تحليل التغييرات التعبير الجيني في الفئران الحصين بعد ديب تحفيز الدماغ الأمامي من مهادي نواة
Summary
The mechanism underlying the therapeutic effects of Deep Brain Stimulation (DBS) surgery needs investigation. The methods presented in this manuscript describe an experimental approach to examine the cellular events triggered by DBS by analyzing the gene expression profile of candidate genes that can facilitate neurogenesis post DBS surgery.
Abstract
التحفيز العميق للدماغ (DBS) جراحة، واستهداف مناطق مختلفة من الدماغ مثل العقد القاعدية، المهاد، والمناطق تحت المهاد، هو علاج فعال لعدة اضطرابات الحركة التي فشلت في الاستجابة للدواء. وقد بدأ التقدم الأخير في مجال جراحة DBS إلى توسيع نطاق تطبيق هذه التقنية الجراحية لظروف أخرى متنوعة مثل السمنة المرضية، والاكتئاب والوسواس القهري. وعلى الرغم من هذه المؤشرات التوسع، لا يعرف الكثير عن الآليات الفسيولوجية الأساسية التي تسهل التأثيرات المفيدة لعملية جراحية DBS. نهج واحد على هذا السؤال هو لإجراء تحليل التعبير الجيني في الخلايا العصبية التي تستقبل التحفيز الكهربائي. وقد أظهرت الدراسات السابقة وأثار ذلك تكوين الخلايا العصبية في التلفيف المسنن الفئران في DBS استهداف نواة الأمامية من المهاد 1. وتستخدم عملية جراحية DBS استهداف ATN على نطاق واسع لعلاج الصرع المقاوم. وبالتالي، من ينتيريس الكثيرر بالنسبة لنا لاستكشاف التغيرات النسخي الناجمة عن تحفيز كهربائيا ATN. في هذا المخطوط، وصفنا منهجيات لدينا لهدايته stereotactically جراحة DBS استهداف ATN في البالغين فئران ويستار الذكور. نحن أيضا مناقشة الخطوات اللاحقة للتشريح الأنسجة والعزلة RNA، وإعداد [كدنا والكمي RT-PCR لقياس التغيرات في التعبير الجيني. هذه الطريقة يمكن تطبيقها وتعديلها لتحفيز العقد القاعدية ومناطق أخرى من الدماغ شيوعا المستهدفة سريريا. دراسة التعبير الجيني هو موضح هنا تفترض نهجا الجين المستهدف مرشح لاكتشاف اللاعبين الجزيئية التي يمكن توجيه آلية لDBS.
Introduction
التاريخ وراء تطوير تحفيز الدماغ العميق كأسلوب جراحة الأعصاب يعود إلى 1870s في حين استكشاف إمكانية تحفيز كهربائيا الدوائر الدماغ 2. بدأ استخدام التحفيز عالية التردد المزمن كعلاج لاضطرابات العصبية في 1960s 3. في وقت لاحق في 1990s مع ظهور زرع المزمن DBS أقطاب 4-6، واصل عدد من الاضطرابات العصبية التي كانت تعامل من قبل DBS في الزيادة. وقد استخدم تحفيز الدماغ العميق لأول مرة في الولايات المتحدة لعلاج الهزة الضروري 6. اليوم يتم استخدام الجراحة على نطاق واسع لعلاج الاضطرابات العصبية التي هي غير قابل للعلاج عن طريق التدخل الدوائي حاليا. يستخدم DBS حاليا لعلاج اضطرابات الحركة من مرض باركنسون وخلل التوتر 7-9. الزهايمر نوع الخرف، مرض هنتنغتون، والصرع، وآلام والأمراض العصبية والنفسية مثل الاكتئاب، والوسواس القهري، توريت7؛ ق متلازمة والإدمان هي بعض الشروط قابلة للعلاج بواسطة DBS 10-12. بينما عملية جراحية DBS وافقت ادارة الاغذية والعقاقير لعلاج مرض باركنسون، خلل التوتر والهزة الأساسية، واستخدام DBS لعلاج الحالات الأخرى المذكورة أعلاه هي في مراحل مختلفة من المختبر والدراسات السريرية التي تقدم الكثير من الأمل للمرضى 13،14.
