角膜微囊含量：血管生成在小鼠眼模型

血管生成的过程中，新血管的形成，形成预先存在的那些，是非常复杂的，并通过控制不同的步骤血管出芽和形态发生的几内源性因子的调节。血管生成是由于亲和抗血管生成因子之间的转变，平衡，通常保持在静止状态下的脉管系统的平衡被触发。血管发生在成人中发生一定的生理条件，如女性卵巢周期期间或在维修过程中如伤口愈合和组织再生。然而，它也是几种病状，包括恶性肿瘤，自身免疫性疾病和炎症性疾病的标志。血管生成的这些生理和病理条件下参与使得它对于研究和治疗的一个有吸引力的目标的一个重要课题。

由于血管发生的复杂性和几种策的参与LLS和因素的过程中，包括内皮细胞，周细胞，循环细胞和基质细胞， 在体外模型中仍是有限的，不能概括的唯一的体内微环境。 在血管生成的体外测定法的主要在很大程度上集中于观察对内皮细胞的直接影响和控制的条件下测量在血管生成过程中的某些步骤。这些测定法包括内皮细胞的增殖^1，迁移^2，网络形成^三管形成⁴的量化，并从球状体⁵发芽。 体外模型，不同的是在体外的人，都比较复杂并包含多种组织类型的细胞，一个例子是主动脉环测定法^6。然而，像其他系统，它不能在体内存在的捕获循环细胞和贡献内皮细胞的天然基质。尝试研究根据流量的血管生成模拟体内环境使用微流体系统⁷中执行，但即使是这些试验中，虽然大大改善，仍无法考虑到所有存在于体内的车厢。

由于在体外和离体血管生成模型中，限制在体内模型仍然是血管生成的研究更可靠的选择。这些模型的实例包括透明腔室，“窗口”，即允许的生长血管显微镜⁸下的可视化的植入剂，注射皮下植入物，如基质胶和血管形成中的正常组织，如小鼠耳和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM ）。然而，最可接受的和定量的体内血管生成的模型之一是在此描述的角膜微囊新血管形成测定法，其利用了自然股骨头缺血性角膜作为一个“屏”的可视化和评估新的血管生长^9。

在这里，我们描述了角膜微囊测定作为开发中的小鼠。最初的模型被用来测量在兔角膜的非特异性血管生成的刺激。这是通过引入肿瘤块放入兔眼的前房的前房进行测定和肿瘤诱导的血管生成^11。

然而，该法后来演变来研究特定生长因子的影响^10，以更好地说明和规范血管生成作用。为了释放生长因子在眼内，来代替组织中含有已知量的血管生成生长因子的缓释颗粒。纯化的重组血管生成蛋白如的bFGF或VEGF的可用性使他们的血管生成modulaters ¹²的具体目标使用。最初，该测定是主要用于在兔，这是更容易使用，因为它们的大小，但后来的模型被翻译成小鼠正常工作;更小和更便宜的动物模型。从兔转移到小鼠的效果是：能够使用遗传操作的动物，从而产生一个新的研究领域进入遗传组分影响血管¹³的一个重要优点。除了角膜法的研究血管生成的多种可接受的使用，其他的生物学过程，也被用改性试验研究。例如，淋巴管生成的研究，通过低剂量的bFGF球团这使淋巴管，通过特定的分子标记¹⁴的可视化的植入能够成为可能。此外，该测定中提供了评估血管生成¹⁵辐射的影响的装置。

在总结中，角膜微囊血管生成分析是定量的，代表roducible，血管生成的体内灵活的评估。该测定的主要优点是，背景血管测量是不必要的，因为血管生长在天然无血管组织。我们在这里描述这个实验的详细协议，并讨论可能出现不同的情况。该试验由3离散区段。在这里，我们将描述的生长因子包括粒料用于量化所得到的新血管生长的制备，随后的外科手术植入，最后的方法。