एक<em> इन विट्रो में</emमानव बृहतभक्षककोशिका भेदभाव और ध्रुवीकरण की विविधता का अध्ययन करने के> मॉडल
Summary
Monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के महत्वपूर्ण कोशिकाओं रहे हैं. यहाँ, हम एक आसान उपयोग करने का वर्णन<em> इन विट्रो में</emइन कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए> मॉडल. ढाल centrifugation, नकारात्मक मनका अलगाव और विशेष सेल संस्कृति शर्तों का प्रयोग, monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज प्ररूपी और कार्यात्मक अध्ययन के लिए उत्पन्न किया जा सकता है.
Abstract
Monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज सहज प्रतिरक्षा प्रणाली का एक महत्वपूर्ण सेल प्रकार का प्रतिनिधित्व करते हैं. बृहतभक्षककोशिका जीव विज्ञान का अध्ययन माउस मॉडल murine और मानव monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज के बीच प्ररूपी और कार्यात्मक अंतर से पीड़ित हैं. इसलिए, हम यहां प्राथमिक मानव मैक्रोफेज पैदा करते हैं और अध्ययन करने के लिए इन विट्रो मॉडल में एक वर्णन है. संक्षेप में, एक बांह की कलाई की नस से तैयार परिधीय रक्त का घनत्व ढाल centrifugation के बाद, monocytes नकारात्मक चुंबकीय मनका अलगाव का उपयोग कर परिधीय रक्त mononuclear कोशिकाओं से अलग कर रहे हैं. ये monocytes तो बृहतभक्षककोशिका भेदभाव या ध्रुवीकरण के विभिन्न प्रकार के प्रेरित करने के लिए विशेष परिस्थितियों में छह दिनों के लिए सुसंस्कृत हैं. मॉडल का उपयोग करने के लिए आसान है और माउस और आदमी के बीच प्रजाति विशेष के मतभेदों की वजह से समस्याओं circumvents. इसके अलावा, यह अमर सेल लाइनों का उपयोग की तुलना में vivo परिस्थितियों में करने के लिए करीब है. अंत में, यहाँ वर्णित मॉडल macrophag अध्ययन करने के लिए उपयुक्त हैई जीव विज्ञान, रोग तंत्र और उपन्यास चिकित्सकीय लक्ष्यों की पहचान. हालांकि पूरी तरह से पोस्टमार्टम प्राप्त पशु या मानव ऊतकों के साथ प्रयोगों की जगह नहीं है, यहाँ वर्णित मॉडल रोग तंत्र और विभिन्न मानव रोगों के लिए प्रासंगिक हो सकता है कि चिकित्सकीय लक्ष्यों की पहचान और सत्यापन की अनुमति देता है.
Introduction
Monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज सहज प्रतिरक्षा प्रणाली का एक महत्वपूर्ण सेलुलर घटक का प्रतिनिधित्व करते हैं और कई तीव्र या जीर्ण सूजन प्रक्रियाओं 1 के लिए योगदान करते हैं. मैक्रोफेज atherosclerosis या कैंसर 2 की तरह कई भड़काऊ रोगों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. मैक्रोफेज plasticity के एक उच्च डिग्री दिखाने के लिए और स्थानीय micromilieu 3 के आधार पर अलग phenotypes को ग्रहण करने में सक्षम हैं. इस प्रकार, बृहतभक्षककोशिका भेदभाव और विविधता का अध्ययन कर कई रोगों के pathophysiology के हमारे ज्ञान को बढ़ाने के लिए आवश्यक है और उपन्यास चिकित्सकीय लक्ष्यों और उपन्यास के उपचारों के विकास की पहचान की अनुमति के लिए.
कई मामलों में, murine मॉडल विशिष्ट रोगों के pathophysiology जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है. हालांकि, माउस मॉडल का उपयोग बृहतभक्षककोशिका जीव विज्ञान का अध्ययन कई कमियों के साथ है: (1) perip में ल्युकोसैट सबसेट संख्या के अनुपात में (यानी monocytes और granulocytes)चूहों या मनुष्य की heral खून काफी murine और मानव pathophysiology में monocytes की विभिन्न भूमिकाओं का सुझाव अलग है. (2) स्वास्थ्य और रोग 4 के दौरान उनके कार्य में काफी मतभेद सुझाव murine और मानव परिधीय रक्त monocytes के बीच जीन की अभिव्यक्ति में काफी मतभेद हैं. (3) मानव स्थिति के लिए माउस मॉडल में निष्कर्ष के हस्तांतरण के बजाय कठिन बना रही है, मानव माइलॉयड कोशिकाओं में मौजूद नहीं है murine monocytes और मैक्रोफेज (F4/80, Lyc, आदि.) की पहचान करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं कि मार्कर के एक नंबर.
इस प्रकार, मानव रोग में बृहतभक्षककोशिका भेदभाव और विविधता के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने के क्रम में, हम मानव मैक्रोफेज साथ काम कर मॉडल का उपयोग करने की जरूरत है. इसलिए, हम यहाँ का उपयोग करने के लिए आसान है और विभिन्न बृहतभक्षककोशिका पुलिस में जिसके परिणामस्वरूप विभिन्न परिस्थितियों में इन विट्रो में मानव monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज के अध्ययन की अनुमति देता है कि मानव प्राथमिक बृहतभक्षककोशिका पीढ़ी के एक मॉडल का वर्णनlarization प्रकार. कई अध्ययनों में, हम बृहतभक्षककोशिका जीव विज्ञान और 5-7 मानव atherosclerosis करने के लिए अपने संभावित प्रासंगिकता का विश्लेषण करने के लिए monocyte व्युत्पन्न प्राथमिक मानव मैक्रोफेज की इन विट्रो मॉडल में इस्तेमाल किया है.
हालांकि पूरी तरह से पोस्टमार्टम प्राप्त पशु या मानव ऊतकों के साथ प्रयोगों की जगह नहीं है, यहाँ वर्णित मॉडल रोग तंत्र और विभिन्न मानव रोगों के लिए प्रासंगिक हो सकता है कि चिकित्सकीय लक्ष्यों की पहचान और सत्यापन की अनुमति देता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
Monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज सहज प्रतिरक्षा प्रणाली की कुंजी सेल प्रकार का प्रतिनिधित्व करते हैं. वे atherosclerosis या कैंसर 2 सहित कई भड़काऊ रोगों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. इस प्रकार, बृहतभक्षककोश…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए नादिन Wambsganss धन्यवाद. इस काम में सीएजी को अभिनव कोष फ्रंटियर (हीडलबर्ग विश्वविद्यालय) से अनुदान द्वारा ड्यूश Forschungsgemeinschaft (GL599/1-1) से अनुदान द्वारा और भाग में समर्थित किया गया
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| 50 ml centrifuge tube (sterile) | Fisher | 055398 | |
| D-PBS (1X), liquid (no calcium or magnesium) | Invitrogen | 14190-250 | |
| EDTA | Sigma | T9285 | |
| BSA | Sigma | A-8806 | |
| FCS | Invitrogen | ||
| EasySep Human Monocyte Enrichment Kit | StemCell Technologies | 19059 | |
| EasySep Magnet | StemCell Technologies | 18000 | |
| FACS tubes | Fisher | 352008 | |
| Macrophage-SFM (1X) | Invitrogen | 12065-074 | |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | |
| Nutridoma-SP | Roche | 11011375001 | |
| human M-CSF 10 μg | Peprotech | 300-25 | |
| Cell Culture Plates 6-well | Fisher | 07-200-80 |
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