سريريا، يتم إجراء عملية جراحية DBS على مرحلتين. المرحلة الأولى تتضمن لتحديد المواقع جراحيا الأقطاب DBS في الموقع التشريحي المستهدف باستخدام مزيج من المواقع الإشعاعي، CT، MRI، وكذلك قراءات مسرى مكروي لتعزيز دقة. المرحلة الثانية تتضمن زرع مولد النبض في صدر المريض العلوي وتركيب تمديد يؤدي من فروة الرأس إلى مولد النبض. استنادا إلى حالة عصبية، والعديد من المخططات البرمجة للمولد النبض تم موحدة وسيتم استخدامها لتقديم الجهد المطلوب. في المجلد النهائييتم التوصل المئوية بطريقة تدريجية بحيث الحصول على أفضل استجابة سريرية مع الحد الأدنى من الجهد 15. ومع ذلك، في دراساتنا، على عكس يزرع DBS المزمنة المستخدمة سريريا، من أجل البساطة، ونحن لجأت إلى دراسة لمرة واحدة التحفيز عالية التردد (لمدة 1 ساعة) في النماذج الحيوانية لدينا.
ويركز الجزء من البحث مجموعتنا على التحقيق في استخدام جراحة DBS لعلاج الصرع المعالجة الحرارية. النهج الجراحية المجسم باستخدام التحفيز الترددات العالية قد تم استكشافها من قبل العديد من الآخرين كخيار فعال لعلاج الصرع طبيا الحرارية التي تشكل حوالي 30٪ من جميع حالات الصرع 10،16،17. التحفيز الدماغي استهداف السطح القشري وكذلك نواة المخيخ العميقة التي استخدمت في الماضي كأهداف لعلاج الصرع 10،18،19. وبالإضافة إلى ذلك، كما تم حاول تحفيز الحصين ولكن مع نتائج متفاوتة 20،21. بعض الآخر التحقيقوتشمل أهداف DBS لعلاج الصرع قشرة الدماغ، المهاد، نواة تحت المهاد والعصب المبهم 8. ومع ذلك، في أعقاب نتائج العديد من الدراسات في السنوات القليلة الماضية، النواة المهادية الأمامية (ATN) برز كهدف DBS الأكثر شيوعا لعلاج الصرع 10،22. على أساس المعرفة حول الدوائر تشريحي عصبي والنتائج من النماذج الحيوانية، وقد ركزت العديد من الدراسات على تأثير علاجي من التحفيز العميق للدماغ من ATN في علاج الصرع 23-26. وATN هو جزء من الدائرة الحوفي، ويقع في منطقة من الدماغ الذي يؤثر على وتيرة مصادرة. الدراسات التي حماني وآخرون، لقد اختبرت فعالية ATN-DBS في بيلوكاربين الناجم عن نموذج الصرع ووجد أن التحفيز ATN الثنائي الإختفاء عن المضبوطات التي يسببها بيلوكاربين وصرعية وضع 24 لفترات طويلة. وعلاوة على ذلك، تم العثور على التحفيز الترددات العالية من ATN للحد من وتيرة مصادرة في نموذج بنتيلين تترازول (PTZ) من الجيش الشعبيilepsy 25،27-29. وذكرت لي وآخرون، انخفاض متوسط في وتيرة مصادرة بنحو 75٪ على التحفيز العميق للمخ المزمن من ATN في علاج الصرع الجزئي صهر 30.
