Процедура имплантации спинного палату для продольных<em> В Vivo</em> Визуализация мозга мыши спинного

ПРИМЕЧАНИЕ: уход и экспериментальные манипуляции всех мышей в этой статье был одобрен Комитетом по Уходу за животными и использованию Корнельского университета по. 1. Настройка для хирургии Стерилизовать все необходимые инструменты с использованием автоклава или утвержденные процедуры стерилизации. Как минимум, включать скальпель, ножницы, Ванна ножницы, пинцеты, отвертки ювелира, ватные тампоны, набор преднатяжителями, имплантат (рис 1а) и свою систему доставки (рис 1D, E). Протрите все поверхности, включая любые стереоскоп ручек, с 70% этанола и / или соответствующими дезинфицирующими средствами. Создать стерильное поле путем наложения пользовательского stereotax (рис 1D) и окружающих настольный с стерильными пеленками. Грелку (предпочтительно обратной управлением) должны быть размещены на верхней части и под stereotax стерильных шторы. 2. Подготовкамышь для хирургии Обезболить мышь под 5% ИФ / кислорода в индукции камеры до частоту дыхания замедляется примерно 1 дыхания / сек. Перевести курсор в область установки от стерильной зоне, используя носовой конус, чтобы продолжить ИФ экспозиции. Сокращение изофлурана до 2%. Применить глазную мазь, чтобы предотвратить роговицы сушки. Администрирование гликопирролат (антихолинергического препарата) на 0,05 мг / 100 г мыши внутримышечно в задних конечностей с использованием 29 – 30 г иглы и 3/10 куб.см шприц, обеспечивая примерно 50% от объема инъекции в конечность. ПРИМЕЧАНИЕ: Glycopyrrolate служит для предотвращения накопления жидкости в легких, а мышь находится под наркозом. Использование электрическими машинками для стрижки, бритья часть спинной части мыши, длиной около 3 см и 2 см в ширину и по центру грудной дуги. Очистите обрезанную волосы подальше от бритой области. Администрирование следующие инъекции подкожно и дистальнее побрилсяпатч с использованием 29 – 30 г иглы и шприцы 3/10 куб.см: 1 мл / 100 г мыши 5% глюкозы в солевом растворе (для гидратации), 5 мг / кг кетопрофена мыши (НПВС для обезболивания), 0,2 мг / кг дексаметазона мыши ( противовоспалительным стероидом для уменьшения воспаления). Используя ватные тампоны, выполнить три чередующихся промывок йода и 70% этанола, в ожидании 1 мин между промывками. Администрирование 100 мкл 0,125% бупивакаина (периферической нервной блокады) подкожно с использованием 29 – 30 г иглы и шприца 3/10 куб.см до центра бритой пластыря для уменьшения боли в месте разреза. Передача мыши на таможенную stereotax (рис 1D), вставьте ректального термометра, и подождите примерно 10 минут для бупивакаина вступили в силу. 3. Expose и очистить Спинной пластинок 3 смежных грудных позвонков Использование лезвие скальпеля, создать небольшой (5 мм или меньше) разрез над позвонков интереса (рис 2а). <li> Использование либо пинцетом или вставив кончик хирургическими ножницами и распространения ручки, увеличить размер отверстия в коже под тупым. Использование скальпеля или хирургические ножницы, аккуратно отделить соединительную панель между кожей и подлежащей мышцы. Используйте преднатяжителями, чтобы сдержать кожу, позволяя как большой рабочей зоной, насколько возможно (рис 2b). Позаботьтесь, чтобы не увеличивать нагрузку на грудь и, таким образом, препятствуют дыханию. Используя пару щипцов, ручки ростральная-самых позвонка, которые будут доступны через вышележащие мышцы. Используя скальпель, сократить расстояние ткани по обе стороны от процесса спинного от всех 3 позвонков (фиг.2с). Использование любую комбинацию лезвие скальпеля, ватные тампоны и / или костного скребок, удалите все, покрывающий ткань от спинного пластинки (рис 2D). Использование хирургические ножницы, тщательно вырезать сухожилия, прикрепленные к позвоночнику по обе Lateraл края позвоночного столба (рис 2Е). Используя скальпель, аккуратно удалить как можно