巨噬细胞胆固醇消耗及其对的吞噬作用<em>新型隐球菌</em

吞噬作用是由细胞外的实体是由宿主细胞内化的过程。它是在免疫系统中的武器库，以对抗病原体保卫一个关键武器，但该过程可以经常由病原体被颠覆，以允许内化和整个主体¹传播。吞噬作用是由导致通过宿主细胞的细胞骨架的重排附着和吞噬几个信号传导事件介导的。职业“吞噬细胞能够识别和结合调理素的入侵病原体的表面上的信号用于附着和形成片状伪足的，其吞噬的病原体，并形成吞噬体^2。其中所谓的'专业'吞噬细胞巨噬细胞是。巨噬细胞是高度特化的细胞即进行保护的功能包括寻找和消除致病剂，修复受损的组织，并介导的炎症，大多数的这些通过吞噬^1,2的过程。

新生隐球菌是一个物种致病酵母导致称为隐球菌一个严重的疾病。 隐球菌孢子由主机吸入并导致肺部感染，通常是无症状的。据认为，曝光是极为普遍;对61名儿童从儿科传染病诊所在布朗克斯-黎巴嫩医院中心发现，所有的受访者有抗体的隐球菌多糖glucuronoxylomannan和其他研究的样本表明患病率在人类免疫缺陷病毒（HIV）感染和感染的成人^{3， 4。}肺泡巨噬细胞是响应于肺部感染，并且在大多数情况下，成功地明确病原体的第一道防线。然而，在免疫受损的个体（ 例如，HIV和AIDS患者）的酵母是能够在巨噬细胞内生存。在这些的情况下，巨噬细胞可以作为利基病原体的复制，并且可以促进其传 ​​播到中枢神经系统（CNS），其中该疾病成为致命^{5 – 8。}据认为，巨噬细胞可能甚至直接传递到酵母脑膜，帮助酵母通过“木马”的模式^3,9穿过血脑屏障^{– 11。}因此，为了理解吞噬的过程和影响它，特别是在隐球菌感染的因素是很重要的。

以前的工作在其它病原体系统指向由胆固醇作为具有重要作用，吞噬¹²发挥形成胆固醇和脂质筏^{– 15。}胆固醇是最丰富的脂类物质在哺乳动物细胞中，并包括25 -哺乳动物细胞膜¹⁶的50％。已经发现，以在调节BIOP发挥作用膜通过改变其刚性物质环境的¹⁷性质。胆固醇和鞘脂在一起形成被称为脂筏在膜中的脂质微区。脂筏已经发现涉及在地层中的小窝，以及提供一个分离的结构域对某些类型的信号^{16 – 18。}由于它们的尺寸小，它是很难研究脂质筏体内 。研究脂筏的作用的一个有用的方法是改变他们的选民。甲基β环糊精（MβCD）是已被发现从哺乳动物细胞膜耗尽胆固醇，通常用于研究脂质筏¹⁸的作用的化合物。

在这个协议中，我们提出了一个方法，以消耗从宿主细胞膜胆固醇并量化对宿主细胞的吞噬C的能力的耗尽的效果隐球菌体外 。此过程使用了细胞培养techniqUE的像细胞（J774A.1）作为模型感染的巨噬细胞的永生。胆固醇耗竭被完成通过暴露于MβCD，其具有特定的甾醇的尺寸的疏水性芯，并且能够充当胆固醇绘制出来的膜¹⁹的一个接收器。定量用市售试剂盒和定性使用改良的Bligh-Dyer的脂质提取，随后用薄层色谱法^（TLC）20胆固醇耗竭进行测定。 ^{23 –}吞噬被感染与调理的酵母与干扰素γ和脂多糖的鸡尾酒激活巨噬细胞混合培养的细胞系测量隐球菌是使用glucuronoxylomannan（GXM）抗体²¹调理。染色和显微镜实验允许的细胞可视化和吞噬指数的计算，以评估细胞吞噬的程度。综上所述，该协议ðescribes集成脂质组合物具有的生理过程的改变的基本方法。