وقد أظهرت دراسة سريرية حديثة حول الصرع المعالجة الحرارية نتائج واعدة بعد الجراحة DBS استهداف النواة المهادية الأمامية (ATN) 22. تجربة سريرية عشوائية متعددة المراكز مع 110 المرضى الذين يخضعون DBS الثنائي من ATN لعلاج الصرع المقاوم (SANTE محاكمة) تدل على وجود انخفاض في وتيرة الاستيلاء عليها ما يقرب من 40٪ 31. ألمح النتائج من هذه الدراسة أيضا على أفضل تأثير مضاد للصرع تأخر لوحظ في 2-3 أشهر بعد الجراحة. مزيد من الدراسات قبل تودا وآخرون، تؤكده مع هذه النتائج حيث أظهرت تكوين الخلايا العصبية يحدث في وقت آخر في وقت لاحق DBS (أيام 3-5) في النماذج الحيوانية 1. وبالإضافة إلى ذلك، إنسيناس وآخرون، وأفادت neurogene الحصينجهاز الأمن والمخابرات في الماوس الكبار التلفيف المسنن بعد التحفيز الترددات العالية من ATN 32. وأفادت الدراسات السابقة 33-35 انخفاض تكوين الخلايا العصبية قرن آمون في بعض الحالات الصرع مثل الصرع المزمن الفص الصدغي وجود علاقة مع عجز التعلم، وضعف الذاكرة وعفوية المضبوطات السيارات المتكررة. وعلاوة على ذلك، كان هناك انخفاض في العوامل السلف الخلايا الجذعية العصبية مثل FGF2 وIGF-1 في قرن آمون صرع مزمنة في النماذج الحيوانية 33. النظر في هذا، والاستراتيجيات التدخلية مثل DBS التي تظهر زيادة من تكوين الخلايا العصبية في التلفيف المسنن هي السبل مثيرة للأبحاث. وقد شجعت هذه النتائج لنا لاستكشاف المزيد عميقا في الآلية الكامنة وراء العلاج تكوين الخلايا العصبية بعد DBS لعلاج الصرع. لقد استهدفت ATN على حد سواء من جانب واحد (البيانات لم تبلغ)، وكذلك على المستوى الثنائي (في نتائج تمثيلية) وينظر neurotrophin مرتفعة (BDNF) التعبير في التلفيف المسنن الفئران. لدينا جurrent الفرضية هي أن عامل التغذية العصبية التعبير يبدأ تعبير سلسلة الجين الذي يبلغ ذروته في تكوين الخلايا العصبية التي تترجم إلى تأثير مضاد للصرع من عملية جراحية DBS. في هذه الورقة، نقدم طرقنا لعملية جراحية DBS استهداف ATN في الفئران تليها تحليل التعبير الجيني كنهج جذابة لدراسة الآلية الكامنة وراء فوائد DBS.
Protocol
Representative Results
Discussion
بعد عمل معلما قبل Benabid وآخرون في استخدام التحفيز العميق للمخ لعلاج المرض والهزة الضروري باركنسون، وقد تم التحقيق في تقنية جراحية DBS باهتمام كبير خلال العقد الماضي لعلاج العديد من الاضطرابات العصبية 6،10،43. يتم إجراء دراسات DBS التي تستهدف مختلف المناطق العصب…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We are grateful for the support of the NREF foundation.
Materials
| Deep Brain Stimulation Surgery | |||
| Reagent/Equipment | Vendor Name | Catalog No. | Comments |
| Stereotactic frame | Kopf Instruments | Model 900 | |
| Drill | Dremmel | 7700, 7.2 V | |
| Scalpel | BD | 372610 | |
| Ketamine | Patterson Veterinary | 07-803-6637 | Schedule III Controlled Substance, procurement, use and storage according to institutional rules |
| Xylazine | Patterson Veterinary | 07-808-1947 | |
| Buprenorphine | Patterson Veterinary | 07-850-2280 | Schedule III Controlled Substance, procurement, use and storage according to institutional rules |
| Surgical staples | ConMed Corporation | 8035 | |
| Sutures (3-0) | Harvard Apparatus | 72-3333 | |
| Syringe (1 ml, 29 1/2 G) | BD | 329464 | Sterile, use for Anesthesia administration intraperitoneally |
| Syringe (3 ml, 25 G) | BD | 309570 | Sterile, use for Analgesia administration subcutaneously |
| Needles | BD | 305761 | Sterile, use for clearing broken bone pieces from the burr holes |
| Ethanol | Fisher Scientific | S25309B | Use for general sterilization |
| Eye Lubricant | Fisher Scientific | 19-898-350 | |
| Stimulator | Medtronic | Model 3628 | |
| DBS electrodes | Rhodes Medical Instruments, CA | SNEX100x-100mm | Electrodes are platinum, concentric and bipolar |
| Betadine (Povidone-Iodine) | PDI | S23125 | Single use swabsticks, use for sterilizing the scalp before making incision |
| Brain Dissection and Hippocampal tissue isolation | |||
| Reagent/Equipment | Vendor Name | Catalog No. | Comments |
| Acrylic Rodent Brain Matrix | Electron Microscopy Sciences | 175-300 | www.emsdiasum.com |
| Razor Blade | V W R | 55411-050 | |
