를 수행하기 위해 다시 200 ~ 300 μL 무사 (武士)의 주사기 플런저를 잡아 당깁니다. 그 생검 재료는 일반적으로 주사기 내에서 표시되지 않습니다. 부드럽게 마우스 목에서 바늘을 제거합니다. 1.5ml의 미세 원심 분리 튜브에 주사기 내용물 추방. 튜브에 바늘을 떠나, 주사기에서 바늘을 제거합니다. 동일한 주사기 (콘텐츠 소스로부터 분리 된 분취으로부터) 미디어 생검 1 ㎖를 수집 번째의 바늘을 유지시키면서 주사기 바늘을 다시 부착전자 튜브. 튜브에 조직 검사 미디어를 추방하여 조직 검사 미디어 주사기와 바늘을 씻어. 참고 : 바늘 생검 후 어느 시점에 연결되어있는 동안 플런저를 다시 잡아 당기지 마십시오. 이는 작은 샘플 크기 생검 재료를 손실 할 위험을 감소시킨다. 조직 학적 방법 (그림 4 층)에 의해 림프절의 내용을 확인하고 적절한 추가 방법 (조직 화학 등 유동 세포 계측법)에 의해 분석한다. 조직 검사가 완료되면 마취를 끄고 직장 온도 프로브를 제거합니다. 거즈와 마우스에서 초과 초음파 젤을 제거하고 각각의 발에서 테이프를 제거합니다. 이미징 플랫폼에서 마우스를 제거하고 케이지로 돌아갑니다. 생검 사이트에서 최소한의 출혈이 발생할 수 있지만, 이것은 개입없이 중지합니다. 전체 활동이 재개 될 때까지 복구하는 동안 마우스를 모니터합니다. 4. 이미지 경부 림프절의 분석 <l난> 초음파 소프트웨어에서 분석을 위해 이미지를 선택하고 "이미지 처리 '탭으로 이동합니다. "3D로 Load"를 선택합니다. "단일 창을 표시"버튼을 클릭, 왼쪽 상단 모서리에 "3D 복원 영상"을 선택합니다. 원하는 경우 이미지를 확대하는 줌 기능을 사용합니다. "디스플레이 레이아웃"토글 전용 뷰에서 전원 도플러 오버레이를 제거 B- 모드에서 이미지를 볼 수 있습니다. 이렇게하면, 후속하는 3-D 분석에서 림프절의 가장자리를 볼 수있다. 림프절의 시작을 찾습니다 이미지 시리즈를 통해 이동합니다. 림프절을 외접하려면 "3D 설정"탭으로 이동합니다. 다음, '시작'버튼 옆에 "병렬", "볼륨"을 선택합니다. 스크롤하여 개별 이미지 내에서 관심 영역 주변의 윤곽을 그립니다. 전체 림프절을 포함 이미지가 표시 될 때까지 계속합니다. "완료"를 선택분석을 완료합니다. 이미지의 하단에, 3D 볼륨과 혈관 %가 자동으로 표시됩니다. 주 : 3D 용적 림프절 부피에 대응하고, 퍼센트 혈관 전력 도플러 혈류 양성 림프절의 비율을 나타낸다. "디스플레이 레이아웃"토글 B- 모드 영상에 오버레이로 출력 도플러 영상을 볼 수 있습니다. 표면보기에 관심있는 볼륨 영역의 순보기를 관찰합니다. 추가 사용에 대한 영화 (.AVI)로 태그 이미지 파일 (TIF) 형식 또는 3D 스캔의 이미지를 내 보냅니다.