больше ткани из боковых краев позвоночника, насколько это возможно, с тем, чтобы обеспечить чистую поверхность зажимной. Аккуратно предотвращать позвонки любого оставшегося мягких тканей с помощью скребка кости и / или ватный тампон. Обрежьте любой нелепый ткани в другом месте, используя хирургические ножницы (рис 2F). ПРИМЕЧАНИЕ: Это необходимо как для крепления и выполнения спинной ламинектомию, что позвонки чисто подвергаются. Cauterizer может быть полезным в контроле последующее кровотечение. Сдвиг преднатяжителями, чтобы сдержать ткани, окружающие позвоночник, в дополнение к коже (рис 2F). Прикрепите имплантатов боковые планки для вилок на столбах доставки и загрузите их в пост-владельцев (как показано на рисунке 1E). Зажмите 3 позвонков с использованием сторону бара, применяя достаточно просто давление на проведение securelу (рис 2G, H). Используйте пинцет, чтобы помочь обеспечить уровень зажим 3 позвонков. Следует отметить, что несколько попыток может быть необходимым. Убедитесь, что боковые бары и уровень и параллельно до выполнения ламинектомию. Тщательно очистите и высушите спинной поверхности зажатой позвонков с использованием ватные тампоны. 4. Выполните Спинной Ламинэктомия Вставьте кончики Vännäs ножницами в эпидуральное пространство медиальной зажатой позвонка и сожмите ручки слегка; Если кость сухой, она должна трещины вдоль спинной пластинки. Повторите эту процедуру на противоположной стороне, чтобы освободить пластинку. Аккуратно сжимая свободную пластинку с помощью процесса спинной щипцами, осторожно срезать любой соединительной ткани в ростральных и хвостовых концов пластинки и снимите ее. Использование 0,9% раствора и / или искусственного спинномозговой жидкости (ACSF), тщательно смыть любую overlyi кровинг спинной мозг. Используйте ватные тампоны, чтобы поглотить лишнюю жидкость. Использование Vännäs ножницы, тщательно обрезать боковые края кости обратно в сторону бара имплантата. Опять же, смыть и контролировать кровотечение с помощью ватных тампонов и физиологический раствор / ACSF. В том случае, если часть надкостницы отключил и перекрывает спинного мозга, осторожно удалить эту ткань с помощью ватные тампоны и / или 29 – 30 G иглу. Позаботьтесь, чтобы не повредить спинной мозг в этой части процедуры. Не путайте свободный надкостницы с плотно завернутые твердой мозговой оболочки. Осторожно, печать оставшиеся открытыми краями кости с одной или обеих зубной акриловой и цианоакрилат (рис 2i). Соблюдайте особую осторожность, чтобы не допустить клеи течь на открытую спинного мозга. 5. Печать палата Установите верхнюю пластину тщательно, чтобы 4 слота линии с 4 отверстиями на боковых полос и открытие перекрывает открытую спинуаль шнур (рис 1B и 2J). Использование отвертки ювелира, осторожно начинают первый винт, стабилизируя вал отверткой с другой парой щипцов. Не затягивайте винт на этом этапе, но вставьте его так, что первые несколько нитей заняты. Повторите эту процедуру для других 3 винтами. ПРИМЕЧАНИЕ: Это полезно использовать титан или другие не намагничиваемые щипцы, чтобы помочь положении винты на данном этапе. Со всеми 4-мя винтами в месте, затяните каждый винт попеременно на ту же сумму с небольшим шагом, пока винт не надежно закреплены (рис 2K). Обратите внимание, что это не является необычным для верхней пластины, чтобы продемонстрировать в ходе этого процесса. Будьте осторожны, не затягивайте винты слишком сильно, так как головка винта может сломаться и чрезмерное понижательное давление будет выбить фиксатор и / или привести к травме спинного мозга. Использование силиконового эластомера, чтобы заполнить пространство между спинного мозга и оконное стекло. Потому что ланьы не производят уксусную кислоту в процессе отверждения, используйте KwikSil бренда эластомера и канюли для смешивания. Нанесите обильный часть силикона к открытой спинного мозга. Позаботьтесь, чтобы избавиться