| Guillotine Scissors | Clauss | 18039 | For decapitation, make sure these scissors are maintained in clean and working condition |
| Scissors | Codman Classic | 34-4098 | Use for removing the brain from the skull |
| Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72957-06 | Use for removing the brain from the skull and for handling during dissection |
| Phosphate Buffered Saline | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| RNA Extraction and cDNA Preparation | |||
| Reagent/Equipment | Vendor Name | Catalog No. | Comments |
| Tri Reagent | Sigma | T9424 | Always use in a fume hood and wear protective goggles while handling; avoid contact with skin |
| Syringe (3 ml, 25 G) | BD | 309570 | Use for tissue homogenization |
| Chloroform | Fisher Scientific | BP1145-1 | Always use in a fume hood and wear protective goggles while handling; avoid contact with skin |
| Isopropanol | Fisher Scientific | A416-1 | |
| Glycogen | Thermo Scientific | R0561 | |
| Dnase I Kit | Ambion | AM1906 | |
| Superscript First Strand Synthesis Kit | Invitrogen | 11904-018 | |
| Tabletop Microcentrifuge | Eppendorf | 5415D | |
| Quantitative PCR | |||
| Reagent/Equipment | Vendor Name | Catalog No. | Comments |
| SYBR Green PCR Kit | Qiagen | 204143 | |
| Custom Oligos | Invitrogen | 10668051 | |
| PCR Plates (96 wells) | Denville Scientific | C18080-10 | |
| Optical Adhesive Sheets | Thermo Scientific | AB1170 | |
| Nuclease free Water | Thermo Scientific | SH30538-02 | |
| Real Time PCR Machine | Applied Biosystems | 7500 | |
References
- Toda, H., Hamani, C., Fawcett, A. P., Hutchison, W. D., Lozano, A. M. The regulation of adult rodent hippocampal neurogenesis by deep brain stimulation. Journal of. 108, 132-138 (2008).
- Perlmutter, J. S., Mink, J. W. Deep brain stimulation. Annual review of neuroscience. 29, 229-257 (2006).
- Bergstrom, M. R., Johansson, G. G., Laitinen, L. V., Sipponen, P. Electrical stimulation of the thalamic and subthalamic area in cerebral palsy. Acta physiologica Scandinavica. 67, 208-213 (1966).
- Benabid, A. L., et al. Chronic electrical stimulation of the ventralis intermedius nucleus of the thalamus as a treatment of movement disorders. Journal of neurosurgery. 84, 203-214 (1996).
- Benabid, A. L., et al. Long-term electrical inhibition of deep brain targets in movement disorders. Movement disorders : official journal of the Movement Disorder Society. 13, 119-125 (1998).
- Benabid, A. L., et al. Long-term suppression of tremor by chronic stimulation of the ventral intermediate thalamic nucleus. Lancet. 337, 403-406 (1991).
- Tierney, T. S., Lozano, A. M. Surgical treatment for secondary dystonia. Movement disorders : official journal of the Movement Disorder Society. 27, 1598-1605 (2012).
- Tierney, T. S., Sankar, T., Lozano, A. M. Some recent trends and further promising directions in functional neurosurgery. Acta neurochirurgica. Supplement. 117, 87-92 (2013).
- Tierney, T. S., Sankar, T., Lozano, A. M. Deep brain stimulation emerging indications. Progress in brain research. 194, 83-95 (2011).
- Sankar, T., Tierney, T. S., Hamani, C. Novel applications of deep brain stimulation. Surgical neurology international. 3, S26-S33 (2012).
- Tierney, T. S., Vasudeva, V. S., Weir, S., Hayes, M. T. Neuromodulation for neurodegenerative conditions. Frontiers in bioscience. 5, 490-499 (2013).
- Mayberg, H. S., et al. Deep brain stimulation for treatment-resistant depression. Neuron. 45, 651-660 (2005).
- Lyons, M. K. Deep brain stimulation: current and future clinical applications. Mayo Clinic proceedings. 86, 662-672 (2011).
- Lansek, R., Morris, M. E. Ch. 4. Rehabilitation in movement disorders. , 36-43 (2013).
- Goodwin, R., Tierney, T., Lenz, F., Anderson, W., Fried, I., Rutishauser, U., Cerf, M., Kreiman, G. Ch. 15. Single Neuron Studies of the Human Brain: Probing Cognition. 15, 275-293 (2014).
