分离<em>恶性疟原虫</em>晚期感染的红细胞由磁性装置
Summary
顺磁性质的疟原虫色素是用来隔离后期阶段<em>恶性疟原虫</em>感染的红血细胞在培养皿中生长。该方法简单，快速，不影响后续的寄生虫的侵袭能力。
Abstract
与其他种类的疟原虫，P.恶性疟原虫可以在实验室中培养，这有利于研究1。虽然原虫能够达到≈40％的限制，研究者通常的比例保持在10％左右。在许多情况下，它是必要的隔离含寄生虫的红血细胞（红细胞）来自未感染的，以丰富的文化和继续进行，一个给定的实验。
当P.恶性疟原虫感染的红细胞，寄生虫降解和，馈送来自血红蛋白的2，3。然而，寄生虫必须处理的一个非常有毒的含铁血红素部分4，5。寄生虫逃避其毒性称为haemozoin 6，7成惰性液晶聚合物通过转化的血红素。此含铁分子被存储在其食物泡和在它的金属有一个从一个在血红素8中不同的氧化状态。血红素铁的铁状态ozoin赋予它在未受感染的红细胞没有一个顺磁性。作为入侵的寄生虫成熟，的haemozoin含量也增加9，赋予更顺磁性的 P上的最新的阶段恶性疟原虫红细胞内。
基于此顺磁性，最新的阶段P.恶性疟原虫感染的红血细胞可通过一列含有磁珠通过培养分离。这些珠粒成为磁性的磁体保持器时，被放置在含有它们的列。感染的红细胞，由于其顺磁性，然后将被媚惑列，而将包含流过，在大多数情况下，未感染的红细胞和那些含有早期阶段的寄生虫。
在这里，我们描述的方法，以丰富的人口后期寄生虫与的磁性列，保持着良好的寄生虫可行性10。在执行此过程，独立的文化可以返回一个孵化器，让剩余的寄生虫将继续增长。
Protocol
所有步骤的协议，除了离心，应进行发动机罩内保持无菌样品。 1。后期分离P.恶性疟原虫感染的红细胞疟原虫感染的红细胞的所有阶段的后期，可以用这种方法，分离自疟原虫色素，赋予对寄生虫的顺磁性，是一种常见的代谢物的属。甲高原虫（3-10％），建议在培养以获得更好的产率与该协议，虽然典型的培养将包含2-4％的血细胞比容（体积的红?…
Representative Results
在图2中，示出的磁性列通过培养之前，（A）和（B）后的程序。一到两个感染的红细胞通常出现在一个放大100倍的字段，如在图2中所示，在图2A中的感染的红细胞上，箭头指向。在一个典型的过程中，在5％的寄生虫血症（ 图2A）与培养开始时，此过程的性能，通常会产生红细胞与原虫的97％-100％（ 图2B）。?…
Discussion
在体外培养的疟疾寄生虫P.疟原虫表现出有限的原虫，超过一半的未感染的红血细胞，在最高的增殖培养点。对于大多数的研究实验中，它是理想的工作只与感染的红细胞。为此，一个分离的技术是必要的划分所述培养感染。有用的方法包括使用的链球菌溶血素O，以透性和lyze的未感染RBC 11和一系列利用两组不同密度的变化的差离心。这些方法的一些包括明胶浮选12?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由授予PRB-009，CS，博士生奖学金，LC，从国家的秘书CIENCIAŸTECNOLOGIA（SENACYT），巴拿马。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| RPMI 1640 Hepes Modified | Sigma-Aldrich | R4130 | Supplemented with 10% human serum, 2% glucose, and 0.2% sodium bicarbonate |
| MidiMACS Separator | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-302 | |
| MACS MultiStand | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-303 | |
| LS Columns | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-401 | |
| Hemacytometer | Grafco | Grafco Neubauer Chamber | Can be found through many other suppliers |
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Citer Cet Article
Coronado, L. M., Tayler, N. M., Correa, R., Giovani, R. M., Spadafora, C. Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means. J. Vis. Exp. (73), e50342, doi:10.3791/50342 (2013).