от любых кремнийорганических, содержащей пузырьки воздуха из кончика смешивания перед нанесением на спинном мозге. Работа быстро, аккуратно нажмите 5 мм # 0 покровное в вставке в верхней пластине. Применение достаточное давление, чтобы сжать постепенно жидкого эластомера окружать спинной мозг, но не приведет к компрессии спинного мозга (фиг 2L). Установка времени для эластомера составляет около 90 сек, поэтому убедитесь, что покровное быстро применить. В случае неудачной уплотнения, подождите, пока эластомер не установлен, аккуратно извлеките ее из имплантата с щипцами, и повторите 5,4 – 5,5. Крышка края отделившегося эластомера с зубной акриловой / цианоакрилат и прилипать к окружающей кости как можно больше, чтобы предотвратить эластомера от сдвига по поверхности спинного мозга. Удалить преднатяжителями и подтягивает кожу вокруг края имплантата. Использование Цианоакрилат, придерживаться кожу краев имплантата (рис 2М, N). Вставьте # 0-80 – 1/4 "установочные винты в крыльях верхней пластины (рис 1c и 2 O). Использование зубной акрил, закрыть все пробелы в винтовых пазах верхней пластины (рис 2P). 6. Послеоперационный период Удалить животное от анестезии и место в большом чистом клетке. Убедитесь, что клетка является достаточно большой, что камера не будет поймать на чем-нибудь (например, V-образный провал для бутылки с водой и / или пищевых продуктов) в ходе нормального передвижения по всей клетке. ПРИМЕЧАНИЕ: стандарт крыс клетки является идеальным. Поставьте клетку на нагретой поверхности, а животное выздоравливает. Не вернуть мышь в компании других животных, пока он полностью восстановился. Проверьте животных БехаВИОР в 1 – 2 ч послеоперационного для признаков боли или страдания и имплантатов целостности. ПРИМЕЧАНИЕ: При нормальных условиях, животное должно иметь возможность передвигаться со скромными возмущений к движению. Продолжайте проверять животному все 8 – 12 ч в течение первого 72 часов, измерения веса и контроль поведения. Убедитесь, что животные активны и подвижны в течение ночи. Влажные корма в виде земли чау смешан с водой или пищевыми гелей, чау гранулы, и питьевая вода должна быть предоставлена ​​на уровне земли. Дополнительные гидратации путем подкожных инъекций или intraperiotoneal должна быть обеспечена в случае необходимости. Администрирование 5 мг / кг кетопрофен мыши и 0,2 мг / кг подкожно мыши дексаметазона через 24 и 48 ч моменты времени, в послеоперационном периоде. Кроме того, 0.005-0.010 мг / 100 г мыши следует вводить каждые 8 ​​ч в виде подкожных инъекций в течение 72 ч. 7. В естественных изображений Обезболить мышь под5% ИФ / кислород в индукции камеры до частоту дыхания замедляется до примерно 1 дыхания / сек. Перевести курсор на таможенную stereotax (рис 1D) с обратной контролируется грелку и вставьте ректального термометра. Сокращение изофлурана до 2%. Администрирование Glycopyrrolate 0,05 мг / 100 г мыши внутримышечно в задних конечностей с использованием 29 – 30 г иглы и 3/10 куб.см шприц, обеспечивая примерно 50% от объема инъекции в конечность. Администрирование 1 мл / 100 г мыши 5% глюкозы (для гидратации) подкожно один раз в солевом растворе в ч. Вставьте резьбовые держатели камеры в пост-владельцев используемых для хирургии (рис 1F). Отрегулируйте высоту и крутить сообщения на установочных винтов в верхней пластине. В обоих держатели присоединены, поднять держателей в пост-владельцев, пока в груди не может свободно расширяться на вдохе. ПРИМЕЧАНИЕ: Оба фирма прикрепление владельцев и свободное расширение грудной клетки significanTLY уменьшить артефакты движения, вызванные дыханием. Выполните визуализацию как хотелось бы. При визуализации завершена, нижняя сообщений, откручивать держатели камеры, снимите ректального термометра, и переместить мышь на нагретой поверхности, чтобы оправиться. Не вернуть мышь в компании других животных, пока он полностью восстановился.