- Hauser, W. A. Epidemiology of epilepsy in children. Neurosurgery clinics of North America. 6, 419-429 (1995).
- Hauser, W. A. Recent developments in the epidemiology of epilepsy. Acta neurologica Scandinavica. Supplementum. 162, 17-21 (1995).
- Davis, R., Emmonds, S. E. Cerebellar stimulation for seizure control: 17-year study. Stereotactic and functional neurosurgery. 58, 200-208 (1992).
- Levy, L. F., Auchterlonie, W. C. Chronic cerebellar stimulation in the treatment of epilepsy. Epilepsia. 20, 235-245 (1979).
- Velasco, A. L., et al. Electrical stimulation of the hippocampal epileptic foci for seizure control: a double-blind, long-term follow-up study. Epilepsia. 48, 1895-1903 (2007).
- Tellez-Zenteno, J. F., McLachlan, R. S., Parrent, A., Kubu, C. S., Wiebe, S. Hippocampal electrical stimulation in mesial temporal lobe epilepsy. Neurology. 66, 1490-1494 (2006).
- Kerrigan, J. F., et al. Electrical stimulation of the anterior nucleus of the thalamus for the treatment of intractable epilepsy. Epilepsia. 45, 346-354 (2004).
- Hamani, C., et al. Deep brain stimulation of the anterior nucleus of the thalamus: effects of electrical stimulation on pilocarpine-induced seizures and status epilepticus. Epilepsy research. 78, 117-123 (2008).
- Hamani, C., et al. Bilateral anterior thalamic nucleus lesions and high-frequency stimulation are protective against pilocarpine-induced seizures and status epilepticus. Neurosurgery. 54, 191-195 (2004).
- Mirski, M. A., Rossell, L. A., Terry, J. B., Fisher, R. S. Anticonvulsant effect of anterior thalamic high frequency electrical stimulation in the rat. Epilepsy research. 28, 89-100 (1997).
- Mirski, M. A., Ferrendelli, J. A. Interruption of the mammillothalamic tract prevents seizures in guinea pigs. Science. 226, 72-74 (1984).
- Mirski, M. A., Ferrendelli, J. A. Anterior thalamic mediation of generalized pentylenetetrazol seizures. Brain research. 399, 212-223 (1986).
- Mirski, M. A., Ferrendelli, J. A. Interruption of the connections of the mammillary bodies protects against generalized pentylenetetrazol seizures in guinea pigs. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 7, 662-670 (1987).
- Mirski, M. A., McKeon, A. C., Ferrendelli, J. A. Anterior thalamus and substantia nigra: two distinct structures mediating experimental generalized seizures. Brain research. 397, 377-380 (1986).
- Lee, K. J., Jang, K. S., Shon, Y. M. Chronic deep brain stimulation of subthalamic and anterior thalamic nuclei for controlling refractory partial epilepsy. Acta neurochirurgica. Supplement. 99, 87-91 (2006).
- Fisher, R., et al. Electrical stimulation of the anterior nucleus of thalamus for treatment of refractory epilepsy. Epilepsia. 51, 899-908 (2010).
- Encinas, J. M., Hamani, C., Lozano, A. M., Enikolopov, G. Neurogenic hippocampal targets of deep brain stimulation. The Journal of comparative neurology. 519, 6-20 (2011).
- Hattiangady, B., Rao, M. S., Shetty, A. K. Chronic temporal lobe epilepsy is associated with severely declined dentate neurogenesis in the adult hippocampus. Neurobiology of disease. 17, 473-490 (2004).
- Kuruba, R., Hattiangady, B., Shetty, A. K. Hippocampal neurogenesis and neural stem cells in temporal lobe epilepsy. Epilepsy & behavior : E&B. 14, 65-73 (2009).
- Hattiangady, B., Shetty, A. K. Implications of decreased hippocampal neurogenesis in chronic temporal lobe epilepsy. Epilepsia. 49, 26-41 (2008).
- Paxinos, G., Watson, C. . The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2007).
- Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 22DDCT Method. METHODS. 25, 402-408 (2001).
- Kells, A. P., et al. AAV-mediated gene delivery of BDNF or GDNF is neuroprotective in a model of Huntington disease. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. 9, 682-688 (2004).
