在斑马鱼幼虫脊髓横断
Summary
脊髓横断后，成年斑马鱼具有功能恢复六个周后，损伤。要利用幼虫的透明度，恢复快的，我们提出了横断幼虫脊髓的方法。横断后，我们通过后3天观察伤感觉恢复在开始后2天伤，和C-弯曲运动。
Abstract
脊髓损伤是由于缺乏低于损伤水平轴突再生，以及为无法重新开始脊髓神经发生下列哺乳动物失败的感觉和运动恢复。然而，一些anamniotes包括即使在脊髓完全切断了斑马鱼表现出感觉和功能恢复。成年斑马鱼是一个既定的模式生物再生研究脊髓损伤后，用感觉和运动恢复6周后受伤。要利用体内分析的再生过程中的透明斑马鱼幼虫可用以及遗传工具的成人无法访问，我们用斑马鱼幼虫脊髓横断后，研究再生。在这里，我们展示了一种可重复和可核查的横切幼虫脊髓。横断后，我们的数据表明感觉恢复在开始后2天伤（DPI），机智h时的C-弯曲运动检测的3 DPI和恢复自由游泳5 DPI的。因此，我们提出了斑马鱼幼虫作为一个配套工具的成年斑马鱼来进行恢复脊髓损伤后的研究。
Introduction
重大创伤人类脊髓常常导致永久性瘫痪和下面损伤水平感觉丧失，由于无法再生的轴突或重新开始神经发生1,2。相反，哺乳动物，但是，anamniotes包括蝾螈和斑马鱼（ 斑马鱼 ），即使完全脊髓横断3,4展现强劲复苏。
成年斑马鱼是一种行之有效的模式，研究恢复过程脊髓损伤5-7。下面的完整脊髓横断，感觉和机车功能重建是在成年斑马鱼6周后，受伤8观察。为了检查体内的再生过程中，我们转向透明斑马鱼幼鱼9。
在这里，我们提出了一个方法来样带5天后受精（DPF）的斑马鱼幼虫USI脊髓纳克斜面显微注射移液管的手术刀，从哈特改性等人 10此方法支持高吞吐量，低死亡率，和可再现性。通过练习，幼虫300 /小时，可横切，和6个月以上个断面，其中包括超过3,600动物，98.75％±0.72％存活，直到后7天损伤（DPI）。我们的数据显示感官和运动的快速恢复，以及：1 dpi时，所有的运动者受伤的鱼只由胸鳍运动驱动。然而，幼虫开始响应由2 dpi至钨针尾触摸到横断，重新建立C-弯曲的移动由3 DPI，并通过5 dpi 11个图显示掠夺游泳。使用抗乙酰化微管蛋白抗体染色，我们已经证实，轴突是从损伤部位在1 dpi的缺席，但拥有5 DPI越过损伤部位。我们相信，该协议将提供宝贵的技术轴突再生和神经在脊髓损伤后的研究。 </p>
Protocol
Representative Results
Discussion
当最初学习这个技术，我们建议尝试在单个会话不超过50-100个断面。掌握这一技术后，我们能够横切高达每300小时的胚胎;然而，吞吐量这个级别需要每周练习了几个月。我们还建议实行带记者一行和验证完整的横断直到不完全性脊髓横断伤的发生率降低到1％以下。
在成年斑马鱼脊髓横断是一个行之有效的和强大的技术研究轴突再生和神经损伤后。通过将这种分析成幼虫生物…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢犹他大学的斑马鱼设施畜牧业。 RID是由美国国立卫生研究院R56NS053897支持，以及LKB是由霍华德休斯医学研究所医学 – 到 – 毕业倡议支持的博士前受训者。
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| 60mm petri dish | VWR | 82050-544 | |
| 100mm petri dish | VWR | 89038-968 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| borosilicate capillary tubing: OD 1.00mm ID 0.78mm | Warner Instruments Inc. | 64-0778 | |
| forceps | Fine Scientific Tools Inc. | 11252-30 | |
| disssection microscope | Nikon | SMZ6454 | |
| microgrinder | Narishige | EG-44 | |
| Gentamycin Sulfate | Amresco Inc. | 0304-5G | dissolve in water 10mg/ml, store at -20°C |
| Tricaine | Acros Organics | 118000100 | |
| cotton tipped applicator, wood, 6-inch | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| 1ml syringe | BD | 309625 | |
| 27 ga. needle | BD | 305109 | |
| Fry food | Argent Labs | F-ARGE-PTL-CN | store at -20°C |
| micropipette puller | Sutter Instrument Co. | Model P-97 | Box Filament FB330B |
| 20x E2 (1L) | store at RT | ||
| 17.5g NaCl | Fisher Scientific | S671-500 | |
| 0.75g KCl | Fisher Scientific | P217-500 | |
| 2.90g CaCl2·2H2O | Sigma | C7902-500G | |
| 4.90g MgSO4·7H2O | Merck | MX0070-1 | |
| 0.41g KH2PO4 | Fisher Scientific | P285-500 | |
| 0.12g Na2HPO4 | Sigma | S0876-500G | |
| 500x NaCO3 (10ml) | make fresh, discard extra | ||
| 0.35g NaCO3 | Sigma | S5761 | |
| 1x E2 (1L) | store at RT | ||
| 50ml 20x E2 | |||
| 2ml fresh 500x NaCO3 |
References
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