- Han, B. H., Holtzman, D. M. BDNF protects the neonatal brain from hypoxic-ischemic injury in vivo via the ERK pathway. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 20, 5775-5781 (2000).
- Hetman, M., Kanning, K., Cavanaugh, J. E., Xia, Z. Neuroprotection by brain-derived neurotrophic factor is mediated by extracellular signal-regulated kinase and phosphatidylinositol 3-kinase. The Journal of biological chemistry. 274, 22569-22580 (1999).
- Stadelmann, C., et al. BDNF and gp145trkB in multiple sclerosis brain lesions: neuroprotective interactions between immune and neuronal cells. Brain : a journal of neurology. 125, 75-85 (2002).
- Treiman, D. M. GABAergic mechanisms in epilepsy. Epilepsia. 42, 8-12 (2001).
- Benabid, A. L., Pollak, P., Louveau, A., Henry, S., de Rougemont, J. Combined (thalamotomy and stimulation) stereotactic surgery of the VIM thalamic nucleus for bilateral Parkinson disease. Applied neurophysiology. 50, 344-346 (1987).
- Laxton, A. W., et al. A phase I trial of deep brain stimulation of memory circuits in Alzheimer’s disease. Annals of. 68, 521-534 (2010).
- Tierney, T. S., Abd-El-Barr, M. M., Stanford, A. D., Foote, K. D., Okun, M. S. Deep brain stimulation and ablation for obsessive compulsive disorder: evolution of contemporary indications, targets and techniques. The International journal of neuroscience. 124, 394-402 (2014).
- Kennedy, S. H., et al. Deep brain stimulation for treatment-resistant depression: follow-up after 3 to 6 years. The American journal of psychiatry. 168, 502-510 (2011).
- Lozano, A. M., et al. Subcallosal cingulate gyrus deep brain stimulation for treatment-resistant depression. Biological psychiatry. 64, 461-467 (2008).
- Ackermans, L., et al. Double-blind clinical trial of thalamic stimulation in patients with Tourette syndrome. Brain : a journal of neurology. 134, 832-844 (2011).
- Houeto, J. L., et al. Tourette’s syndrome and deep brain stimulation. Journal of neurology, neurosurgery, and psychiatry. 76, 992-995 (2005).
- Maciunas, R. J., et al. Prospective randomized double-blind trial of bilateral thalamic deep brain stimulation in adults with Tourette syndrome. Journal of neurosurgery. 107, 1004-1014 (2007).
- Koning, P. P., Figee, M., van den Munckhof, P., Schuurman, P. R., Denys, D. Current status of deep brain stimulation for obsessive-compulsive disorder: a clinical review of different targets. Current psychiatry reports. 13, 274-282 (2011).
- Greenberg, B. D., et al. Deep brain stimulation of the ventral internal capsule/ventral striatum for obsessive-compulsive disorder: worldwide experience. Molecular psychiatry. 15, 64-79 (2010).
- Muller, U. J., et al. Successful treatment of chronic resistant alcoholism by deep brain stimulation of nucleus accumbens: first experience with three cases. Pharmacopsychiatry. 42, 288-291 (2009).
- Zhou, H., Xu, J., Jiang, J. Deep brain stimulation of nucleus accumbens on heroin-seeking behaviors: a case report. Biological psychiatry. 69, e41-e42 (2011).
- Porta, M., et al. Thalamic deep brain stimulation for treatment-refractory Tourette syndrome: two-year outcome. Neurology. 73, 1375-1380 (2009).
- Younce, J. R., Albaugh, D. L., Shih, Y. Y. Deep brain stimulation with simultaneous FMRI in rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. , e51271 (2014).
- Park, P. J. ChIP-seq: advantages and challenges of a maturing technology. Nature reviews. Genetics. 10, 669-680 (2009).
- Valouev, A., et al. Genome-wide analysis of transcription factor binding sites based on ChIP-Seq data. Nature methods. 5, 829-834 (2008).
- Fiore, R., Siegel, G., Schratt, G. MicroRNA function in neuronal development, plasticity and disease. Biochimica et biophysica acta. 1779, 471-478 (2008).
- Hebert, S. S., De Strooper, B. Alterations of the microRNA network cause neurodegenerative disease. Trends in neurosciences. 32, 199-206 (2009).
